Has_circ_0008717在羊膜间充质干细胞上清促血管生成中的作用研究

目的:探究has_circ_0008717在人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成过程中的作用。方法:通过划痕实验、Transwell实验及成管实验检测hAMSC-CM对HUVECs迁移及成管能力的影响,实时荧光定量RT-PCR筛选上调的circRNA(has_circ_0008717);小干扰RNA(siRNA)下调HUVECs内has_circ_0008717水平后,实时荧光定量RT-PCR检测血管内皮生长因子A(VEGFA)表达水平变化,划痕实验、Transwell实验及成管实验观察其对hAMSC-CM促进HUVECs迁移及成管的影响。结果:hAMSC-CM可明显促进HUVECs迁移及成管能力(P<0.05),HUVECs中has_circ_0008717升高最为明显(P<0.05),而敲低has_circ_0008717可明显抑制hAMSC-CM促进HUVECs迁移、成管和VEGFA的表达(P<0.05)。结论:hAMSC-CM可通过has_circ_0008717增强HUVECs的成管能力。

Hsa_circ_0000741对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制

目的探讨环状RNA(hsa_circ_0000741)对乳腺癌癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法通过R语言limma包分析GSE182471和GSE165884数据集;通过常规培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和正常细胞系MCF-10A,提取细胞总RNA,逆转录后进行qRT-PCR测定目的基因表达量;通过lipo2000转染si-hsa_circ_0000741对目的基因进行敲减,将其编为si-hsa_circ_000074组,转染si-nc后将其编为si-nc组,并用qRT-PCR实验检验转染效率,之后进行集落和CCK-8实验对于si-hsa_circ_000074组和si-nc组之间的细胞增殖速率进行检验;开展划痕和侵袭实验对于si-hsa_circ_000074组和si-nc组之间的细胞迁移和侵袭能力进行进行检验。结果GSE182471和GSE165884数据集取交集得出has_circ_0000741在两个数据集中癌组织组均显著上调;qRT-PCR实验发现hsa_circ_0000741在正常细胞系中表达量低于癌细胞系,在三阴性细胞系MDA-MB-231较MCF-7更为显著;集落和CCK-8实验显示si-hsa_circ_000074组的增殖速率明显低于si-nc组;划痕和侵袭实验表明si-hsa_circ_000074组的迁移和侵袭能力明显弱于si-nc组。结论Hsa_circ_0000741在乳腺癌中显著高表达,下调其表达抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

外泌体has_circ_0000615预测曲妥珠单抗治疗转移性Her2(+)乳腺癌疗效的临床价值

目的分析血清外泌体环状RNA 0000615(has_circ_0000615)与转移性人表皮生长因子受体2阳性[Her2(+)]乳腺癌(BC)患者曲妥珠单抗治疗疗效的相关性。方法纳入我院2020年1月至2021年1月期间肿瘤科47例转移性Her2(+)BC女性患者,通过微阵列芯片分析活检组织标本中circRNAs差异性表达谱,并采用实时荧光定量PCR法检测血清外泌体has_circ_0000615表达水平。所有患者接受曲妥珠单抗一线治疗,每8周通过影像学检查进行一次疗效评价,将获得完全缓解(CR)和部分缓解(PR)的患者纳入敏感组,否则纳入耐药组。若CR+PR+疾病稳定(SD)≥6个月则视为临床获益。结果经微阵列芯片分析确定has_circ_0000615在Her2(+)BC组织中显著上调。所有患者中,敏感组患者血清外泌体has_circ_0000615表达水平逐渐降低(P<0.05),经受试者工作特征曲线分析,治疗前基线血清外泌体has_circ_0000615表达水平预测曲妥珠单抗一线治疗的临床获益的曲线下面积为0.666(95%CI 0.466~0.866)。基线血清外泌体has_circ_0000615高水平组患者骨转移发生率更高(P<0.05)。经Spearman相关性分析,0 d至30 d has_circ_0000615水平变化率与sHer2及癌胚抗原(CEA)水平变化率均呈显著正相关(r=0.584,0.291,P<0.05)。结论检测血清外泌体has_circ_0000615水平对于Her2(+)BC患者曲妥珠单抗的短期治疗结局能够提供一定的预测信息。

香芹酚对白血病细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨香芹酚对白血病细胞生物学行为的影响及其对circ-0008717/miR-217分子轴的调控作用。方法:体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞Molt-4,分别加入不同浓度的香芹酚处理细胞;si-NC、si-circ-0008717分别转染入Molt-4细胞(si-NC组、si-circ-0008717组),pcDNA、pcDNA-circ-0008717、anti-miR-NC、anti-miR-217分别转染入Molt-4细胞后加入香芹酚处理细胞(香芹酚+pcDNA组、香芹酚+pcDNA-circ-0008717组、香芹酚+anti-miR-NC组、香芹酚+anti-miR-217组);MTT、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞活力、集落形成数、细胞凋亡率;RT-qPCR法检测circ-0008717和miR-217的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测circ-0008717与miR-217的靶向关系。结果:经香芹酚处理后,细胞活力明显降低(r=-0.9405),circ-0008717的表达水平明显降低(r=-0.9117),集落形成数明显减少(r=-0.9256),细胞凋亡率明显升高(r=0.8464),miR-217的表达水平明显升高(r=0.9468);与si-NC组比较,si-circ-0008717组miR-217的表达水平升高(P<0.001),细胞活力降低(P<0.001),集落形成数明显减少(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001);与香芹酚+pcDNA组比较,香芹酚+pcDNA-circ-0008717组细胞活力升高(P<0.001),集落形成数明显增多(P<0.001),细胞凋亡率明显降低(P<0.001);circ-0008717可靶向调控miR-217的表达;与香芹酚+anti-miR-NC组比较,香芹酚+anti-miR-217组细胞活力明显升高(P<0.001),集落形成数明显增多(P<0.001),细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。结论:香芹酚可通过下调circ-0008717的表达而促进miR-217的表达从而减弱白血病细胞增殖、克隆形成能力及促进细胞凋亡。

Has_circ_0065901通过竞争性吸附miR-197-3p促进 PCDH 10表达抑制宫颈癌进展的机制研究

目的本研究以has_circ_0065901为研究对象,探讨其在宫颈癌中的分子机制。方法本研究共纳入30对取自新疆医科大学第二附属医院2019年1月至2020年12月患者,对其未经化疗或放疗的宫颈癌组织和癌旁组织进行分析。根据基因表达综合(GEO)数据库(GSE102686)分析发现了异常表达的环状RNA(circRNAs)。通过靶向预测数据库(Targetscan)发现has_circ_0065901的靶向微小RNA(miRNA)是miR-197-3p。通过TargetScan和癌症基因组图谱(TCGA)数据库发现原钙黏蛋白10(PCDH 10)是miR-197-3p的靶基因之一。此外,荧光素酶报告基因测定证实了靶标关系。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(WB)定量测定has_circ_0065901、miR-197-3p和PCDH 10的表达。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪和细胞迁移检测细胞的增殖能力和迁移能力。最后通过体内裸鼠成瘤实验对其进行验证。结果发现在宫颈癌组织细胞中has_circ_0065901表达下调并能够抑制肿瘤细胞增殖和迁移,且差异具有统计学意义(P<0.05)。进一步检测发现has_circ_0065901的靶基因miR-197-3p在宫颈癌中高表达且能够促进肿瘤增殖和迁移(P<0.05)。此外,PCDH 10在宫颈癌组织及细胞中低表达,过表达PCDH 10能够显著抑制肿瘤细胞增殖和迁移且差异具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测验证has_circ_0065901、miR-197-3p及PCDH 10三者之间的靶向关系且差异均存在统计学意义(P<0.05)。结论Has_circ_0065901能够竞争性吸附miR-197-3p,通过调节PCDH 10的表达来抑制细胞的增殖和迁移。

血清外泌体Has_circ_0060937过度表达与NSCLC转移和不良预后的关系

目的 分析血清外泌体has_circ_0060937与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)转移和不良预后的关系。方法 选择2017年5月至2021年12月我院诊治的63例NSCLC患者和83例良性肺结节患者作为对象。实时荧光定量PCR法检测血清外泌体has_circ_0060937表达水平,随访患者总生存率。结果 NSCLC组血清外泌体has_circ_0060937表达水平高于良性肺结节组(P<0.001),可用于良好区分NSCLC组vs.良性结节组,受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI:0.818~0.898)。根据血清外泌体has_circ_0060937表达水平中位值对NSCLC患者分层,高表达亚组TNM分期、淋巴结转移和远处转移>2个位置的风险高(P<0.05)。血清外泌体has_circ_0060937表达水平预测NSCLC淋巴结转移或远处转移>2个位置的AUC分别为0.855(95%CI:0.807~0.903)和0.762(95%CI:0.702~0.823)。血清外泌体has_circ_0060937低表达亚组总生存预后更长(χ2=14.022,P<0.001)。Cox回归分析显示血清外泌体has_circ_0060937表达水平(HR=1.375,P<0.001)是不良总体生存的显著预测因子。结论 血清外泌体has_circ_0060937有望成为NSCLC转移和不良预后的新型生物标志物。