miR-421靶向调控Menin/Caspase-3影响抑郁症的机制

目的探讨miR-421影响抑郁症发生发展的作用机制。方法采取单次腹腔注射脂多糖(LPS)方法建立抑郁大鼠模型,采用糖水偏好度测试和旷场实验进行抑郁行为检测。通过miRNA微阵列芯片和RT-PCR分析miR-421在抑郁大鼠海马组织中的表达量,运用TargetScan数据库和mi RDB数据库进行预测miR-421的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验观察其与靶基因的结合情况,观察过表达和抑制miR-421对靶基因的影响,随后过表达和抑制靶基因,观察其对下游因子的影响,最终探究miR-421影响抑郁症的相关机制。结果miRNA微阵列芯片和RT-PCR检测表明miR-421在抑郁大鼠海马组织中呈高表达(P<0.001),抑制miR-421的表达可显著恢复抑郁大鼠的体重和运动能力(P<0.001)。TargetScan数据库预测得到Menin与miR-421存在结合靶点,双荧光素酶报告基因实验表明Menin与miR-421具有相互作用;当miR-421过表达时,Menin表达量会下调(P<0.001),相反,当抑制miR-421表达时,Menin表达量会上调(P<0.001)。qPCR检测提示,Menin下游因子Caspase-3、NF-κB在抑郁大鼠模型海马组织中的表达显著提高(P<0.001),IL-1β在抑郁大鼠模型海马组织中的表达明显提高(P<0.01),当抑制Menin表达时,Caspase-3、NF-κB、IL-1β表达量会升高(P<0.001),当过表达Menin时,Caspase-3、NF-κB、IL-1β表达量则降低(P<0.001)。结论抑制miR-421表达可升高Menin表达,降低Caspase-3含量,减少神经炎症反应,从而改善抑郁症状。

miR-21调控TLK2表达对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨mi R-21调控TLK2表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取2019年1月至2022年7月在新乡市中心医院收治的70例AML患者,同时选取30例缺铁性贫血患者作为对照组,使用Ficoll密度梯度离心法获取两组患者的骨髓单个核细胞。RT-q PCR测定各组骨髓单个核细胞中mi R-21、TLK2 m RNA的表达水平。使用脂质体转染技术将mimics-mi R-21、mimics-NC、inhibitor-mi R-21、inhibitor-NC及NC转染至HL-60细胞。采用CCK-8法测定各组HL-60转染细胞经阿糖胞苷处理后的活性。TUNEL法测定HL-60转染细胞凋亡率。RT-q PCR测定转染inhibitor-mi R-21后HL-60细胞TLK2 m RNA的表达。结果:AML患者骨髓单个核细胞中mi R-21、TLK2 m RNA的相对表达水平均明显高于对照组患者(均P<0.05)。HL-60细胞经阿糖胞苷处理后,inhibitor-mi R-21组和mimics-mi R-21组的细胞活性均随阿糖胞苷浓度升高显著下降(P<0.05),但在每个阿糖胞苷浓度点,inhibitor-mi R-21组的细胞活性均低于对照组(P<0.05),而mimics-mi R-21组的细胞活性均高于对照组(P<0.05)。inhibitor-mi R-21组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而mimics-mi R-21组的细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。HL-60细胞经inhibitor-mi R-21处理后,TLK2 m RNA的相对表达量明显下降(P<0.05)。结论:mi R-21在AML患者中呈高表达,可能通过抑制TLK2的表达来促使AML细胞凋亡。

miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期患者中的表达水平及与病情的相关性

目的分析miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期(PE)患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月在南京市妇幼保健院治疗的PE患者103例,分为轻度PE组(57例)和重度PE组(46例),另选取同期正常孕妇50例作为对照组。检测各组孕妇血清miR-21、miR-26a及miR-200a表达水平,分析其与年龄、孕周、BMI、血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局的相关性,并分析血清miR-21、miR-26a及miR-200a对PE的诊断价值。结果重度PE组BMI、舒张压、收缩压以及24h尿蛋白高于轻度PE组及对照组,且差异具有统计学意义(F值分别为4.116、141.063、143.118和342.736,P<0.05)。对照组、轻度PE组及重度PE组孕妇血清中miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平依次升高。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平与血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局发生率呈正相关(r值介于0.446~0.832之间,P<0.001)。经受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析发现,血清miR-21、miR-26a及miR-200a联合诊断PE的曲线下面积(AUC)为0.967,敏感度为98.10%,特异性为92.30%。结论PE患者血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达高于正常孕妇,且与患者的临床指标及不良妊娠结局相关,检测血清miR-21、miR-26a、miR-200a水平对早期诊断PE及评估患者预后具有十分重要的意义。

miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

肺炎支原体肺炎患儿血清miR-21、miR-146a表达变化及其与炎症因子的相关性

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清miR-21、miR-146a表达变化及其与炎症因子的相关性。方法选取2021年8月—2022年9月包头市第八医院MPP患儿62例(MPP组)、健康体检儿童45名(正常对照组)。收集所有研究对象的一般资料,并检测血清miR-21、miR-146a相对表达量和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。根据病情严重程度将MPP患儿分为轻症组(38例)和重症组(24例)。采用Pearson相关分析评估血清miR-21、miR-146a、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断重症MPP的效能。结果MPP组血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平和miR-21相对表达量均高于正常对照组(P<0.001),血清miR-146a相对表达量低于正常对照组(P<0.001)。重症组血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平和miR-21相对表达量均高于轻症组(P<0.001),血清miR-146a相对表达量低于轻症组(P<0.001)。miR-21与IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间均呈正相关(P<0.05),miR-146a与miR-21、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α均呈负相关(P<0.05),IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间均呈正相关(P<0.05)。miR-21、miR-146a、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α单项检测诊断重症MPP的曲线下面积(AUC)分别为0.794、0.770、0.829、0.837、0.866、0.865;各项指标联合检测的AUC为0.963,敏感性和特异性分别为87.5%和97.4%。结论MPP患儿血清miR-21和miR-146a均呈异常表达,且与炎症因子密切相关,或可作为临床判断MPP患儿病情严重程度的有效指标。

miR-146a-5p与miR-21交互对原发性肾病综合征发病风险及病情程度的影响

目的探讨微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)与微小RNA-21(miR-21)交互作用对原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,NS)发病风险及病情程度的关系。方法选取2021年8月至2023年8月NS患者103例作为研究组,另选取同期体检的健康志愿者103名作为对照组。比较研究组与对照组、研究组不同病理类型[微小病变型(minimal change disease,MCD)、膜性肾病(membranous nephropathy,MN)、局灶-节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)]、研究组不同肾脏损伤程度患者的血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量,分析miR-146a-5p、miR-21对NS的诊断价值及交互影响,进一步分析miR-146a-5p、miR-21与病情程度的相关性。结果研究组血清miR-146a-5p相对表达量低于对照组,miR-21相对表达量高于对照组(P<0.05);研究组不同病理类型患者血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);研究组不同肾脏损伤程度患者血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a-5p、miR-21联合诊断NS的AUC为0.923(95%CI:0.877~0.955),敏感度为78.64%,特异度为90.29%,明显优于miR-146a-5p、miR-21单独诊断;以最佳截断值将miR-146a-5p、miR-21分为高表达与低表达,miR-146a-5p低表达与miR-21高表达在NS发病风险呈正向交互作用,为次相乘模型;miR-146a-5p与NS病理类型、肾脏损伤程度呈负相关(r=-0.613、-0.657,P<0.05),miR-21与NS病理类型、肾脏损伤程度呈正相关(r=0.664、0.702,P<0.05)。结论NS患者血清中miR-146a-5p、miR-21异常表达,且与患者病理类型、肾脏损伤程度有关;此外,miR-146a-5p、miR-21在NS发病风险中具有正向交互作用,同时暴露可增加NS发病风险。

miR-21在食管鳞状细胞癌中的作用机制研究进展

食管癌是一种发病率和死亡率均较高的消化道疾病,且早期难以发现。微RNA(miRNA/miR)-21广泛存在于人体各种细胞和组织中,并与人体的生长和发育、细胞周期及组织分化过程紧密相关,其作为miRNA家族的重要成员,也是一种内源性调控序列,在食管癌组织中的表达量异常升高,但目前miR-21的相关研究成果有限,还不足以将其单独作为靶点用于食管癌治疗。基于此,miR-21的早期准确检测、其各类调控基因的调控机制及其是否可作为新靶点治疗食管癌成为研究热点。

慢性牙周炎患者龈沟液miR-155、miR-21水平及其临床意义

目的检测慢性牙周炎(CP)患者龈沟液中微小RNA-155(miR-155)、微小RNA-21(miR-21)表达水平变化及其临床意义。方法选择2021年10月至2022年10月该院142例CP患者作为CP组,根据牙周炎严重程度分为轻度CP组、中度CP组、重度CP组。随访1个月,根据临床疗效分为疗效良好组、疗效较差组。同期142例健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测龈沟液miR-155、miR-21表达水平。利用Pearson相关分析CP患者龈沟液miR-155、miR-21表达水平与牙龈指数(GI)、牙槽骨吸收程度(ABL)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)的相关性。采用多因素Logistic回归分析CP患者疗效的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-155、miR-21对CP患者疗效的预测价值。结果CP组miR-155、miR-21表达水平高于对照组(P<0.05)。CP组PD、AL、ABL、GI明显高于对照组(P<0.05)。轻度CP组、中度CP组、重度CP组miR-155、miR-21表达水平依次升高(P<0.05)。疗效较差组miR-155、miR-21表达水平高于疗效良好组(P<0.05)。龈沟液miR-155、miR-21表达水平均与PD、AL、ABL、GI呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,病情严重程度、miR-155、miR-21是CP患者疗效的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-155、miR-21预测CP患者疗效较差的曲线下面积(AUC)分别为0.937(95%CI:0.888~0.986)、0.818(95%CI:0.715~0.921),二者联合预测的AUC为0.960(95%CI:0.920~0.998),优于单一指标预测。结论CP患者龈沟液miR-155、miR-21表达水平升高,与牙周炎严重程度、牙周临床指标及临床疗效有关,2项指标或可作为CP患者疗效的潜在预测标志物。

血清miR-21、miR-155与脓毒症病情程度的相关性及在预后转归中的交互作用

目的 探讨血清微小RNA-21 (miR-21)、微小RNA-155 (miR-155)与脓毒症病情程度的相关性及在预后转归中的交互作用。方法 选择2022年5月至2023年5月新乡医学院第一附属医院收治的150例脓毒症患者作为研究组,另选同期同年龄段150例健康志愿者作为对照组。比较两组受检者的一般资料和血清miR-21、miR-155水平,并比较研究组不同病情程度患者的血清miR-21、miR-155水平,应用Spearman法分析血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度的相关性;统计患者28 d预后,比较死亡与存活患者入院时的血清miR-21、miR-155及常规炎性因子[白介素-6 (IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)]水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-21、miR-155及常规炎性因子预测脓毒症预后的价值,通过精准-召回(PR)曲线评价血清miR-21、miR-155及常规炎性因子联合预测脓毒症预后的价值,通过交互作用分析血清miR-21、miR-155在脓毒症预后转归中的作用。结果 研究组患者的血清miR-21、miR-155水平分别为1.93±0.62、1.86±0.55,明显高于对照组的1.05±0.34、0.94±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组病情程度重度患者血清miR-21、miR-155水平分别为2.54±0.54、2.46±0.47,明显高于中度患者的1.95±0.48、1.88±0.44和轻度患者的1.33±0.39、1.27±0.38,中度患者血清miR-21、miR-155水平明显高于轻度患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman法分析结果显示,血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度呈正相关(P<0.05);死亡患者入院时的血清miR-21、miR-155及IL-6、CRP、TNF-α水平分别为2.63±0.56、2.51±0.52、(1.39±0.42)μg/L、(154.29±28.73) mg/L、(1.18±0.33)μg/L,明显高于存活患者的1.67±0.53、1.62±0.49、(0.97±0.30)μg/L、(122.64±25.19) mg/L、(0.89±0.24)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC分析结果显示,入院时血清miR-21、miR-155、IL-6、CRP、TNF-α预测脓毒症预后为死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.772、0.778、0.781、0.730、0.830,各指标联合预测的AUC为0.922,大于单独预测的AUC (P<0.05);PR曲线分析结果显示,入院时血清miR-21、miR-155、IL-6、CRP、TNF-α联合预测脓毒症预后的AUC为0.891;交互作用分析结果显示,入院时血清miR-21高水平与miR-155高水平在脓毒症预后转归中呈超相乘模型的正向交互作用(P<0.05)。结论 血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度呈正相关,在脓毒症预后转归中呈超相乘模型的正向交互作用,且在预测脓毒症预后方面具有一定预测效能。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

miR-21低表达对垂体瘤细胞系RC-4BC增殖、凋亡的影响及与PTEN靶向关系

目的观察微小RNA-21(miR-21)低表达对垂体瘤细胞系RC-4BC增殖、凋亡的影响,并分析其与第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)的靶向关系。方法取对数生长期的RC-4BC细胞分为两组,沉默组转染miR-21抑制物miR-21 inhibitor,阴性对照组转染抑制物阴性对照NC-inhibitor,采用RT-PCR法检测miR-21、第10号染色体丢失的张力蛋白同源磷酸酶基因(PTEN)mRNA,采用CCK8实验观察两组细胞增殖能力(以OD值表示),采用平板克隆实验观察两组细胞集落形成能力(以集落形成数表示),采用流式细胞术观察两组细胞凋亡率并观察细胞周期分布情况。收集RC-4BC细胞制备单细胞悬液,分别将miR-21 mimics或NC-mimics与PTEN-WT或PTEN-MUT共转染至RC-4BC细胞,转染后细胞标记为miR-21 mimics+PTEN-WT组、NC-mimics+PTEN-WT组、miR-21 mimics+PTEN-MUT组、NC-mimics+PTEN-MUT组,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PTEN的靶向关系。结果沉默组RC-4BC细胞中miR-21、PTEN mRNA相对表达量分别为0.30±0.08、2.89±0.14,阴性对照组RC-4BC细胞中miR-21、PTEN mRNA相对表达量分别为1.01±0.02、0.99±0.03,两组相比,P均<0.05。沉默组RC-4BC细胞24 h、48 h、72 h时OD值均低于阴性对照组(P均<0.05)。沉默组RC-4BC细胞集落形成数低于阴性对照组(P<0.05)。沉默组RC-4BC细胞凋亡率高于阴性对照组(P<0.05)。沉默组RC-4BC细胞G0/G1期占比65.65%±7.82%、S期占比19.25%±3.70%,阴性对照组RC-4BC细胞G0/G1期占比45.62%±5.03%、S期占比35.72%±4.67%,两组相比,P均<0.05。miR-21 mimics+PTEN-WT组、NC-mimics+PTEN-WT组、miR-21 mimics+PTEN-MUT组、NC-mimics+PTEN-MUT组细胞的相对荧光素酶活性分别为0.39±0.07、1.02±0.03、1.01±0.04、1.00±0.03,其中miR-21 mimics+PTEN-WT组相对荧光素酶活性与其他各组相比,P均<0.05。结论沉默miR-21能够移至垂体瘤细胞系RC-4BC的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN基因有关。

非小细胞肺癌患者miR-221、miR-630表达及与预后的关系分析

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)miR-221、miR-630表达及与预后的关系。方法采集198例NSCLC患者癌组织及癌旁组织标本,检测miR-221、miR-630表达,分析与病理特征关系,Kaplan-Meier法分析2年生存情况,Cox回归分析miR-221、miR-630表达与预后的关系。结果癌组织miR-221表达高于癌旁组织,miR-630表达低于癌旁组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移的NSCLC患者肿瘤组织miR-221表达高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥4 cm、有淋巴结转移的NSCLC患者肿瘤组织miR-630表达低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<4 cm、无淋巴结转移患者(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,miR-221高表达者2年生存率为55.56%,低于miR-221低表达者的79.63%;miR-630高表达者2年生存率为75.96%,高于miR-630低表达的50.00%(P<0.05)。Cox回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移及miR-221、miR-630表达是NSCLC预后的影响因素(P<0.05)。Spearman相关分析显示,miR-221与miR-630表达呈负相关性(P<0.05)。结论NSCLC患者miR-221表达升高,miR-630表达降低,且与TNM分期、淋巴结转移和预后相关,可作为NSCLC患者潜在预后评估的标记物。

三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218表达水平与术后生存的关系

目的研究三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218表达水平及术后生存情况,并分析两者间的关系。方法回顾性分析2021年1月至2022年12月期间焦作市人民医院收治的88例三阴性乳腺癌患者(观察组)的临床资料和术后生存情况,另选取60例经体检合格的健康女性作为对照组。采集三阴性乳腺癌患者术前血清和健康体检者血清并检测其miR-218表达水平;比较不同血清miR-218表达水平三阴性乳腺癌患者的临床病理特征;术后对观察组患者进行1年的随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清miR-218水平三阴性乳腺癌患者术后的生存情况;采用多因素Cox模型分析三阴性乳腺癌患者术后预后不良的影响因素。结果观察组患者的血清miR-218水平为1.98±0.69,明显低于对照组的3.24±0.93,差异有统计学意义(P<0.05);三阴性乳腺癌患者的年龄、月经状态、分化程度、淋巴结转移、组织学分级等病理特征不会影响患者血清miR-218水平(P>0.05),其血清miR-218水平仅与患者的肿瘤直径和TNM分期有关(P<0.05);三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218高水平组1年累计生存率为95.65%(44/46),明显高于血清miR-218低水平组的78.57%(33/42),差异有统计学意义(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218水平、淋巴结转移、TNM分期均是其术后预后的独立危险因素(P<0.05)。结论采用术前血清miR-218表达水平预测三阴性乳腺癌患者的生存情况具有很好的效能,且操作过程更加简便,具有临床应用价值。

circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

miR-21及FOXM1在妊娠期高血压与子痫前期患者血清中的表达

目的探讨微小RNA-21(miR-21)及叉头框蛋白M1(FOXM1)在妊娠期高血压(GHT)与子痫前期(PE)患者中的表达及意义。方法选取妊娠期高血压疾病(HDP)患者150例,其中GHT患者112例作为GHT组、PE患者38例作为PE组,选择年龄及孕周匹配同期产检正常孕妇150例作为对照组;3组均于入组当天采集晨空腹外周静脉血4 mL,检测血清miR-21及FOXM1水平;分析GHT组及PE组患者血清miR-21与FOXM1 mRNA的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC),评估PE的影响因素;分析miR-21及FOXM1 mRNA对PE的预测价值及对妊娠结局的影响。结果PE组、GHT组血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于对照组,PE组低于GHT组(P<0.05);PE组、GHT组miR-21与FOXM1 mRNA均呈正相关(P<0.05);miR-21及FOXM1 mRNA是PE的独立保护因素(P<0.05);基于miR-21及FOXM1 mRNA构建的风险模型评估PE的AUC值为0.841,高于miR-21及FOXM1 mRNA单独评估的AUC值(P<0.05);PE组不良妊娠结局发生率高于GHT组(χ^(2)=4.053,P=0.044),不良妊娠结局患者血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于正常妊娠者(P<0.05)。结论miR-21表达降低可能会靶向下调FOXM1 mRNA表达,促进GHT与PE的发生、发展,且与不良妊娠结局有关。

miR-21、PTEN与前列腺癌临床病理特征的相关性及其临床价值研究

前列腺癌发病机制主要与遗传因素有关,各种诱因导致的基因表达异常为其主要致病原因,且与前列腺癌临床病理特征及生存期密切相关,对前列腺癌诊疗的临床价值高于传统的前列腺特异性抗原(PSA)及影像学检查等[1-2]。miR-21可通过多种作用机制调控恶性肿瘤细胞迁移侵袭及上皮间质转化(EMT)等多种恶性生物学行为,在前列腺癌中表达显著增高,与临床病理特征存在关联[3]。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)为具有调控细胞增殖、凋亡、侵袭及EMT功能的抑癌基因,与多种恶性肿瘤发病机制相关[4]。研究显示,PTEN基因在前列腺癌中的表达显著下调,可能在前列腺癌病情及预后评估中具有一定临床价值[5]。本研究旨在分析miR-21、PTEN表达与前列腺癌临床病理特征的相关性,并分析其临床应用价值,现报道如下。

GATA3介导miR-21/PTEN轴对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响

目的分析GATA结合蛋白3(GATA3)介导微小RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)轴对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响。方法取HEC-1-A细胞,进行转染分组,分为对照组、GATA3空载质粒组、GATA3过表达质粒组、GATA3 siRNA阴性对照组、GATA3 siRNA组。检测各组细胞中GATA3、miR-21、PTEN表达量、增殖情况、凋亡率、迁移、侵袭。结果与hEEC组相比,HEC-1-A组、HEC-1-B组、Ishikawa组细胞中GATA3、miR-21表达水平升高,PTEN表达水平降低(P<0.05)。与GATA3空载质粒组相比,GATA3过表达质粒组GATA3、miR-21 mRNA表达量、增殖率、迁移距离、侵袭细胞数、Vimentin水平升高,PTEN mRNA表达量、凋亡率、Caspase-9、Bax、E-cadherin水平降低(P<0.05);与GATA3 siRNA阴性对照组相比,GATA3、miR-21 mRNA表达量、增殖率、迁移距离、侵袭细胞数、Vimentin水平降低,PTEN mRNA表达量、凋亡率、Caspase-9、Bax、E-cadherin水平升高(P<0.05)。结论下调GATA3表达,可对miR-21/PTEN轴进行调节,使HEC-1-A细胞的增殖减慢,促进HEC-1-A细胞的凋亡。

miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。