诱导牛精子体外获能的培养基及方法

用去透明带金黄地鼠异种精子体外穿透试验，检测冻精复苏经各种处理后的精子穿卵率。发现在４种基本培养基（ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ、ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ－１６４０）中不加亚牛磺酸时，牛精子不能耐受较高浓度（４μｍｏｌ／Ｌ）钙离子载体（ＩＡ）的刺激（以１０ｍｉｎ计）；而低浓度ＩＡ（低于４μｍｏｌ／Ｌ）处理精子不能诱导获能。生物活性物质，如肝素、咖啡因、亚牛磺酸、肾上腺素单独或联合低浓度ＩＡ处理精子，短期（６ｈ）内也不能诱导获能。当基本培养基中含有亚牛磺酸时，牛精子能耐受高浓度ＩＡ（１０μｍｏｌ／Ｌ）的刺激，并使牛精子获能；亚牛磺酸与肾上腺素、咖啡因联合使用，并在获能液中添加透明质酸酶时，穿卵率进一步提高，获能效果显著改善。以ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ１６４０为主的混合培养基，在牛精子的存活时间、穿卵率等方面优于ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ培养基。结果表明，用Ｆ１０和１６４０的混合培养基，添加亚牛磺酸、肾上腺素、咖啡因、透明质酸酶，经１０μｍｏｌ／ＬＩＡ处理牛精子１０～１５ｍｉｎ。

人精液的冻贮研究

目的 研究在T-G型冷冻保护剂(Cryopreservative medium, CPM)作用下，速缓冻贮法对人精子结构和功能的影响。方法 随机双盲对照, 将45份正常精液随机分组，加与不加CPM ，以速缓冷冻法分别进行冻贮，冻贮前后分别进行常规分析、低渗肿胀试验、穿卵试验、超微结构观察及精子染色体分析。结果 未加CPM组冻贮后的精液未见有精子复苏, 经冷冻保存的精子质量明显降低，缓冻法对精子的影响显著小于速冻法，精子染色体的畸变率及X/Y精子比例均未见明显变化。结论 速、缓冻贮对人精子均有负面影响，缓冻法优于速冻法，两法对精子染色体畸变率和性染色体比例未产生明显影响。

黑白花公牛冻精受精力的检测——穿透仓鼠卵的试验

本试验用SPA法(Sperm Penetration Assay)即精子穿透分析法对8头黑白花公牛冻精的受精力进行检测,以预测各公牛精液受精力的水平。结果:每卵表面平均精子数为3.2～9.5个,每卵内精子数为1.6～3.4个,被穿透的卵子比例即穿透率为34.9～65.7％,具雄原核的卵子比例即原核卵率为16.0～32.4％。这些数值与各公牛冻精授精500多头母牛的效果作对照,8头公牛平均80(70～90)天的不返情率为56％(45.8～71.1％),不返情率与雄原核卵率,穿透率呈高度正相关,相关系数分别为+0.82和+0.92。 另一组试验结果表明:授精时间对穿透率特别是对雄原核形成有很大影响。授精2小时后观察,没有雄原核形成,只有附着于卵子表面的精子;授精4小时后,精子已通过卵黄膜进入卵内,并开始形成雄原核;授精6小时后形成发育良好的雄原核。 这些观察结果有助于利用这项技术在生产上对公牛精液的受精力进行客观评定,为选择后备公牛提供重要的生理指标,特别是对评定冷冻精液的品质具有一定的参考价值。并为精子顶体反应、受精机理、体外受精、遗传学和胚胎学等领域的研究提供新的手段。

冷冻对人精子结构及功能的影响

目的：研究冷冻对人精子结构和功能的影响。方法：采集健康已生育25～35岁男性供精者精液作标本，7.5％单一甘油为冷冻保护剂(Cryopreservative agent,CPA)，每份精液分别采用速、缓降温法冷冻，冻前、后分别作精液常规分析、精尾低渗肿胀试验、精子超微结构、精子穿卵试验。 结果 ：复温后未加CPA者,均未见有复苏存活的精子；加CPA者，精子存活率、活动率、精尾低渗肿胀率、精子超微结构相对完整的百分率、穿卵率均显著下降,速冻法比缓冻法下降更明显。结论：7.5％单一甘油对人类精子具有显著的冷冻保护作用，精液冻贮对精子的结构及功能均有不同程度的损害，不同的降温速度对人精子产生不同的冷冻损伤，缓冻法降温冻贮人类精液的方法简单经济，能较好地较长时期地保持人精子功能和结构完整性。

用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力

研究了用去透明带仓鼠卵穿透试验检测牛冷冻精子的受精能力。对 36头西门塔尔、 2 3头夏洛来和 12头利木赞牛冷冻精子的实验结果表明 :三个品种的牛冻精均能穿入去透明带仓鼠卵 ,并形成发育良好的雄原核。穿透率在 70 %～ 80 %左右 ,有原核卵百分率在 30 %左右。

正常人240个人精子染色体核型分析

应用人精子与去透明带金黄地鼠卵受精技术制备人精子染色体标本，对正常男性２４０个精子核型进行了分析。结果显示，数目畸变精子率为３．３４％，结构畸变精子率为６．６７％。所观察到的结构畸变类型为无着丝粒断片，染色体断裂、双着丝粒体、易位和染色单体断裂。在正常男性精子染色体组中，Ｘ一精子与Ｙ一精子的比例为４９．１７％：５０．８３％；近端着丝粒染色体随体联合显随机分布，随体联合频率为０．０９６。对上述实验结果的意义进行了讨论。

男性生育力的研究：三种精子功能测定方法的比较

应用精液常规分析(SFA),精子尾部低渗肿胀试验(HOS)和去透明带地鼠卵穿透试验(HOP)对15名能宵男性和15名不育患者的精液样本进行了综合检测和相关分析。能育组SFA参数异常者占20％,不育组SFA参数正常者占27％;精子尾部低渗肿胀率在能育组与不育组间无显著性差异(P>0.05);精子穿透率和受精指数在两组间差异非常显著(P<0.005,P<0.001)这表明HOP试验用于男性生育力的评价是一种较为准确,可靠的手段。本文还对各实验参数间的相关关系进行了分析和讨论。