EFFECTS OF THE HYPERTHERMIA AND HARRINGTONINE ON TELOMERASE ACTIVITY OF HL-60 CELLS

Objective To understand the mechanism of the hyperthermia and harringtonine in purging of leukemia cells In Vitro. telomerase activity of HL-60 cells treated by hyperthermia ( 42℃ for one hour) and different concentrations of Harringtonine were investigated.Methods Using Telomeric Repeats Amplification Protocol (TRAP) and ELISA techniques to analyze the telomerase activity of HL-60 cells. Results Our results showed that harringtonine inhibited the telomerase activity of HL-60 cells in a dosage related manner. Moreover, the telomerase activity of HL-60 cells was significantly decreased after the hyperthermia treatment as compared with untreated cells.Conclusion The effect of the hyperthermia and Harringtonine on purging leukemia cells In Vitro may be mediated by down regulation of telomerase activity of tumor cells.

DETERMINATION OF SERUM HARRINGTONINE IN PATIENTS WITH ANLL AND ITS CLINICAL IMPLICATION

Harringtonine(H) level in serum was quantified by high-performance liquid chromatographic (HPLC) technique and its pharmacokinetic parameters were determined in 11 patients with ANLL after 4 hours continuous infusion of 4 mg of H. 74 serum samples over the range of H administered 1-6 mg/d were also determined, the dose of H administered paralleled the mean serum H concentration, but the highest concentration were 1.6-7 folds higher than the lowest under the same doses. It seems that the dosage of harringtonine must be individualized in order to achieve better antileukemia effect. It was found that under the similar serum H concentration the marrow blast decrease index (MBDI) in types M4 and M5 of ANLL is much more greater than in M2 after the first course of chemotherapy and in 3 patients of M2, the serum H level and the MBDI show positive correlation.

地西他滨联合HA方案治疗骨髓增生异常综合征疗效及安全性研究

目的:探讨地西他滨联合HA方案(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效及安全性。方法:选取MDS患者94例,随机分为对照组和观察组,每组47例。对照组给予HA方案治疗,观察组患者在HA方案基础上联合地西他滨治疗。两组患者均治疗4个疗程。比较两组患者临床疗效、治疗前后血常规指标[红细胞计数(RBC)、平均红细胞体积(MCV)、血小板(PLT)、血红蛋白(HGB)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEU)]、预后及不良反应发生情况。结果:观察组疾病控制率高于对照组(P<0.05)。与组内治疗前比较,对照组治疗后PLT和HGB升高,WBC和NEU降低(均P<0.05);观察组治疗后RBC、MCV、PLT和HGB升高,WBC和NEU降低(均P<0.05)。与对照组比较,观察组治疗后RBC、MCV、PLT和HGB升高,WBC和NEU降低(均P<0.05)。治疗后,观察组患者预后情况优于对照组(P<0.05)。两组患者不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:地西他滨联合HA方案治疗MDS可协同增效,改善患者血常规指标与预后情况,且安全性较好。

硼替佐米单用或联合三尖杉酯碱体外诱导HL-60细胞凋亡实验研究

本研究探讨硼替佐米(bortezomib,Bor)单用或联合三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对HL-60细胞凋亡的影响。以不同浓度Bor、HT处理HL-60细胞12-48小时,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,以DNA凝胶电泳、荧光显微镜检、流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明:10-50nmol/LBor可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。其中10nmol/L剂量处理12小时即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量可使细胞凋亡率明显增加。30nmol/LHT与10nmol/LBor联合应用时,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加。结论:Bor对HL-60细胞具有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应,与HT联合应用有明显的协同作用。

高效液相色谱法检测血清中的高三尖杉酯碱

目的：利用高效液相色谱法测定血清中的高三尖杉酯碱的含量。方法：以内标法为基础，取１ｍＬ血清标本加入内标三尖杉酯碱，经二氯甲烷２次重复提取，减压蒸干，残渣用流动相溶解，进样。色谱条件：以Ｃ１８反相柱为分析柱，流动相组成为０１ｍｏｌ·Ｌ－１甲酸铵－甲醇（２∶１），流速为１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，在紫外检测器波长２９０ｎｍ处进行检测。结果：方法学检查：最低检测限２ｎｇ·ｍＬ－１，在４～１５００ｎｇ·ｍＬ－１范围内呈线性，回收率９１３％（ｎ＝８），批内和批间的相对标准偏差分别为１２％（ｎ＝８）和３６％（ｎ＝４）。结论：对临床化疗常与之配伍使用的３种药物，进行干扰实验，未发现干扰峰。

抗三尖杉酯碱HL－60细胞的抗程序性细胞死亡及其克服

三尖杉酯碱（ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎ，ＨＴ）是中国产植物海南粗榧（ＣｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓＬｉ）中提取的一种抗肿瘤药物，对急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病有较好疗效（１）。三尖杉酯碱可非常有效地诱导敏感ＨＬ－６０细胞程序性死亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ａｐｏ）（２，３）。但超过半致死剂量（ＩＣ５０）近百倍的ＨＴ却不能诱导抗三尖杉酯碱细胞ＨＴ１２程序性死亡。如用维拉帕米（ｖｅｒａｐａｍｉｌ，Ｖｐ）１０μｇ·ｍｌ－１逆转多药抗性后，ＨＴ虽可诱导ＨＴ１２细胞程序性死亡，但与敏感细胞相比，出现程序性细胞死亡的时间大大推迟，用药浓度也提高约１０倍。这些结果提示：程序性细胞死亡可能作为肿瘤细胞是否已形成抗药性的标志之一，同时也说明程序性细胞死亡相关因子可能参与肿瘤细胞抗药性的形成。

三尖杉酯碱对HL-60细胞凋亡及原癌基因表达的影响

目的 :探讨三尖杉酯碱对急性白血病治疗作用的机制。方法 :用细胞培养、DNA片断凝胶电泳、Westernblot和cDNA阵列杂交等方法检测三尖杉酯碱对HL - 60白血病细胞凋亡及原癌基因表达的影响。结果 :三尖杉酯碱使HL - 60细胞BCL - 2蛋白表达明显较低、c -myc表达较弱、而p15表达较强。结论 :三尖杉酯碱抑制HL - 60细胞增殖、诱导其分化和凋亡 ,其机制可能与三尖杉酯碱下调原癌基因BCL - 2和c-myc、上调抑癌基因p15有关。

三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的生物活性及临床应用

概述了从粗榧科植物中分离的抗肿瘤生物碱三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱等的生物活性 ,包括其实验及临床药理、临床毒性、分子药理机制、化学研究和未来市场的研究展望。

61例成人急性非淋巴细胞白血病诱导化疗—HA和DA方案的比较

本文报告HA和DA方案治疗急性非淋巴细胞白血病(ANLL)61例,其中33例用HA方案,CR18例(54.3%);28例用DA方案,CR16例(57.1%),两种方案CR率相似(P>0.05)。HA和DA方案治疗的MBDI分别为39.0%、44.8%(P>0.5);病人的中位缓解时间为10月和10.5月;2年持续CR率为48%和43%,HA方案的心脏毒性较DA的小,HA方案对白血病细胞的杀伤及效果表明,它完全可以取代DA方案,具有实用价值。

三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血病K-562细胞凋亡的实验研究

目的阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测,观察HT对K562细胞株的作用方式,进一步用RT-PCR方法研究bcr/abl基因在转录水平的改变。结果0.01～100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡,并呈时间和剂量依赖性。随着药物作用时间的延长,bcr/abl基因的转录下调。结论低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达,诱导K562细胞凋亡。

小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎

目的 :观察小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎的近期疗效。方法 :三尖杉酯碱 1mg +生理盐水 5 0 0ml/d静脉滴注 ,5～ 7d为 1疗程 ,间隔 2～ 3周 ,总共 3～ 6疗程。结果 :2 0例中显效 12例 (6 0 % ) ,有效 8例 (40 % )总有效率 (10 0 % )。结论 :小剂量三尖杉酯碱治疗紫癜性肾炎有效、安全 ,使用方便、费用低廉 ,值得临床应用。

双向凝胶电泳分析三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡

背景与目的:三尖杉酯碱(harringtonine,HT)作为一种抗肿瘤药,已广泛用于治疗急、慢性髓系白血病,并已获得了良好的疗效。目前的研究表明其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关,但具体分子机制不详。本研究主要是分析HT诱导K562细胞凋亡的蛋白谱,寻找凋亡相关蛋白。方法:应用AnnexinⅤ和PI双染法,通过流式细胞术区分HT诱导K562细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段;进一步采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法,对HT诱导凋亡的K562细胞与对照K562细胞进行分离和比较。结果:10μg/mlHT作用于K562细胞5h和24h,凋亡早期细胞(AnnexinⅤ+/PI-)分别为28.3%和18.1%(P<0.01),凋亡晚期细胞(AnnexinⅤ+/PI+)分别为9.1%和20.2%(P<0.01)。配比分析对照组细胞和凋亡早期组、晚期组细胞的蛋白图谱,统计分析表明:对照组K562细胞可分离出1300±50个蛋白点,组内蛋白点匹配率为(88.3±2.0)%。凋亡晚期组细胞中有10个蛋白点发生了明显和稳定的质和量的改变(P<0.01),其中8个蛋白点在凋亡后表达量上调,1个蛋白点表达下调,1个蛋白点只在对照细胞内表达。结论:差异表达的蛋白可能是三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的相关蛋白。

三尖杉酯碱毫微囊的制备

采用氰丙烯酸丁酯、右旋糖酐和葡萄糖制备三尖杉酯碱毫微囊注射剂，其粒径大小、成囊效率、半数致死量以及肿瘤抑制率实验表明，三尖杉酯碱毫微囊在灭菌前后用电子扫描显微镜测得的平均粒径分别为１９．７５±６．７６ｎｍ和３５．０７±１１．４１ｎｍ，透析法测得成囊效率为４９．６％，三尖杉酯碱和三尖杉酯碱毫微囊注射剂的半数致死量分别为３．８３±０．８１ｍｇ／ｋｇ和４．８０±１．１０ｍｇ／ｋｇ，对Ｓ１８０的肿瘤抑制率分别为５４．１７％和６２．１２％．

高三尖杉酯碱抑制K562细胞端粒酶活性的实验研究

目的 研究高三尖杉酯碱 (HHT)对 K5 6 2细胞端粒酶活性的抑制作用。方法 采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) -酶联免疫吸附试验 (EL ISA)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) -银染法检测了 K5 6 2细胞的端粒酶活性变化。结果 0 .0 1～ 5 .0 0μg/ m l HHT处理 K5 6 2细胞 3～ 48小时 ,K5 6 2细胞端粒酶活性由 1.2 0 3± 0 .0 78下降至 0 .0 5 4± 0 .0 17,并呈剂量依赖性和时间依赖性。结论 HHT能有效抑制 K5 6

抗白血病药物三尖杉酯碱对L1210细胞着丝粒蛋白含量及CenpB基因表达的影响(英文)

以小鼠白血病细胞系L12 10为对象 ,探讨了抗白血病药物三尖杉酯碱 (Harringtonine,HT或Har)对细胞内着丝粒蛋白含量及着丝粒蛋白CenpB基因表达的影响。间接免疫荧光 (IIF)检测结果显示 ,随HT作用时间延长 ,L12 10细胞着丝粒荧光斑点减弱 ;免疫印迹 (Westernblot)检测结果显示 ,所用的抗着丝粒抗血清 (ACA血清 )能够识别 8种不同分子量的着丝粒蛋白 :14 0、80、70、5 6、37、34、32和 17kD。受HT作用 ,细胞中这些着丝粒蛋白的含量不同程度地降低。在L12 10细胞中识别 17、80and 14 0kD蛋白质的ACA抗体也分别与分子量相当的已知为CenpA、CenpB和CenpC的 3种蛋白发生交叉反应。Northern和Dotblot显示 ,HT的抑制作用使细胞中CenpBmRNA表达水平较之对照细胞下降。结果表明 ,HT可 (通过抑制基因mRNA的表达 )降低细胞中某些着丝粒蛋白的含量 ;

顶空毛细管气相色谱法测定三尖杉酯碱中的残留溶剂

目的:建立三尖杉酯碱中的残留溶剂乙醚、二氯甲烷的气相色谱分离测定方法。方法:采用 DB-624弹性石英毛细管柱(30m×0.53mm,3.0μm),载气为氮气,氢火焰离子化检测器,进样口温度为180℃,检测器温度为250℃。柱温采用程序升温:初始温度为60℃,保持10min,以30℃·min^(-1)升至180℃,保持5min;流速为1.7mL·min^(-1)。分流比为1:10,以二甲基甲酰胺为样品的溶剂,采用甲醇作为内标物质。结果:使用该方法乙醚、二氯甲烷得到了较好的分离与测定;回收率分别为92.04%及89.20%,RSD 分别为1.1%及5.8%;精密度 RSD 分别为0.79%及0.33%。结论:方法准确可靠,可用于药品检验中三尖杉酯碱中的残留溶剂测定。

几种植物来源不同作用机制的抗癌药抗侵袭作用

用细胞培养法和癌细胞侵袭实验，观察几种植物来源不同作用机理的抗癌药如紫杉醇、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱及喜树碱［１］，对黑色素瘤高转移株Ｂ１６ＢＬ６细胞及人纤维肉瘤细胞ＨＴ１０８０的细胞毒作用和抗侵袭作用。结果表明紫杉醇、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱及喜树碱对Ｂ１６ＢＬ６和ＨＴ１０８０细胞增殖均有很强的抑制作用。紫杉醇、三尖杉酯碱及高三尖杉酯碱对Ｂ１６ＢＬ６细胞侵袭和运动也有明显的抑制作用，而喜树碱在同样浓度下对Ｂ１６ＢＬ６细胞侵袭和运动均无明显抑制。

三氧化二砷单用或联用化疗药物对多药耐药白血病细胞的毒性研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3)单用或与化疗药物合用对敏感白血病细胞 (K5 6 2 )或多药耐药 (MDR)白血病细胞 (K5 6 2 /A0 2 )的毒性作用。方法 :细胞毒实验采用MTT法 ,细胞表面P 糖蛋白 (P gp)和细胞内柔红霉素 (DNR)浓度采用流式细胞术测定。结果 :As2 O3 对K5 6 2和K5 6 2 /A0 2的IC50 分别为 ( 2 .1± 0 .2 ) μmol·L-1和( 1.5± 0 .3) μmol·L-1,二者比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。As2 O3 分别与DNR、足叶乙苷 (VP16 )和三尖杉酯碱(H)联合应用时 ,对K5 6 2和K5 6 2 /A0 2的联合指数均大于 1。加入As2 O3 前后K5 6 2 /A0 2细胞表面P gp和细胞内DNR荧光强度均无明显改变。结论 :As2 O3 对敏感和MDR白血病细胞的细胞毒性作用相似 ;它分别与DNR ,VP16和H联合应用时 ,对敏感或MDR白血病细胞的毒性均为拮抗作用 ;它不影响MDR细胞P

三尖杉酯碱预防后发性白内障的实验研究

目的：探讨后发性白内障的药物预防。方法：行兔眼白内障囊外摘除术。白内障囊外摘除术为对照组；术中在灌注液中加入三尖杉酯碱（分３种浓度：０．０２５ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ）者为观察组。术后３个月用光镜、扫描电镜和透射电镜观察晶体后囊的形态学变化。结果：术后３个月观察组晶体后囊的透明度优于对照组（Ｐ＜０．０５）。对照组晶体后囊前覆盖一层晶体上皮细胞，并可见Ｂ淋巴细胞和巨噬细胞附着。观察组晶体后囊前无明显晶体上皮细胞增殖和炎性细胞吸附，角膜内皮等眼内组织无明显病理改变。结论：三尖杉酯碱可能为预防后发性白内障较安全、有效的药物。

HL-60细胞高三尖杉酯碱诱导后CD44表达变化及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱(homohar-ringtonine,HHT)诱导HL-60细胞分化后CD44表达变化及其与细胞周期调控的关系,探讨HHT的作用机制。方法:建立HHT诱导分化模型,瑞氏染色观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达及细胞周期变化,RT-PCR检测CD44、p27、p21和Cyclin E基因在mRNA水平的表达变化。结果:MTT实验显示,HHT对HL-60细胞产生增殖抑制作用,HL-60细胞G0/G1期细胞百分比明显上升,S期细胞百分比明显下降,P<0.05。半定量分析PCR扩增产物光密度相对表达量显示,HHT诱导后HL-60细胞中CD44基因表达逐渐减弱,p27和p21基因逐渐增强,Cyclin E基因逐渐减弱。CD44与p27表达呈明显负相关,r=-0.686,P<0.05。结论:HHT可能通过下调CD44基因,进而提高p27和p21表达,抑制Cyclin E活性而对HL60细胞产生诱导分化作用。