山蛭基因组DNA的提取及其PCR扩增产物的分析

利用PCR技术从海南山蛭体内分离山蛭素 (抗凝血蛋白 )基因 ,首先需获得不带有山蛭体表色素且完整的山蛭基因组DNA ,本试验通过结合使用SDS-蛋白酶裂解法和CTAB法 ,有效的去除了山蛭基因组DNA提取过程中难以去除的色素 ,得到的基因组DNA保持完整 ,无降解。以之作为模板 ,进行PCR扩增 ,获得一个长度约为 2 37bp的特异性片段 ,此片段与印度山蛭蛭素的cDNA大小几乎一致。初步表明 ,这个序列没有内含子 。

山蛭素Hs基因在甲醇毕赤酵母中表达

【目的】山蛭素基因在甲醇毕赤酵母中表达。【方法】利用PCR点突变方法改造山蛭素基因 ,将山蛭素基因克隆到pGEM Teasy载体中。对重组质粒测序 ,构建了毕赤酵母表达载体 pPIZB Hs ,然后转化有活性的GS115酵母菌株 ,筛选表达酵母菌株GS115 ,摇瓶发酵。【结果】改造的山蛭素基因在重组酵母中表达 ,重组蛋白质具有对凝血酶抑制活性。【结论】利用PCR点突变方法能改造山蛭素基因 。

海南山蛭蛭素基因的克隆和序列分析

以海南山蛭(Haemadipsahainana)基因组DNA为模板,以合成的2段30个寡聚核苷酸的序列为引物,经过PCR扩增,分离海南山蛭中的蛭素基因,获得了1条大小约237 bp的DNA片段。将其克隆到pGEM-Teasy载体中,经筛选与检测,并进行序列分析。结果显示,所克隆的海南山蛭蛭素基因的大小为231 bp,与Dr. Burkhard报道的印度山蛭蛭素cDNA序列相比,其核苷酸的同源性为99.9%。