黄芪总黄酮对BEL-7402细胞的体外抑制作用

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragalus,TFA)在体外实验条件下对人肝癌细胞(BEL-7402)生长、繁殖的影响。方法:以BEL-7402细胞为实验对象,5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照,比较观察了不同浓度的TFA与BEL-7402细胞共同培养不同时间后,TFA对BEL-7402细胞的形态学、细胞存活曲线、细胞生长曲线和细胞有丝分裂指数的影响。结果:数据表明TFA处理48h半数抑制浓度(IC50)为40μg/m l,5-FU为0.3μg/m l;TFA浓度达80μg/m l时可使BEL-7402细胞生长明显受挫(P<0.05),有丝分裂指数下降;与对照比较细胞形态主要表现为胞浆中颗粒明显增多,胞浆出现大量空泡,核固缩。结论:TFA对BEL-7402细胞生长繁殖具有抑制作用。

罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1的影响

目的 CYP2E1是肝脏中主要的药物代谢酶,在肝脏疾病发生及发展中发挥重要的作用。本实验分别通过体内、体外实验,研究罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1活性和表达的影响,为评价罗布麻茶对肝脏的保护作用和药物的联合使用提供理论依据。方法将30只昆明小鼠随机分为空白对照组、黄酮提取物低剂量组和高剂量组(50和100 mg/kg),连续灌胃给药10天。采用探针药物法测定小鼠肝脏微粒体中CYP2E1催化对硝基苯酚代谢的活力。采用Western Blot法检测肝脏微粒体中CYP2E1蛋白的表达情况。体外抑制实验中,考察不同浓度的黄酮提取物对CYP2E1的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC_(50))值。结果灌服高剂量黄酮提取物(100 mg/kg)后,小鼠体内CYP2E1酶活性和表达量均显著降低,黄酮提取物对CYP2E1的IC_(50)值为128.4μg/mL。结论罗布麻茶黄酮提取物对小鼠CYP2E1有抑制作用。

蒜头果蛋白对HeLa细胞体外抗肿瘤活性及稳定性研究

蒜头果是一种单种属稀有植物,仅分布在云南、广西部分地区.将蒜头果种仁捣碎,采用离心、(NH 4)2SO 4沉淀及色谱层析等方法得到蒜头果蛋白(Malanin).MTT法测定Malanin对人宫颈癌HeLa细胞体外抗肿瘤活性并测定其与广谱抗癌药物顺铂(DDP)联合用药的效果,再测定Malanin的稳定性及贮存方式.结果表明,Malanin对HeLa细胞具有明显的抑制作用,其IC 50值非常小,仅为9.55×10^(-6)g/L,明显比DDP(IC_(50)值为4.76×10^(-4)g/L)的抗肿瘤活性强,且Malanin和DDP联合应用具有协同抑制效应,二者联合应用药效会相加;Malanin的稳定性很好,不易失活,便于贮存在冰箱中.此研究为Malanin在肿瘤治疗方面的开发利用打下基础,也对云南植物资源的开发利用具有重要意义.

抗心律失常药RP62 71 9对哺乳动物心室肌K^+ 电流的抑制

使用全细胞膜片箝技术 ,研究RP6 2 719对内向整流钾电流 (IK1)、瞬时外向钾电流 (Ito)和延迟外向整流钾电流 (IK)的作用 ,并探讨其抗心律失常作用的机制。实验结果表明 ,在指令电压为 - 10 0mV时 ,RP6 2 719可显著抑制豚鼠心室肌细胞IK1,半数抑制浓度 (IC50 )为 5 0± 1 0 μmol/L。RP6 2 71910 μmol/L在 + 40mV时对犬心室肌细胞Ito抑制率为 84 0± 4 4% ,IC50 为 1 2± 0 5 1μmol/L。在 + 40mV时 ,5 0 μmol/LRP6 2 719还可使豚鼠心室肌细胞IKstep减少 5 0 0± 8 3% ,IKtail减少 5 6 0± 4 9% ,IC50 分别为 4 2± 0 8μmol/L和 3 3± 0 75 μmol/L。提示RP6 2 719抗心律失常的离子机制与其对IK1、Ito及IK

氮营养形态和Ni^(2+)浓度对三角褐指藻的影响

近海海水中的氮营养元素和镍(Ni)对浮游植物的生长均有较大的影响,但它们对浮游植物的共同影响却研究较少。本文利用浮游植物荧光仪(Phyto-PAM)研究了在不同氮源下(硝态氮、尿素),不同Ni^(2+)浓度处理对三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum Bohlin)叶绿素a(Chl a)、光能转化效率(F_(v)/F_(m))和最大电子传递速率(rETR max)的影响。结果表明,与对照组相比,2种氮源下,低浓度(10μg·L^(-1))Ni^(2+)处理对三角褐指藻Chl a含量均有显著的促进作用(P<0.05),且尿素氮源高于硝酸盐氮源(P<0.05)。但是,当Ni^(2+)浓度>1 mg·L^(-1)后,均抑制三角褐指藻Chl a含量,且抑制程度呈现递增趋势(P<0.05)。应用Graphpad Prism8.0计算Ni^(2+)对三角褐指藻不同胁迫时间的Chl a、F_(v)/F_(m)和rETR_(max)半抑制浓度(EC_(50))。硝酸钠为氮源时,不同时间的Chl a EC_(50)值均低于尿素氮源。以上结果表明,随着近岸海区尿素浓度增加,三角褐指藻生长能显著被低浓度的Ni^(2+)所促进,对高浓度Ni^(2+)的耐受性增强,进而可能影响近海海洋初级生产力和浮游植物群落结构。

重组人白介素-29-Fc融合蛋白在HEK-293F细胞中的表达及体外抗肿瘤活性分析

目的在人胚肾293F(human embryonic kidney 293F,HEK-293F)细胞中表达重组人白介素-29-Fc(recombinant human interleukin-29-Fc,rhIL-29-Fc)融合蛋白,并分析其体外抗肿瘤活性。方法构建重组UCOE-IL-29-Fc表达质粒,瞬时转染HEK-293F细胞,经表达、纯化后获得rhIL-29-Fc融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定;将rhIL-29和rhIL-29-Fc蛋白分别经左耳皮下免疫雌性日本大耳白兔,每组2只,0.5 mg/只,右耳静脉采血,分离血清,ELISA法检测半衰期;CCK-8试验检测rhIL-29-Fc蛋白对人结肠癌HT-29、人结肠癌HCT-116、人Burkkit淋巴瘤Daudi、人非小细胞肺癌NCI-H1975、人小细胞肺癌NCI-H209、人食管癌EC109和人胰腺癌PANC-1细胞的体外抗增殖效果,并计算半数抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC_(50))。结果重组表达质粒UCOE-IL-29-Fc经双酶切及测序鉴定证明构建正确,瞬时转染HEK-293细胞6 d后,收获培养上清,经纯化获得的rhIL-29-Fc融合蛋白相对分子质量与预期相符,蛋白浓度为1.5 mg/mL,纯度为93%,可与小鼠抗人IL-29抗体特异性结合。rhIL-29-Fc蛋白半衰期为25 h,对7种肿瘤细胞显示出不同程度的增殖抑制效应,对不同细胞的IC50也不同。结论利用HEK-293F细胞成功表达rhIL-29-Fc融合蛋白,该融合蛋白半衰期比rhIL-29延长了20 h。根据7种肿瘤细胞显示出不同程度的体外增殖抑制效应和IC50测定结果,发现rhIL-29-Fc融合蛋白的抗肿瘤活性高于rhIL-29。该研究为IL-29蛋白治疗肿瘤的开发奠定了基础。

黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶靶点占有率的模拟分析

目的:模拟分析黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶体内靶点占有率。方法:通过体外酶促反应测定非布司他、黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度(IC_(50)),利用分子对接技术对其结合自由能进行预测,同时,采用表面等离子共振技术测定其结合速率常数(k_(on))和解离速率常数(k_(off))。基于测定的结合动力学参数和提取的药物代谢动力学数据建立体内靶点占有率模型。结果:非布司他、黄芩素、槲皮素、高良姜素对黄嘌呤氧化酶的IC_(50)分别为0.0027,1.63,0.38,1.59μmol·L^(-1),非布司他的IC_(50)与文献报道一致。预测的非布司他体内靶点占有率曲线与其临床药效持续时间相吻合。当大鼠按100 mg·kg^(-1)单次灌胃给予槲皮素长循环脂质体时,体内靶点占有率>70%的持续时间约3.9 h;当大鼠按200 mg·kg^(-1)单次口服给予黄芩素和高良姜素时,体内靶点占有率>50%的持续时间分别约为10,1.7 h。结论:利用药靶结合动力学和体内药代动力学曲线建立的黄嘌呤氧化酶靶点占有率预测模型能有效地评估化合物对靶点的体内抑制活性。