Harpagometabolins Ⅰ and Ⅱ, Two New Metabolites from Harpagoside by Human Intestinal Bacteria

Harpagoside, which is one main iridoid constituent of the dried roots of Scrophularia ningpoensis Hemsl., was biotransformated by bacteria isolated from human feeal flora a.d three metabolites were obtained. The structures of the metabolites, including two new alkaloids, named bar'Pagometabolins Ⅰ (l) and Ⅱ (2), and a known alkaloid acubinine B(3), were identified by chemical methods and the spectroscopic evidences.

响应面法优化玄参种芽超声提取哈巴苷、哈巴俄苷工艺

目的:优化玄参种芽提取工艺。方法:建立玄参种芽中哈巴苷、哈巴俄苷含量测定和方法,采用单因素试验,考察甲醇浓度、料液比和浸泡时间3个因素对哈巴苷、哈巴俄苷含量及总含量的影响。结合Box-Behnken响应面法,以哈巴苷、哈巴俄苷总含量为响应指标,考察甲醇浓度、料液比和浸泡时间3个因素对提取工艺的影响。结果:哈巴苷、哈巴俄苷分别在15.63~500.00μg/mL、10.63~340.00μg/mL范围内线性关系良好,哈巴苷、哈巴俄苷平均回收率分别为100.24%、100.56%,RSD分别为1.98%、1.19%。根据回归方程,结合实际操作确定的最佳提取工艺为甲醇浓度44%、料液比1∶51、浸泡25 min,理论总含量为1.84%。结论:甲醇浓度、料液比和浸泡时间对玄参种芽提取有显著影响,得到的工艺稳定可重复,与理论值接近,可为玄参种芽提取技术规范与标准提供理论基础。

超高效液相色谱串联质谱法同时测定养阴清肺合剂中3种成分含量

目的建立同时测定养阴清肺合剂中活性成分地黄苷D、哈巴苷、哈巴俄苷含量的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法。方法色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为含0.1%甲酸溶液的5 mmoL/L乙酸铵-甲醇(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,柱温为35℃,进样量为5μL;采用电喷雾离子源(ESI),正负离子模式扫描,多反应监测(MRM)。结果地黄苷D、哈巴苷、哈巴俄苷质量浓度分别在23.79~465.60 ng/mL,24.69~948.15 ng/mL,24.07~426.39 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9994,0.9996,0.9991,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为94.40%,104.82%,96.23%,RSD分别为2.84%,2.19%,1.08%(n=9)。结论所建立的方法操作简便、分析速度快、重复性好、准确度高,可用于养阴清肺合剂中3种活性成分的含量测定。

基于多种内参物的一测多评法测定金莲清热颗粒中6种成分含量

目的建立基于多种内参物的一测多评法测定金莲清热颗粒中芒果苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、藜芦酸、牡荆苷和哈巴俄苷6个成分的含量。方法以Agilent Eclipse Plus C_(18)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱),流速为1mL/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm。分别以荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷为内参物,采用一测多评法建立另外5个待测成分与内参物的相对校正因子,然后计算21批金莲清热颗粒样品中6个成分的含量,并与外标法测定结果进行比较。结果一测多评法测得21批金莲清热颗粒样品中芒果苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、藜芦酸、牡荆苷和哈巴俄苷的含量范围分别为0.234~0.516、1.804~2.270、2.143~2.606、0.190~0.223、0.594~0.782、0.080~0.152 mg/g,外标法测定结果分别为0.235~0.523、1.798~2.265、2.137~2.599、0.190~0.224、0.597~0.786、0.077~0.151 mg/g,2种方法所测结果的差异百分比不大于4.00%。结论建立了基于多种内参物同时测定金莲清热颗粒中6种成分含量的一测多评法,该方法与外标法所得结果无明显差异,可用于金莲清热颗粒的质量控制。

高效液相色谱法同时测定摩罗丹中5种成分含量

目的 建立同时测定摩罗丹中5种成分含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长分别为210 nm(哈巴苷)、230 nm(芍药苷)、280 nm(延胡索乙素、哈巴俄苷)、203 nm(人参皂苷Rb1),柱温为20℃,进样量为10μL。结果 哈巴苷、芍药苷、延胡索乙素、哈巴俄苷、人参皂苷Rb1质量浓度分别在0.34~3.77μg/mL(r=0.999 4)、41.32~454.54μg/mL(r=1.000 0)、1.41~15.52μg/mL(r=0.999 8)、2.02~22.24μg/mL(r=0.999 7)、72.19~794.13μg/mL(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好(n=6);检测限分别为0.06,0.20,0.30,0.20,0.40μg/mL,定量限分别为0.17,0.62,0.70,0.50,1.25μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为99.43%,99.85%,97.93%,98.61%,99.77%,RSD分别为1.38%,0.30%,2.04%,1.52%,0.53%(n=9)。结论 该方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于同时测定摩罗丹中5种成分的含量。

中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定

目的 :建立中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相含量测定方法 ,提出特征性有效成分哈巴俄苷的含量限度建议。方法 :Ultrasphere 5 μmODS分析柱 (2 5 0mm× 4 6mm) ,流动相为乙腈和 1%醋酸水溶液 ,线性梯度洗脱 (2 0∶80→ 5 0∶5 0 ) (2 0min) ,流速为 1mL·min 1,室温 ,检测波长为 178nm。结果 :哈巴俄苷与肉桂酸回收率分别为 97 13%和 99 38% ,RSD分别为 0 80 %和 0 5 1% ,全国 2 0份商品饮片和 8份不同产地完整药材中哈巴俄苷含量为 0 0 41%～ 0 0 6 8%。结论 :本文方法快速、简便、准确 ,可用于玄参质量控制。建议玄参中哈巴俄苷含量应不低于 0 0 5 %。

光谱法研究哈巴俄苷与人血清白蛋白的结合反应

在不同温度及模拟血液pH值条件下,采用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究了哈巴俄苷(Harpagoside,HAR)与人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)的结合反应。结果表明,HAR有规律地使HSA内源荧光猝灭,猝灭常数随温度升高而降低,其猝灭机制为两者形成复合物而引起的的静态猝灭;不同条件下两者结合常数K_A均大于10~5L/mol,结合位点数n≈1。由Van't Hoff方程计算获得了不同条件下HAR与HSA相互作用的热力学参数,由ΔG、ΔH和ΔS均小于0可知,两者结合的主要作用力是氢键和范德华力,且两者结合是吉布斯自由能降低的自发过程。根据Frster非辐射转移理论计,计算了不同条件下HAR与HSA的结合距离r在4.01~4.28 nm范围内,表明两者结合过程发生了非辐射能量转移。同步荧光光谱表征结果表明,HAR使HSA的色氨酸和酪氨酸残基所处的微环境极性增强,疏水性减弱,导致HSA构象发生了一定程度的改变。

RPHPLC法同时测定玄参中肉桂酸、哈巴酯苷的含量

耳的建立中药材玄参的RP-HPLC法的质量控制方法。方法采用Diamonsil^TM C18色谱柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相为体积分数为1％的乙酸水溶液-甲醇（体积比为49：51），检测波长为280nm，流速为0．90mL·min^-1，柱温为32℃，进样量为10μL，外标法同时测定中药材玄参中的肉桂酸和哈巴酯苷的含量。结果以色谱峰面积（A）对质量浓度（P）作图。肉桂酸和哈巴酯苷回归方程分别为：A=8．577×10^7ρ＋7．533×10^4（r=0．9993）、A=2．510×10^7ρ-2．633×10^4（r=0．9997）；线性范围分别为4．65～37．2mg·L^-1、20．6～164．8mg·L^-1；平均回收率分别为99．6％（RSD=1．4％，n=9）、100．1％（RSD=1．3％，n=9）；平均质量分数分别为3．116×10^-2％（RSD=1．4％，n=3）、0．1678％（RSD=0．77％，n=3）。结论本方法可作为玄参药材的质量控制方法。

中药玄参薄层色谱鉴别法的建立

目的 :建立中药玄参的薄层色谱鉴别法。方法 :以玄参的特征性有效成分哈巴俄苷 (harpagoside)以及另一主要成分哈巴苷 (harpagide)为对照品 ,采用薄层色谱法。 结果 :建立了玄参的薄层色谱鉴别法 ,并通过对不同产地玄参药材以及数种易混淆药材的检测证明了该方法的专属性。结论 :该方法操作简便、准确、可靠。

高效液相色谱法测定中药玄参中4种环烯醚萜苷类成分的含量

目的:用 HPLC 多波长梯度洗脱法考察不同玄参样品中桃叶珊瑚苷、哈帕苷、O-甲基梓醇和哈帕俄苷4种环烯醚萜苷的含量。方法:分析柱为 kromasil 100A C_(8)(5μm,4.6mm×250mm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱(乙腈:0min,4%;20 min,10%;50 min,50%),流速为1mL·min^(-1),检测波长为200 nm 和280 nm,室温。结果:桃叶珊瑚苷、哈帕苷、O-甲基梓醇和哈帕俄苷分别在0.678～13.968μg,0.928～16.704μg,0.524～9.432μg,0.652～11.736μg范围内线性良好。鲜材直接烘干品中4种成分的含量显著高于传统方法加工饮片。结论:本方法简便,分离效果好,灵敏度高,重现性好,可为全面控制玄参内在质量提供参考。

西南产玄参药材的HPLC指纹图谱研究

目的:建立西南不同产区玄参药材及市售玄参饮片甲醇提取物的HPLC指纹图谱,为其质量控制提供依据。方法:用HPLC分析测定重庆南川、酉阳及贵州道真产3批玄参药材及8批市售玄参饮片,色谱条件:C18柱,乙腈-0.4%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长260 nm,流速1.0 mL/min,检测时间55 min。结果:以哈巴俄苷及肉桂酸为指标性成分,建立了玄参药材及饮片的HPLC指纹图谱共有模式图,对不同产地的样品进行相似度比较,相似度大于0.901。结论:该指纹图谱检测方法快速、简便,有助于全面评价玄参药材的品质,也为玄参规范化种植提供理论依据。

HPLC法研究不同炮制工艺对玄参中哈巴俄苷和肉桂酸含量的影响

采用HPLC法对不同软化方法、微泡时间、蒸制时间的玄参进行测定,考察了不同炮制工艺对玄参中哈巴俄苷和肉桂酸含量的影响。清蒸法制备的玄参中哈巴俄苷的含量最高,浸润法制备的玄参中肉桂酸的含量最高。玄参炮制以直接蒸制法为好,蒸制时间应以多种指标综合确定。

HPLC-MS法同时测定扶正平消胶囊中龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸、哈巴俄苷的含量

目的建立扶正平消胶囊中4种成分含量的高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)测定方法。方法色谱条件:Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱程序为0 min(A∶B=15∶85);30 min(A∶B=40∶60)。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),负离子电离,选择性离子监测(SIM)模式。结果龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸和哈巴俄苷的定量限分别为5.73、6.37、6.50和6.46 ng/ml,检测限分别为0.46、0.32、0.33和0.32 ng/ml;在相应的线性范围内,r>0.999 0;待测物与内标的峰面积之比的日内精密度和日间精密度均小于2%,平均回收率为98%～102%。结论所建立的HPLC-MS方法可同时测定扶正平消胶囊中龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸和哈巴俄苷的含量,快速、简便,实用性强。

HPLC法同时测定复方板蓝根利咽颗粒中6种成分

目的建立同时测定复方板蓝根利咽颗粒（板蓝根、玄参、桔梗、甘草等）水提液中腺苷、（R,S）-告依春、甘草苷、哈巴俄苷、桔梗皂苷D和甘草酸铵6种成分的HPLC法。方法 Agilent Zorbox Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;检测波长260 nm（0～10 min）、245 nm（10～14 min）、278 nm（14～34.5 min）、210 nm（34.5～35.5 min）、250 nm（35.5～50 min）;柱温30℃。结果腺苷、（R,S）-告依春、甘草苷、哈巴俄苷、桔梗皂苷D和甘草酸铵的线性范围分别为0.003 7～0.276 0 mg/mL（r=0.999 6）、0.003 4～0.254 7 mg/mL（r=0.999 1）、0.004 9～0.364 4 mg/mL（r=0.999 2）、0.001 4～0.103 7 mg/mL（r=0.999 1）、0.005 5～0.411 9 mg/mL（r=0.999 1）和0.011 0～0.822 0 mg/mL（r=0.999 1）;平均加样回收率（n=6）分别为腺苷98.8%（RSD为1.4%）、（R,S）-告依春97.1%（RSD为1.1%）、甘草苷99.0%（RSD为1.8%）、哈巴俄苷97.3%（RSD为1.1%）、桔梗皂苷D100.0%（RSD为1.7%）、甘草酸铵98.8%（RSD为1.7%）。结论该方法准确可靠,可行性及重复性好,可用于复方板蓝根利咽颗粒的质量控制。

中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法测定(英文)

目的:建立中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱含量测定方法,提出特征性有效成分哈巴俄苷的含量限度建议.方法:Ultrasphere ODS分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈和1%醋酸水溶液,线性梯度洗脱(20:80→50:50)(20 min,流速为1 mL@min-1,室温,检测波长为278 nm.结果:哈巴俄苷与肉桂酸回收率分别为97.13%和99.38%,RSD分别为0.80%和0.51%,全国20份商品饮片和8份不同产地完整药材中哈巴俄苷和肉桂酸的含量分别为0.041～0.244%和0.012～0.068%.结论:本文方法快速、简便、准确,可用于玄参的质量控制.建议规定玄参中哈巴俄苷含量应不低于0.05%.

玄参中化学成分的分离鉴定及其降糖活性研究

本文探讨分离玄参的化学成分,并研究玄参中分离出的化合物在HepG2细胞中降糖作用的影响。采用渗滤提取,结合大孔树脂、硅胶柱层析、HSCCC色谱等分离方法,NMR波谱数据鉴定结构,MTT法检测HepG2细胞活力,试剂盒检测细胞消耗的葡萄糖。结果表明,分离出玄参中9个化合物:类叶升麻苷(1)、升麻素苷(2)、桃叶珊瑚苷(3)、哈巴苷(4)、蔗糖(5)、肉桂酸(6)、哈巴俄苷(7)、安格洛苷C(8)、二十七烷(9)。在0.1~2.5μg/m L浓度范围内,哈巴俄苷在HepG2细胞中降糖活性最好。其中,二十七烷为首次从该属植物中分离得到,化合物7是一个潜在的降糖化合物,值得进一步研究和开发。

正交试验优选玄参蒸制中试工艺的研究

目的优选玄参的最佳蒸制中试工艺。方法以浸出物、哈巴俄苷、5-羟甲基糠醛为指标,采用正交试验法,考察浸泡时间,蒸制时间及干燥温度3个因素(每个因素取3个水平),对玄参最佳蒸制中试工艺进行优选。结果最佳蒸制工艺为浸泡30 min,蒸制2 h,95℃干燥。结论优选得到的玄参中试蒸制工艺稳定合理,符合工业化生产要求。

RP-HPLC法测定玄麦甘桔颗粒中甘草苷、甘草酸、哈巴俄苷和肉桂酸的含量

目的:建立高效液相色谱法测定玄麦甘桔颗粒中甘草苷、甘草酸、哈巴俄苷、肉桂酸含量。方法:采用 LiChrospher RP-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(含1.0%甲酸)为流动相,梯度洗脱(0～20 min,流动相比例20:80→50:50),流速1 mL·min^(-1),双波长检测[278 nm(0～18 min,测定甘草苷、哈巴俄苷及肉桂酸),254 nm(18～20 min,测定甘草酸)]。结果:甘草苷、甘草酸、哈巴俄苷和肉桂酸分别在0.21～6.30,0.25～7.50,0.10～3.00,0.105～3.15 μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为99.6%,99.3%,100.5%,98.9%。结论:该方法简便迅速,准确可靠,重现性好,结果稳定,适合玄麦甘桔颗粒的含量控制。

HPLC法测定玄麦甘桔颗粒中哈巴俄苷与肉桂酸含量

目的用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定玄麦甘桔颗粒中哈巴俄苷与肉桂酸的含量。方法GraceSmart-RP18柱,乙腈-体积分数2%醋酸溶液二元梯度洗脱;流速为1.0 mL.min-1,检测波长278 nm,柱温为室温。结果哈巴俄苷的平均回收率为100.4%,方法精密度RSD为1.27%(n=6);肉桂酸的平均回收率为97.2%,方法精密度RSD为2.36%(n=6)。结论所建方法可用于玄麦甘桔颗粒中哈巴俄苷与肉桂酸的含量测定。

不同干燥方法对地黄与玄参中环烯醚萜苷类成分含量的影响

目的研究不同干燥方法对地黄、玄参中环烯醚萜苷类成分含量的影响。方法地黄、玄参分别经105℃真空干燥及105℃普通干燥两种方法处理后,取真空干燥组及普通干燥组1、3、5、7、9h的地黄、玄参样品采用高效液相色谱法测定地黄中梓醇和玄参中哈巴俄苷含量。结果随着干燥时间的延长,普通干燥组地黄中梓醇和玄参中哈巴俄苷的含量分别降低60%、80%,与真空干燥组比较有显著性差异,真空干燥组待测成分含量没有明显影响。结论真空干燥较普通干燥的处理方法更有益于环烯醚萜苷类中药。