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题名从Cohn法组份Ⅳ中分离纯化人血浆蛋白C
被引量:2
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作者
王宗奎
林方昭
肖小璞
谢亦武
李长清
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机构
中国医学科学院北京协和医学院输血研究所
China Biologic Products
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出处
《中国输血杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期355-360,共6页
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基金
四川省科技支撑计划项目(2009SZ0217)
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文摘
目的探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法 ,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用。方法 4℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5h,离心(6500g)40min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化。通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性。结果纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)%,纯化倍数为(3.75±0.56)倍;固相化金属螯合亲和层析后,蛋白C活性回收率为(59.61±5.59)%,纯化倍数为(36.79±3.72)倍;蛋白C总活性回收率为(28.77±9.45)%,纯化倍数为(136.64±6.82)倍,比活性为(11.70±0.89)IU/mg。结论串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析可以从Cohn法组份Ⅳ中获得比活性较高的蛋白C浓缩物。
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关键词
cohn法组份ⅳ
蛋白C
分离
纯化
亲和层析
固相化金属螯合
比活性
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Keywords
cohn fraction ⅳ
Protein C
Isolation
purification
Immobilized metal affinity chromatography
Specific activity
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分类号
R392-33
[医药卫生—免疫学]
R457.14
[医药卫生—治疗学]
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题名离子交换层析分离纯化人结合珠蛋白的研究
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作者
闫晶晶
赵雄
马玉媛
马小伟
吕茂民
章金刚
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机构
广西医科大学
军事医学科学院壁战输血研究所血液安全保障技术研究北京市重点实验室
华兰生物工程股份有限公司
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出处
《军事医学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第7期569-572,592,共5页
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基金
国家863计划资助项目(2012AA021902)
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文摘
目的探索应用离子交换层析从Cohn组分Ⅳ分离纯化人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)的方法,并对纯化产物进行初步鉴定及活性分析。方法 Cohn组分Ⅳ溶解液稀释后经利凡诺络合,收集上清并用50%硫酸铵进行沉淀,沉淀重溶后用Q Sepharose Fast Flow层析分离纯化得到目的蛋白。然后利用SDS-PAGE及免疫印迹对目的蛋白进行鉴定,并利用Native-PAGE方法测定纯化产物的活性。结果 Cohn组分Ⅳ经过利凡诺络合及盐析处理后能有效去除部分杂蛋白,并使目的蛋白富集。利用离子交换层析方法从Cohn组分Ⅳ中纯化得到的主要产物为Hp2-2,SDS-PAGE显示Hp纯度较好,免疫印迹分析进一步证明,利用该法成功分离得到目的蛋白Hp,且利用NativePAGE方法测得目的蛋白活性为2.8 U/ml。结论利用该法从Cohn组分Ⅳ中成功分离得到人Hp,方法简单,易于放大生产,具有较好应用前景。
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关键词
结合珠蛋白
cohn组分ⅳ
纯化
鉴定
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Keywords
haptoglobin cohn fraction ⅳ purification identification
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分类号
O658.1
[理学—分析化学]
R945
[医药卫生—微生物与生化药学]
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