基于网络药理学和分子对接技术探讨“黄芪-海风藤”治疗紫癜性肾炎的作用机制

目的:基于补气通络法运用网络药理学方法和分子对接技术探讨“黄芪-海风藤”药对治疗紫癜性肾炎(HSPN)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)分别检索黄芪和海风藤的活性成分及药物靶点,通过GeneCards、DisGeNET数据库查找HSPN的疾病靶点,取活性成分与疾病的交集靶点,运用Cytoscape软件构建活性成分-交集基因靶点PPI网络;经DAVID数据库分析进行GO功能和KEGG通路富集分析,运用AutoDock软件对关键活性成分与核心靶点进行分子对接。结果:筛选出黄芪活性成分10个,海风藤活性成分18个,作用靶点205个,HSPN疾病靶点795个,药物与HSPN共同靶点基因73个;GO功能分析涉及凋亡过程的负反馈、肿瘤坏死因子受体结合等调控,KEGG通路富集分析涉及肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-17(IL-17)等信号通路。分子对接显示连接度排名前4位的药对活性成分槲皮素、豆甾醇、海风藤酮与关键核心靶点基质金属肽酶-9(MMP-9)、TNF、肿瘤蛋白P53(TP53)具有较好的结合活性。结论:研究初步验证“黄芪-海风藤”治疗HSPN作用机制,并为进一步研究提供科学依据。

海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响

目的:探究海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响及可能机制。方法:将b End.3细胞分为阴性对照组,模型组(Aβ_(1-42)20μmol/L),海风藤水煎剂低中高剂量组(Aβ_(1-42)20μmol/L+海风藤0.5,1,5 mg/m L);(1)利用噻唑蓝(MTT)法检测海风藤水煎剂对Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞活力的影响;(2)利用Hoechst33258染色法鉴定b End.3细胞的凋亡情况;(3)Western Blot法检测死亡受体凋亡信号通路相关蛋白Caspase-8,Cleaved Caspase-8,Caspase-3及Cleaved Caspase-3的表达水平。结果:MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组相比,海风藤低、中、高剂量组能显著提高b End.3细胞活性,抑制Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞凋亡(P<0.05),且保护作用与海风藤水煎剂浓度成正相关;Western blot显示,与模型组相比,海风藤预处理后,可明显减Cleaved Caspase-8/Caspase-8、Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值(P<0.05)。结论:海风藤能够提高b End.3细胞可能通过抑制Aβ_(1-42)诱导的死亡受体信号通路发挥其神经保护作用。

海风藤抑制淀粉样前体蛋白基因表达的研究

目的：研究海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系列淀粉样前体蛋白（βＡＰＰ）基因表达的抑制作用。方法：应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交观察βＡＰＰｍＲＮＡ的变化，应用细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放、细胞集落观察海风藤对神经细胞的直接作用。结果：海风藤选择性的抑制βＡＰＰ基因表达。实验浓度内未发现细胞毒性作用。结论：βＡＰＰ与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病（ＡＤ）的发病关系密切。

海枫藤花粉块壁剥离与花粉形态探究

研究了不同方法对海枫藤花粉块的分离效果.在20%KOH溶液10 min处理后解剖的分离效果令人满意,海枫藤花粉粒多为不规则形状.

海风藤对氯化钴诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究海风藤对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞凋亡的分子机制,从而确定海风藤对缺氧诱导的神经细胞凋亡的保护作用。方法设立海风藤保护组,CoCl2诱导组和正常细胞对照组;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量和活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl的表达。结果海风藤预保护的PC12细胞在CoCl2诱导后,与CoCl2诱导组相比,细胞形态有明显改善,细胞存活率显著上升,由28.7%变为65.1%(P<0.01);培养基中LDH含量和ROS生成量明显下降,相应吸光度分别由29.8和18.3变为18.33及7.8(P<0.01);细胞ATP释放量明显增加,保护组为诱导组的1.2倍(P<0.01);基因bcl-xl表达上升;Caspase-3在细胞凋亡中的活性被抑制,保护组为诱导组的81%(P<0.01)。结论海风藤能通过抑制氧化应激损伤对线粒体功能破坏,增强bcl-xl的表达,抑制Caspase-3激活等机制提高细胞存活率,达到抑制CoCl2诱导PC12细胞凋亡作用。

海风藤对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨海风藤水提物对叠氮钠(NaN3)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:将叠氮钠(50mmol.L-1)与PC12细胞共孵育,采用MTT法测定细胞存活力;采用比色法测定细胞乳酸脱氢酶漏出率;采用Fura 2-AM双波长荧光扫描法测定细胞内钙离子内流的浓度。结果:50mmol.L-1叠氮钠与PC12细胞共孵育8h后,细胞存活率明显下降;0.1mg.mL-1海风藤水提物能显著性对抗叠氮钠致神经细胞存活率下降,能显著性降低细胞LDH漏出率,能显著性降低叠氮钠引起的钙离子内流。结论:海风藤对叠氮钠诱导的细胞损伤具有显著性保护作用,可能具有治疗阿尔茨海默病的作用。

海风藤化学成分研究

从海风藤的95％乙醇提取物中分得11个化合物。本文报道其中6个化合物的结构及生物活性测定,根据理化性质及波谱分析,分别鉴定为蜡酸(Ⅰ),胡萝卜甙(Ⅱ),denudatin B(Ⅲ),burchellin(Ⅳ),Veraguensin(Ⅴ)和galgravin(Ⅵ)。晶Ⅴ为首次从该植物中分离得到。从Ⅲ、Ⅳ对小鼠淋巴细胞转化的影响结果,证明二者均具有一定的免疫抑制作用。

基于“血实宜决之”理论运用网络药理学讨论丹参-海风藤治疗紫癜性肾炎的作用机制

目的:基于“血实宜决之”理论运用网络药理学讨论丹参-海风藤治疗紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein Purpura Nephritis,HSPN)的作用机制。方法:“血实宜决之”出自《素问•阴阳应象大论篇》,是活血化瘀法的治疗总纲。基于“血实宜决之”理论,选取“丹参-海风藤”作为研究药物。使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取丹参-海风藤的活性成分和其对应的靶点。借助GeneCards数据库、DisGenet数据库获取HSPN的致病靶点。使用在线绘图工具微生信获得药物-疾病交集靶点,导入Cytoscape 3.9.1绘制“药物-主要活性成分-疾病-靶点”图。采用STRING数据库获取交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)网络信息,并通过CytoNCA插件筛选出治疗HSPN的核心靶点。利用Metascape数据库对交集靶点进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用AutoDuck Vina对核心成分与核心靶点进行分子对接验证。结果:本研究筛选丹参-海风藤治疗HSPN的靶点47个,对应2个药物(丹参、海风藤)、74个活性成分(其中丹参56个活性成分、海风藤18个活性成分)。筛选出核心靶点15个,包括基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)-9、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、肿瘤蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)、MYC基因、信号转导因子和转录激活因子3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3,STAT3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase,CASP3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma,PPARG)基因、前列素内环氧化物合成酶2(Prostaglandin-endoperoxide Synthase 2,PTGS2)、雌激素受体(Estrogen Receptor 1,ESR1)、淀粉样β前体蛋白(Amyloid Beta Precursor Protein,APP)、MMP1、一氧化氮合成酶3(Nitric Oxide Synthase 3,NOS3)。GO富集分析得到基因信息共1119条。KEGG富集分析得到通路141条,主要包括晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End Products,AGE)-晚期糖基化终末产物受体(Advanced Glycation End Product Receptor,RAGE)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-Akt信号通路、缺氧诱导因子(Hypoxia Inducible Factor,HIF)-1信号通路、IL-17信号通路、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)信号通路、Relaxin信号通路、细胞凋亡通路(Apoptosis)等。分子对接的结果表明核心成分与核心靶点的分子对接结果均小于–5 kcal/mol,可以稳定结合。结论:“丹参-海风藤”可以基于“血实宜决之”理论通过多种成分、多个靶点、多条通路来治疗HSPN,主要涉及其抗炎、抗氧化、抗纤维化、调控细胞缺氧、促进细胞凋亡等方式。