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螺旋粉虱成虫体内细菌群落多样性的PCR-DGGE和16S rRNA文库序列分析 被引量:7
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作者 王甸洪 吴伟坚 符悦冠 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期772-781,共10页
为了解螺旋粉虱Aleurodicus dispersus体内细菌多样性和主要优势菌群结构,用PCR-DGGE和16S rRNA文库对采自于海南省番石榴上螺旋粉虱雌、雄成虫体内的细菌群落进行了分析。用PCR扩增体内细菌16S rRNA基因,构建雌、雄虫克隆文库;再用限... 为了解螺旋粉虱Aleurodicus dispersus体内细菌多样性和主要优势菌群结构,用PCR-DGGE和16S rRNA文库对采自于海南省番石榴上螺旋粉虱雌、雄成虫体内的细菌群落进行了分析。用PCR扩增体内细菌16S rRNA基因,构建雌、雄虫克隆文库;再用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法从文库中筛选不同16S rRNA基因图谱,根据图谱对克隆子进行分型。从螺旋粉虱雌、雄两个样品中共获得10种分类操作单元(operational taxonomic unit,OTUs)。以16S rRNA基因为基础构建系统发育树,系统发育分析表明,螺旋粉虱雌、雄成虫体内优势菌群主要为发酵菌属Zymobacter,杀雄菌属Arsenophonus,泛菌属Pantoea和假单胞菌属Pseudomonas。Candidatus Portiera aleyrodidarum和Arsenophonus sp.可能为其体内共生菌群,在所有样品中均可稳定地检测到。这些微生物可能对螺旋粉虱生长发育、繁殖和性比调控起到重要的协同作用。 展开更多
关键词 螺旋粉虱 总基因组DNa 16S rRNa文库 PCR-DGEE 系统发育 操作单元
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PCR-DGGE分析玉溪地区水果泡菜中细菌多样性 被引量:9
2
作者 王蓓 李淑英 +2 位作者 张翠萍 卢国理 周元清 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第4期740-746,共7页
【目的】结合自然发酵生产泡菜的原理,分析云南传统水果泡菜的细菌群落组成和结构多样性,探索泡菜发酵过程中的微生物机制。【方法】采用PCR-DGGE和构建16S rRNA基因文库的方法,对从玉溪市场购买的萝卜、黄瓜、梨3种泡菜样品中细菌群落... 【目的】结合自然发酵生产泡菜的原理,分析云南传统水果泡菜的细菌群落组成和结构多样性,探索泡菜发酵过程中的微生物机制。【方法】采用PCR-DGGE和构建16S rRNA基因文库的方法,对从玉溪市场购买的萝卜、黄瓜、梨3种泡菜样品中细菌群落结构进行研究。【结果】玉溪地区自然发酵泡菜中的细菌种类比较丰富,由于不同水果泡菜的营养基质和附着在蔬菜表面及内在的细菌群落结构不同,导致细菌种类在不同泡水果中所占的相对丰度有较大差异。乳酸菌属(Lactobacillus sp.)在泡水果中并非优势种群,但丘状乳杆菌(Lactobacillus collinoides)在发酵中发挥着重要的作用。此外,在散称泡菜液中检测出部分致病菌,主要为肠球菌属(Enterococcus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)和不动杆菌属(Acinetobacter sp.),推测市场上散称泡菜容易滋生致病菌,可能存在一定安全风险。【结论】PCR-DGGE技术能够高效、精确地检测到水果泡菜的细菌多样性。泡菜微生物的组成是指示泡菜安全性的一个重要指标。 展开更多
关键词 水果泡菜 细菌多样性 16S RRNa基因 变性梯度凝胶电泳(dgge)
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PCR-DGGE技术检测β珠蛋白外显子Ⅰ及相邻片段突变的研究 被引量:1
3
作者 潘晖榕 吴少庭 +5 位作者 戴五星 李明 雷明军 林绮萍 黄达娜 张仁利 《中国热带医学》 CAS 2003年第6期731-733,共3页
目的 建立用于分析 β珠蛋白基因外显子 1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳 (DGGE)技术。 方法 应用巢式PCR扩增 2 0例 β地贫病人的 β珠蛋白基因外显 1及相邻片段 ,通过垂直DGGE及time -travelDGGE确定并优化平行DGGE条件 ,然后... 目的 建立用于分析 β珠蛋白基因外显子 1及相邻片段突变的变性梯度凝胶电泳 (DGGE)技术。 方法 应用巢式PCR扩增 2 0例 β地贫病人的 β珠蛋白基因外显 1及相邻片段 ,通过垂直DGGE及time -travelDGGE确定并优化平行DGGE条件 ,然后对样本进行平行DGGE分析。 结果  2 0例样本 β珠蛋白外显子 1及相邻片段上的三种突变均能被检出。 结论 所建立PCR -DGGE技术可用于准确检测 β珠蛋白基因外显子 展开更多
关键词 PCR—dgge技术 检测 β珠蛋白外显子Ⅰ 相邻片段突变 研究 变性梯度凝胶电泳 Β地中海贫血
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变性梯度凝胶电泳分析PAH基因外显子3突变 被引量:2
4
作者 张眉 张雅芬 +3 位作者 叶军 黄晓东 陈瑞冠 顾学范 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1996年第4期229-232,共4页
采用PCR、变性梯度凝胶电泳、限制性内切酶分析及DNA直接序列分析等方法,对58例南方地区中国人苯丙酮尿症(PKU)的苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子3进行了分析,发现9例PKU患者外显子3存在突变,占PKU患者的... 采用PCR、变性梯度凝胶电泳、限制性内切酶分析及DNA直接序列分析等方法,对58例南方地区中国人苯丙酮尿症(PKU)的苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因外显子3进行了分析,发现9例PKU患者外显子3存在突变,占PKU患者的15.52%(9/58),外显子3突变占PAH基因突变的7.76%(9/116),6例患者存在ArglllTer错义突变,该突变位点的基因内频率为5.17%。结果提示中国南方和北方人群PKU分子遗传学可能存在一定程度的差异。 展开更多
关键词 苯丙氨酸羟化酶 基因突变 PCR 苯丙酮尿症
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变性梯度凝胶电泳检测轻型血友病甲的基因突变(Arg1689Cys)
5
作者 阮长耿 顾建明 +1 位作者 J-MLavergn DMeyer 《血栓与止血学》 1996年第2期49-51,96,共4页
血友病甲是一种常见的遗传性出血性疾病,由因子FⅧ缺乏引起。应用聚合酶链反应和变性梯度凝胶电泳技术,在一例轻型血友病甲患者的因子Ⅷ基因第14号外显子3’端发现碱基替换;直接测序表明密码子CGC突变为TGC,导致FⅧ蛋白Arg1689Cys,使凝... 血友病甲是一种常见的遗传性出血性疾病,由因子FⅧ缺乏引起。应用聚合酶链反应和变性梯度凝胶电泳技术,在一例轻型血友病甲患者的因子Ⅷ基因第14号外显子3’端发现碱基替换;直接测序表明密码子CGC突变为TGC,导致FⅧ蛋白Arg1689Cys,使凝血活化FⅧ发生障碍。该突变同时产生一个PstⅠ限制性酶切位点,该突变已证实与血友病相关。 展开更多
关键词 血友病甲 基因突变 变性梯度凝胶电泳(dgge)
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Microbial Community Dynamics During Biogas Slurry and Cow Manure Compost 被引量:9
6
作者 ZHAO Hong-yan LI Jie +3 位作者 LIU Jing-jing Lü Yu-cai WANG Xiao-fen CUI Zong-jun 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第6期1087-1097,共11页
This study evaluated the microbial community dynamics and maturation time of two compost systems: biogas slurry compost and cow manure compost, with the aim of evaluating the potential utility of a biogas slurry comp... This study evaluated the microbial community dynamics and maturation time of two compost systems: biogas slurry compost and cow manure compost, with the aim of evaluating the potential utility of a biogas slurry compost system. Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), gene clone library, temperature, C/N ratio, and the germination index were employed for the investigation, cow manure compost was used as the control. Results showed that the basic strip and dominant strips of the DGGE bands for biogas slurry compost were similar to those of cow manure compost, but the brightness of the respective strips for each system were different. Shannon-Weaver indices of the two compost systems differed, possessing only 22% similarity in the primary and maturity stages of the compost process. Using bacterial 16S rRNA gene clone library analysis, 88 bacterial clones were detected. Further, 18 and 13 operational taxonomic units (OTUs) were present in biogas slurry and cow manure compost, respectively. The 18 OTUs of the biogas slurry compost belonged to nine bacterial genera, of which the dominant strains were Bacillus sp. and Carnobacterium sp.; the 13 OTUs of the cow manure compost belonged to eight bacterial genera, of which the dominant strains were Psychrobacter sp., Pseudomonas sp., and Clostridium sp. Results demonstrated that the duration of the thermophilic phase (more than 50°C) for biogas slurry compost was 8 d less than the according duration for cow manure compost, and the maturation times for biogas slurry and cow manure compost were 45 and 60 d, respectively. It is an effective biogas slurry assimilate technology by application of biogas slurry as nitrogen additives in the manufacture of organic fertilizer. 展开更多
关键词 biogas slurry fermentation compost denaturing gradient gel electrophoresis dgge gene clone library MaTURITY
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Cultivation-Independent Analysis of the Development of the Lactobacillus spp.Community in the Intestinal Tract of Newborn Piglets 被引量:7
7
作者 YAO Wen ZHU Wei-yun +1 位作者 Hauke Smidt Martin W A Verstegen 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第3期438-447,共10页
Molecular diversity and development of the Lactobacillus community in the intestinal tract, as influenced by age and intestinal compartment, were studied in one litter of 12 conventionally raised piglets. Piglets were... Molecular diversity and development of the Lactobacillus community in the intestinal tract, as influenced by age and intestinal compartment, were studied in one litter of 12 conventionally raised piglets. Piglets were euthanized at each week (3 animals per time). Digesta and tissue samples from stomach, duodenum, jejunum, ileum, caecum, colon, and rectum were collected and analysed by using 16S ribosomal RNA-based methods. DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) profiles revealed that the Lactobacillus communities throughout the GI tract from duodenum to rectum showed good stability at same age. This indicates that fecal Lactobacillus communities can effectively represent the intestinal community. Two dominant bands were found in tissue samples of the small intestine, suggesting that the lactobacilli can adhere to the small intestinal wall. The Lactobacillus communities in different GI tract compartments developed over time. A successional change of Lactobacillus communities was observed from birth, through creep feeding to one week after weaning, showing a trend from simple to complex and back to simple. Furthermore, a clone library of Lactobacillus spp. 16S rRNA gene sequences were generated from jejunal and colonic chymes. Six dominant DGGE bands generated from jejunal chymes were matched with sequences that show 94-98% similarity to the bands derived from L. reuteri, L. delbrueckii, and L. crispatus. Seven dominant DGGE bands generated from colon chymes were matched with sequences that show 88-99% similarity to those derived from L. reuteri, L. delbrueckii, L. amylovorus/L. sobrius, and L. acidophilus. Amplicons related to L. reuteri were found in all DGGE fingerprints from jejunal digesta of age of weeks 1, 3, and 4. Amplicons related to L. amylovorus/L. sobrius were present in all DGGE fingerprints from colonic digesta of age of week 1, 3, and 4. Amplicons related to L. delbrueckii were found before weaning, L. crispatus after creep feeding before weaning and L. acidophilus after weaning. This indicates that L. reuteri and L. amylovorus/L. sobrius probably belong to the permanent composition, while L. delbruckii, L. acidophilus, and L. crispatus probably belong to the temporal groups of Lactobacillus communities in the GI tract of piglets. 展开更多
关键词 molecular diversity 16S rRNa gene denaturing gradient gel electrophoresis dgge Lactobacillus community PIGLETS
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73例中国人血友病甲基因突变的分析 被引量:5
8
作者 刘建湘 张宇舟 +7 位作者 王鸿利 黄秋花 曹文俊 王学锋 邵慧珍 王振义 陈竺 黄薇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期1-6,共6页
我们用Southernblotting、PCR、变性梯度凝胶电泳(DGGE)和DNA测序等方法对73例血友病甲患者(经上海瑞金医院测定血浆FVⅢ:C和vWF:Ag诊断,其中无亲缘关系患者65例,按FVⅢ:C水平分为轻... 我们用Southernblotting、PCR、变性梯度凝胶电泳(DGGE)和DNA测序等方法对73例血友病甲患者(经上海瑞金医院测定血浆FVⅢ:C和vWF:Ag诊断,其中无亲缘关系患者65例,按FVⅢ:C水平分为轻、中、重三型。FVⅢ:C<2%为重型,共47例;FVⅢ:C2%~5%为中型,共9例;FVⅢ:C5%~25%为轻型,共17例)进行FVⅢ基因突变检测。共检出内含子22倒位23例,均为重型,约占重型的49%,与国外报道相似。余下50例(其中无亲缘关系者45)用PCR-DGGE分析所有外显子及其侧翼内含子序列,发现异常条带则进行DNA测序。在17例患者中检出突变13种,其中无义突变5种,均为重型;错义突变6种,除1例外都是轻中型;小缺失2例,都是重型;其中,AA466Lys(AAG)-Thr(ACG),719Tyr(TAC)-Stop(TAG),AA826Asp(GAC)-Glu(GAA),312Ile(ATC)-xxC及AA1551-1552del(AGAA)为新发现的突变。有亲缘关系的患者都有相同的基因突变,而在无亲缘关系患者未发现相同突变。基因突变与临床表现基本相符。 展开更多
关键词 血友病甲 基因突变 梯度凝胶电泳 DNa
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不同年限毛竹林土壤固氮菌群落结构和丰度的演变 被引量:11
9
作者 何冬华 沈秋兰 +4 位作者 徐秋芳 陈俊辉 程敏 毛新伟 李永春 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期934-942,共9页
应用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)和荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,q PCR)方法研究了不同年限毛竹林土壤固氮菌群落结构和丰度的变化。结果表明:土壤p H、有机质、有效磷、... 应用变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)和荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,q PCR)方法研究了不同年限毛竹林土壤固氮菌群落结构和丰度的变化。结果表明:土壤p H、有机质、有效磷、速效钾和铵态氮含量在马尾松林改造成毛竹林5 a后明显提高,而后逐渐降低,并趋于稳定;土壤固氮菌多样性和nif H基因丰度也呈现相似的趋势。条带测序分析表明,毛竹林土壤固氮菌均为不可培养的固氮菌,与慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp.)具有较高的相似度。冗余分析结果表明,不同栽培年限毛竹林地土壤固氮菌群落组成发生了明显变化,长期栽培毛竹林引起的土壤养分变化对土壤固氮菌多样性具有重要影响。 展开更多
关键词 毛竹林 NIFH基因 多样性 变性梯度凝胶电泳
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分子生物学技术在产甲烷古菌研究中的应用 被引量:13
10
作者 王刘阳 尹小波 胡国全 《中国沼气》 2008年第1期19-24,共6页
鉴于产甲烷古菌在环境和能源两大方面的特殊作用,对它的研究一直是微生物学研究的焦点之一。现代分子生物学技术的发展与应用,进一步推动了对产甲烷古菌的研究。本文将综述产甲烷古菌基因克隆研究进展以及几项有代表性的分子生物学技术... 鉴于产甲烷古菌在环境和能源两大方面的特殊作用,对它的研究一直是微生物学研究的焦点之一。现代分子生物学技术的发展与应用,进一步推动了对产甲烷古菌的研究。本文将综述产甲烷古菌基因克隆研究进展以及几项有代表性的分子生物学技术在产甲烷古菌研究中的应用。 展开更多
关键词 产甲烷古菌 基因克隆 dgge TGGE FISH
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微生物分子生态学进展[综述] 被引量:8
11
作者 刘志培 杨惠芳 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 1999年第S1期43-48,共6页
This paper summarizes some molecular techniques applied in the studies on microbial ecology, such as hybridization of nucleic acid probes, ampification of polymerase chain reaction, denaturing gradient gel electrophor... This paper summarizes some molecular techniques applied in the studies on microbial ecology, such as hybridization of nucleic acid probes, ampification of polymerase chain reaction, denaturing gradient gel electrophoresis and analyses of ribosomal RNA gene sequences, and the progress, performance, achievements and advances made from the researches of microbial ecology in recent years by using these molecular techniques. 展开更多
关键词 微生物分子生态学 杂交 PCR 变性梯度凝胶电泳 核糖体RNa基因
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不同地区粘豆包酸面团中微生物多样性分析 被引量:8
12
作者 陶东娅 金银旗 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2016年第13期156-159,共4页
本研究以采集自黑龙江不同县的粘豆包酸面团为研究对象,利用变性梯度凝胶电泳和基因测序技术对上述样品中的细菌和真菌的多样性进行揭示。结果表明:在4种样品中细菌的多样性高于真菌,并发现了7种不同的细菌菌种,4个不同的真菌菌种,其中... 本研究以采集自黑龙江不同县的粘豆包酸面团为研究对象,利用变性梯度凝胶电泳和基因测序技术对上述样品中的细菌和真菌的多样性进行揭示。结果表明:在4种样品中细菌的多样性高于真菌,并发现了7种不同的细菌菌种,4个不同的真菌菌种,其中以乳杆菌属中的微生物最为丰富。通过不同地区样品多样性的比较发现:粘豆包酸面团中微生物的多样性与收集地之间存在一定的联系。 展开更多
关键词 粘豆包酸面团 微生物多样性 变形梯度凝胶电泳 基因测序
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分子生态学方法对油藏细菌群落结构分析的比较 被引量:1
13
作者 伊丽娜 马原栋 +2 位作者 崔庆锋 俞理 郑文涛 《科学技术与工程》 北大核心 2014年第21期46-51,共6页
目前对油藏细菌群落结构分析方法繁多,为得到准确全面的群落分析结果,必须选取合适的方法。群落分析方法的优劣进行比较分析,选取从新疆陆梁油田注水井筛出的11株单菌,测定其16srDNA序列,制成包含7个菌属、9个菌种的混合菌液。应用基于... 目前对油藏细菌群落结构分析方法繁多,为得到准确全面的群落分析结果,必须选取合适的方法。群落分析方法的优劣进行比较分析,选取从新疆陆梁油田注水井筛出的11株单菌,测定其16srDNA序列,制成包含7个菌属、9个菌种的混合菌液。应用基于PCR扩增的三种分子生态技术DGGE、T-RFLP、建立16SrDNA文库比较和分析了混合菌液细菌多样性。使用PCR-DGGE方法时发现,DGGE方法可灵敏地检测到序列1 bp的变化,能将不同菌株分开,但该方法经过切胶测序后的的目标序列较短,信息量不大且有时有一定误差,较适合用于定性对比;而用于菌群结构的分析时应结合其他方法。T-RFLP法可区分大部分菌属,但数据库不够完整,不能确定细菌群落组成;因此也不适合单独用在细菌群落检测中,可用作多个样品种群多样性的对比或结合其他方法对样品进行系统透彻解析。建立16srDNA克隆文库法成功鉴定到7个菌属8个菌种16SrDNA序列,更适用于油藏细菌群落结构的分析。 展开更多
关键词 油藏 细菌群落结构 分子生物学 16SrDNa基因 变性梯度凝胶电泳(dgge) 克隆文库T-RFLP
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起始pH值对海洋混合菌群产氢量的影响
14
作者 刘洪艳 王广策 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期43-48,共6页
对采自天津潮间带的污泥进行热休克处理,厌氧条件下富集混合菌群进行产氢试验;设置起始pH从4.0到8.0(间隔0.5个单位),比较混合菌群在不同pH培养条件下产氢量;利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析不同起始pH培养条件下的混合菌群组成。结果表... 对采自天津潮间带的污泥进行热休克处理,厌氧条件下富集混合菌群进行产氢试验;设置起始pH从4.0到8.0(间隔0.5个单位),比较混合菌群在不同pH培养条件下产氢量;利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析不同起始pH培养条件下的混合菌群组成。结果表明,在起始pH为7.0时,混合菌群产氢量最高。不同起始pH对产氢量的影响,依次为pH 6.5>pH 7.5>pH 8.0>pH 6.0>pH 5.5>pH 5.0>pH 4.5>pH 4.0。混合菌16S rRNA基因的PCR扩增产物经DGGE分离,电泳图谱表明,不同起始pH条件下混合菌群的优势菌相同,PCR产物的测序结果与Clostridium sp.存在比较高相似度(98%)。Fe-氢酶基因扩增产物在DGGE电泳图谱中存在一条特异条带,其测定序列与Clostridium perfringens氢酶基因相似度为98%。不同起始pH条件下混合菌群的产氢菌基本相同,混合菌群产氢量之间的差异可能在于起始pH对混合菌群Fe-氢酶基因活性的影响,有待进一步研究确定。 展开更多
关键词 起始pH 产氢量 变性梯度凝胶电泳 16S RRNa基因 Fe-氢酶基因
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汉族儿童TPMT基因全蛋白编码区SNP检测与分析 被引量:3
15
作者 谢偲 岳丽杰 +4 位作者 陈小文 郑苗苗 杨春兰 丁慧 任艳飞 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期683-686,共4页
目的分析汉族儿童巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因的蛋白质编码区(CDS)突变,探讨其在急性白血病(AL)患儿中的单核苷酸多态性(SNP)。方法变性梯度凝胶电泳结合DNA测序检测103例AL患儿及111例对照组儿童的TPMT基因CDS碱基位点突变情况。结果... 目的分析汉族儿童巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)基因的蛋白质编码区(CDS)突变,探讨其在急性白血病(AL)患儿中的单核苷酸多态性(SNP)。方法变性梯度凝胶电泳结合DNA测序检测103例AL患儿及111例对照组儿童的TPMT基因CDS碱基位点突变情况。结果汉族儿童TPMT基因筛查出2个蛋白编码区单核苷酸多态性(cSNPs),分别为TPMT*3C(A719G)和*1S(C474T)。TPMT*3C AA、AG、GG基因型频率在AL患儿组中分别为95.1%、3.9%和1.0%,在对照组中分别为97.3%、2.7%和0,其G等位基因频率分别为2.9%和1.4%;TPMT*1S CC、CT、TT基因型频率在AL患儿组分别为5.8%、24.3%和69.9%,在对照组中分别为8.1%、28.8%和63.1%,其C等位基因频率分别为18.0%和22.5%。2个cSNPs基因型及等位基因频率在两组中分布差异无统计学意义(P>0.05)。对照组筛查出C210T和TPMT*26(T622C)基因突变。结论汉族儿童存在TPMT*26突变基因型,且TPMT*3C、TPMT*1S可能均与儿童AL易感性无关。 展开更多
关键词 巯嘌呤甲基转移酶 急性白血病 变性梯度凝胶电泳 蛋白质编码区 单核苷酸多态性 基因突变
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Succession of Denitrifying Community Composition in Coastal Wetland Soils Along a Salinity Gradient 被引量:8
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作者 PIAO Zhe ZHANG Wen-Wen +2 位作者 MA Shuai LI Yu-Min YIN Shi-Xue 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2012年第3期367-374,共8页
To better understand the effect of salinity on denitrification communities,soils along a salinity gradient (ranging from 7.32 to 1.70 mS cm 1) in a wetland along the Yellow Sea coastline in Jiangsu Province,China,were... To better understand the effect of salinity on denitrification communities,soils along a salinity gradient (ranging from 7.32 to 1.70 mS cm 1) in a wetland along the Yellow Sea coastline in Jiangsu Province,China,were studied using both culture-dependent and-independent methods.Culture efforts yielded 82 isolates in total,81.7% of which were close relatives of Bacillus sp.based on partial sequences of their 16S rRNA genes.Denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) analysis based on 16S rRNA sequences suggested possible existence of bacterial community succession along the salinity gradient.Clone library analysis based on nosZ gene sequences (coding nitrous oxide reductase) showed that operational taxonomic units (OTUs) associated with α-proteobacteria dominated in all three soils,whereas those associated with β-and γ-subdivisions showed a clear succession.In the high salinity soil,only the OTUs associated with α-subdivision were found.In the medium salinity soil,small proportions of β-(6.5%) and γ-associated (19.6%) OTUs were found.In the low salinity soil,the proportions were further increased to 33% and 25% for β-and γ-Proteobacteria,respectively.Statistic analysis using Unifrac P test showed that nosZ-communities in different saline soils were significantly different from each other.It could be concluded that α-subdivision of nosZ-community tended to be sustained in high salinity environments whereas β-and γ-subdivisions,especially the former,tended to be sustained in low salinity environments.Salinity was the key determinant of nosZ-community composition in the environment. 展开更多
关键词 湿地土壤 盐度梯度 群落组成 海岸线 RRNa基因序列 反硝化 变性梯度凝胶电泳 社区环境
原文传递
127例PKU患者PAH基因第12外显子点突变及其频率研究 被引量:5
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作者 邱文娟 张雅芬 +2 位作者 叶军 韩连书 顾学范 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期261-263,共3页
目的 了解中国人苯丙酮尿症 ( phenylketonuria,PKU)患者的苯丙氨酸羟化酶( phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第 12外显子点突变种类和频率。方法 应用单链构象多态性( single strand conformation polymorphism,SSCP)、变性梯度... 目的 了解中国人苯丙酮尿症 ( phenylketonuria,PKU)患者的苯丙氨酸羟化酶( phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第 12外显子点突变种类和频率。方法 应用单链构象多态性( single strand conformation polymorphism,SSCP)、变性梯度凝胶电泳 ( denaturing gradient gelelectrophoresis,DGGE)、DNA测序分析了 12 7例 PKU患者的 PAH基因第 12外显子点突变种类及频率。结果  DNA测序分析显示 10例患者存在 R4 13P、S4 11X、R4 0 8W、R4 0 8Q 4种杂合突变 ,其突变频率分别为 2 .76 %、0 .39%、0 .39%、0 .39% ,S4 11X突变为中国人中首次报道。 SSCP分析仅发现 2例 R4 13P杂合突变 ,DGGE分析显示 10例出现 3种类型的异常电泳带型。R4 13P突变在南北方人之间、在经典型 PKU和高苯丙氨酸血症之间的分布差异无显著性。结论  DGGE对 PAH基因第 12外显子点突变检出率明显高于 SSCP。 DGGE结合 DNA测序是明确 PAH基因第 12外显子点突变种类和频率较好的方法。 R4 展开更多
关键词 苯丙氨酸羟化酶基因 基因突变 单链构象多态性 变性梯度凝胶电泳 苯丙酮尿症
原文传递
2A型血管性血友病vWF的基因突变
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作者 王迎春 张敬宇 +3 位作者 张威 程大卫 万海英 阮长耿 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第4期229-232,共4页
目的 研究中国人 2 A型血管性血友病 (von Willebrand disease,v WD)的分子病理机理 ,了解 v WD的临床表现型和基因型的相关性。方法 对 12 6例先天性出血性疾病患者进行了出血时间、v WF∶Ag、F ∶CAg、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集... 目的 研究中国人 2 A型血管性血友病 (von Willebrand disease,v WD)的分子病理机理 ,了解 v WD的临床表现型和基因型的相关性。方法 对 12 6例先天性出血性疾病患者进行了出血时间、v WF∶Ag、F ∶CAg、瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集率的检测和 v WF的血浆多聚物分析。对 2 A型血管性血友病的患者用多聚酶链反应、变性梯度凝胶电泳 ,结合测序的方法进行了基因突变的研究。结果 确诊 2 A型血管性血友病 14例 ,在 3个家系发现了 4例 v WF的基因突变 ,它们是 Arg6 11His、Ala737Glu、Arg834 Trp,其中 Ala737Glu是 1例新的基因突变。结论  2 A型 v WD的基因突变存在高度的异质性 ,对其分子病理机理的研究有助于了解 v WF的基因结构和功能的关系。 展开更多
关键词 VWF基因 2a型血管性血友病 PCR 基因突变
原文传递
PCR-DGGE法研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变
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作者 许冰莹 黄尤光 +3 位作者 刘建兴 田兴亚 李家林 李桢 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第10期1819-1822,共4页
目的:应用PCR-DGGE法和DNA测序分析云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点.方法应用硝基四氮唑蓝(NBT)纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查,G6PD/6PGD比值法验证,应用PCR-DGGE法和DNA测序分析46例云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点。... 目的:应用PCR-DGGE法和DNA测序分析云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点.方法应用硝基四氮唑蓝(NBT)纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查,G6PD/6PGD比值法验证,应用PCR-DGGE法和DNA测序分析46例云南籍G6PD缺乏症患者基因突变类型和特点。结果:46例云南籍G6PD缺乏症样本中有30例经PCR-DGGE法分析G6PD exon 12发现有异常电泳条带,DNA测序证实26例(56.52c/o)为nt-1388G→A,4例(8.7c/o)nt-1376G→T.而PCR-DGGE法分析G6PD exon 2未发现有异常电泳条带的样本出现。结论:(1)nt-1388G→A(56.52%)、nt-1376G→T(8.7%)是云南省主要的基因突变型也是中国人中最常见的两种突变型,揭示中华民族有着共同的起源;(2)所检样本中未发现nt95A→G。(3)应用PCR-DGGE法结合DNA测序检测G6PD缺乏症患者的基因型,阳性检出率高,方法简便、快捷、灵敏、结果准确可靠。 展开更多
关键词 云南人 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因型 基因突变 PCR—dgge DNa测序
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中国南方人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7点突变及其频率分析 被引量:35
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作者 张眉 顾学范 +6 位作者 张美华 张雅芬 潘星时 黄晓东 沈永年 叶军 陈瑞冠 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期324-326,共3页
采用PCR、变性梯度凝胶电泳及DNA直接序列分析等突变分析方法,对58例中国南方人苯丙酮尿症的苯丙氨酸羟化酶外显子7进行了分析,共发现5种突变位点:IVS6nt-1、Arg241Cys、Arg243Glu、Val24... 采用PCR、变性梯度凝胶电泳及DNA直接序列分析等突变分析方法,对58例中国南方人苯丙酮尿症的苯丙氨酸羟化酶外显子7进行了分析,共发现5种突变位点:IVS6nt-1、Arg241Cys、Arg243Glu、Val245Val及Arg252Gln,其频率分别为3/116、1/116、11/116、7/116及4/116.结果提示南方人群PKU基因突变位点有别于北方人群。 展开更多
关键词 苯丙氨酸羟化酶 基因突变 基因频率 中国 南方人
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