山楂叶类保健食品中总黄酮的提取及抗氧化活性研究

目的 建立有效测定山楂叶类保健食品中总黄酮含量的方法 ,同时研究山楂叶总黄酮的抗氧化功效。方法 以胶囊剂为例,研究山楂叶总黄酮提取的料液比例、溶剂乙醇体积分数和水浴蒸发温度,并采用响应面分析法优化最佳提取条件。验证方法 的线性、重复性、精密度、稳定性、准确度。对抗氧化性进行研究,测定山楂叶总黄酮的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine,DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率。结果 建立以料液比0.025 (g/m L)、溶剂乙醇体积分数65%、水浴温度65℃的山楂叶总黄酮提取处理方法 。建立的方法 总黄酮重复性良好,平均含量为1.3 g/100 g,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.6%,仪器精密度为0.02%(n=6)。实验方法 总黄酮回收率在90.57%~94.18%之间,RSD为1.3%。山楂叶总黄酮DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除效率分别能达到88.92%、84.46%、70.95%。结论 本研究建立的山楂叶总黄酮检测方法 结果 准确,得出山楂叶总黄酮具有较强的抗氧化功效,为高效快速测定以山楂叶为原料的保健食品中总黄酮的含量提供理论依据。

山楂叶总黄酮对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠体内抗氧化酶活性及相关基因表达的影响

糖尿病严重危害人类健康,其发病机制与氧化应激有关。山楂(Crataegus pinnatifida Bunge)作为药食兼用植物,其中的山楂叶总黄酮(total flavonoids from hawthorn leaf,TFHL)具有良好的抗氧化性。为了研究山楂叶总黄酮对糖尿病小鼠的抗氧化作用,以84只4周龄SPF级雄性ICR小鼠作为实验研究对象,将其随机分为空白对照组、模型对照组、DMSO模型对照组、山楂叶总黄酮高、中、低浓度组、阳性对照组,组间体质量差异不显著。各模型组小鼠以150 mg/kg一次性腹腔注射1%的链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),构建STZ诱导的糖尿病小鼠模型,空白对照组注射等量的柠檬酸钠溶液。模型制备成功后,每天定时灌胃,灌胃28 d。试剂盒法检测小鼠血清和肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)酶活性及丙二醛(MDA)含量,荧光定量PCR法测定抗氧化基因SOD-1、SOD-2、GPX-1、GPX-4表达量。结果表明:山楂叶黄酮能极显著提高糖尿病小鼠血清和肝脏中的SOD、T-AOC、GSH-PX酶活性(P<0.01),极显著降低MDA含量(P<0.01);并显著上调了糖尿病小鼠肝脏中SOD-1、SOD-2、GPX-1和GPX-4基因的表达。山楂叶黄酮能改善STZ诱导的糖尿病小鼠的氧化应激,提高其抗氧化能力。

山楂叶总黄酮对大鼠血管环的作用及其机制探讨

山楂叶总黄酮（hawthorn leaves flavonoids,HLF）是从花期山楂的叶子中提取的黄酮类化合物的总称,具有资源广泛、有效成分含量高等特点,现已应用于冠心病、心绞痛。

山楂叶总黄酮对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

目的研究山楂叶总黄酮对糖尿病小鼠血糖和血脂等生化指标的影响。方法采用四氧嘧啶(45mg/kg)尾iv建立糖尿病小鼠模型,并ig不同剂量的山楂叶总黄酮,给药30d后用生化方法检测相关指标。结果山楂叶总黄酮可明显降低糖尿病小鼠血清中血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、果糖胺(FA)、山梨醇和大脑脂褐质水平(P<0.01),升高血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平(P<0.05),呈剂量效应关系,对由糖尿病引起的肝脏组织脂肪积累有一定的清除作用。结论山楂叶总黄酮具有显著降低糖尿病小鼠血糖和血脂的作用,并对糖尿病并发症和肝脏组织脂肪积累具有一定的防治作用。

山楂叶总黄酮降血脂防治鹌鹑脂肪肝形成的实验研究(英文)

目的研究不同浓度的山楂叶总黄酮对鹌鹑血脂和脂肪肝形成的防治作用。方法将60只雌、雄各半的鹌鹑分成6组:正常组(N)喂以普通饲料;高脂饮食模型组(M)喂以高胆固醇脂饲料,诱发形成脂肪肝模型;脂必妥药物对照组(ZBT)、山楂叶总黄酮低、中、高浓度实验组(HLF1、HLF2、HLF3)在喂高脂饲料的同时分别喂1g/kg体重ZBT、20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg体重山楂叶总黄酮溶液各1mL。实验6个月后取动物血清、肝脏,检测动物血清、肝脏组织中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)的含量,制备鹌鹑肝脏组织石蜡切片和电镜切片观察其病理学变化。结果山楂叶总黄酮实验各组与模型组相比,其血清和肝脏匀浆液的TC、TG、LDL-C、MDA、AST、ALT等含量均显著下降(P<0.001),而HDL-C、GSH、SOD含量则明显上升(P<0.001),且山楂叶总黄酮的浓度呈明显的量效关系。石蜡切片和电镜切片也显示山楂叶总黄酮实验组动物肝脏中的脂质积累和脂肪肝病理学变化明显轻于模型组。结论山楂叶总黄酮具有明显降低血脂、减轻动物肝脏内各类脂质沉积的作用,还具有很好的抗氧化作用,能显著地保护肝脏组织的生理生化功能,对由高脂饮食引起的高血脂和脂肪肝具有明显的防治作用。

日粮中添加山楂叶总黄酮对黄羽肉鸡脂肪代谢的影响

试验初步探讨了不同剂量的山楂叶总黄酮对黄羽肉鸡脂肪代谢的影响。480只21日龄雄性黄羽肉鸡随机分为4组,每组4个重复,每个重复30只。对照组A组饲喂基础日粮,试验组B、C、D组分别在基础日粮中添加5、10和20 mg/kg的山楂叶总黄酮。试验期为42 d。结果表明:(1)日粮中添加山楂叶总黄酮对黄羽肉鸡脂肪的沉积具有一定的调节作用:49日龄时,添加山楂叶总黄酮提高了鸡的脂肪沉积量,其中20 mg/kg剂量组肉鸡腹脂率显著高于对照组(P<0.05);63日龄时,添加山楂叶总黄酮降低了鸡的脂肪沉积,其中20 mg/kg剂量组皮下脂肪率与腹脂率分别比对照组降低了20.1%(P<0.05)与26.6%(P<0.05),血清TG、TC水平也显著降低。(2)添加山楂叶总黄酮对49日龄黄羽肉鸡肝脏MD的活性无显著影响,但显著降低了脂肪组织中脂肪分解关键酶-HSL的活性(P<0.05);63日龄时,随着添加剂量的升高,肝脏MD的活性有降低的趋势,其中20 mg/kg剂量组显著低于对照组(P<0.05);同时脂肪组织HSL的活性也有升高的趋势(P>0.05)。表明试验后期脂肪合成减少,而脂肪分解增强。(3)日粮中添加山楂叶总黄酮显著降低了黄羽肉鸡49日龄及63日龄时血清insulin的水平;对血清Leptin水平呈现阶段性变化:在黄羽肉鸡49日龄时,显著升高了血清Leptin水平;63日龄时,降低了血清Leptin水平,其中10 mg/kg剂量组与对照组差异显著(P<0.05)。

山楂叶总黄酮对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的保护作用

目的观察山楂叶总黄酮对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的保护作用。方法结扎麻醉犬冠脉复制心肌缺血模型。观察给药后ST段偏移总和(∑-ST)、ST段抬高≥2mV的个数(N-ST)和乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)的变化。通过TTC染色,观察心脏梗塞范围。结果山楂叶总黄酮可显著减少冠脉结扎所致的∑-ST抬高和N-ST增加,同时减少血清中LDH和CK的释放,缩小心肌梗塞范围。结论山楂叶总黄酮能明显减轻心肌缺血程度。

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝病肝细胞抗氧化作用的研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(HLF)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞抗氧化影响的干预机制。方法:NAFLD细胞模型采用人肝L-02细胞诱导,分为正常组、模型组、水飞蓟素组和山楂叶总黄酮组(简称HLF组)共4组,运用HLF进行干预,采用试剂盒提供的方法检测各时间点各组细胞MDA、SOD、CAT和GSH-ST的含量。结果:模型组细胞MDA含量随时间变化明显高于其他组,与水飞蓟等组和组比较有统计学差异(P<0.01);模型组细胞SOD、CAT和GSH-ST活力在各个时间点均明显低于其他组,与水飞蓟组和HLF组比较有统计学差异(P<0.01)。结论:HLF能显著降低NAFLD肝细胞MDA含量,提高肝细胞SOD、CAT和GSH-ST活力,延缓或阻止NAFLD的进展。

山楂叶总黄酮冻干粉对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死的影响

目的研究山楂叶总黄酮对犬心肌梗死的保护作用。方法采用麻醉犬冠脉结扎导致心肌梗死的方法造模,观察给药前后的影响。结果山楂叶总黄酮冻干粉高、中剂量组能降低冠脉结扎所致心肌梗死麻醉犬的SAP、DAP、MAP。结论不同剂量山楂叶总黄酮冻干粉可明显缓解心肌缺血症状。

山楂叶总黄酮对高脂血症大鼠血管功能损伤的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FHL)对高脂血症大鼠血管功能损伤的保护作用及机制。方法采用维生素D3加脂肪乳剂造成大鼠高脂血症模型,观察离体血管舒张及收缩反应,同时检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、NO和内皮素(ET)的量。结果FHL可明显降低血清TC、TG和LDL-C的量,提高HDL-C与TC比值。FHL可增强大鼠离体血管舒张及收缩反应,且可使血清NO的量升高,ET的量降低。结论FHL具有调血脂作用,对高脂血症所致大鼠血管功能损伤具有明显保护作用,其对血管内皮依赖性舒张反应的保护作用可能与增加NO,减少ET合成、分泌有关。

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝病细胞病理及血脂影响的实验研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(HLF)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞病理及血脂影响的干预机制。方法:采用肝L-02细胞诱导建立NAFLD模型,分为正常组、模型组、水飞蓟素组和山楂叶总黄酮(HLF)组共4组,运用HLF进行干预,检测肝细胞的抑制率、甘油三酯(TG)及超微量Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,并观察肝细胞超微病理改变。结果:模型组细胞生长明显受抑制,HLF药物组细胞生长的抑制率显著低于模型组,组间比较有极显著差异(P<0.01或P<0.05)。HLF药物组降低TG,提高超微量Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力与模型组相比较有极显著差异(P<0.01)。模型组肝细胞线粒体水肿,外膜破裂,细胞核形状改变,呈凋亡特征性改变;HLF药物组肝细胞病理损伤较模型组明显改善。结论:HLF能显著降低NAFLD肝细胞的生长抑制率,减轻NAFLD对肝细胞的病理损伤,能降低TG并提高超微量Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力,干预脂肪性肝病的进展。

山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤

目的探讨山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。方法山楂叶总黄酮(10、30、90 mg/L)培养SH-SY5Y细胞24 h后,构建缺氧复氧(H/R)细胞模型;将miR-NC、miR-133b、anti-miR-NC、anti-miR-133b质粒转染至SH-SY5Y细胞6 h,加入90 mg/L山楂叶总黄酮处理24 h,再进行缺氧复氧处理。RT-PCR检测miR-133b、RBMX mRNA表达,Western blot检测RBMX、Bax、Bcl-2蛋白表达,采用试剂盒分别检测LDH、SOD、MDA水平,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果预处理SH-SY5Y细胞,山楂叶总黄酮能上调H/R诱导的神经细胞SOD水平,下调LDH、MDA水平,抑制Bax、RBMX表达及细胞凋亡率,促进Bcl-2、miR-133b表达(P<0.05),与H/R诱导的神经细胞过表达miR-133b结果一致。且miR-133b靶向调控RBMX的表达,抑制miR-133b表达逆转了山楂叶总黄酮对H/R诱导的神经细胞损伤的改善作用。结论山楂叶总黄酮通过调控miR-133b靶向调控RBMX的表达改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。

山楂叶多糖和黄酮调节幼鼠的糖脂代谢和免疫功能研究

目的研究山楂叶多糖和黄酮对低免疫力联合高脂饮食幼年大鼠的糖脂代谢和免疫细胞因子的影响,以期为预防和治疗肥胖提供理论支持。方法对高脂饮食诱导肥胖(dietary induced obesity,DIO)组的幼年大鼠,第6周起每日注射40 mg/kg环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)持续2周,诱导低免疫力肥胖大鼠模型,命名为DIO-CTX组。DIO-CTX组分灌胃生理盐水(DIO-CTX)、100 mg/kg山楂叶多糖(DIO-CTX-HLP)及100 mg/kg的山楂叶黄酮(DIO-CTX-HLF),于DIO-CTX造模期间与CTX同时灌胃给药。空白对照(Ctrl组)为基础饲料饮食且无其他给药处理。使用试剂盒法检测大鼠血糖、血脂、血液中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,Cr)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α、白介素(interleukin,IL-1β)、IL-10、转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)。末次给药后采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测幼年大鼠脾淋巴细胞转化功能及免疫器官指数。结果DIO-CTX-HLF和DIO-CTX-HLP组明显抑制因CTX及DIO-CTX处理而升高的血糖、血脂、ALT、Cr、TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β水平(P<0.05);DIO-CTX-HLF和DIO-CTX-HLP组可恢复脾淋巴细胞的增殖及胸腺、脾脏器官指数。因高脂饮食导致的体重增加和CTX导致的体重减少均可被DIO-CTX-HLF和DIO-CTX-HLP恢复接近至正常大鼠体重。结论山楂叶黄酮和多糖提取物可改善低免疫力的肥胖幼年大鼠的血糖和血脂水平,并恢复其免疫功能。

HPLC测定静脉给药山楂叶提取物大鼠血浆中三种黄酮含量

目的:建立同时测定静脉给药山楂叶提取物后大鼠血浆中三种黄酮含量的HPLC方法。方法:采用HPLC,以黄芩苷为内标物,甲醇沉淀蛋白,Phenomsil C18(5μm,250×4.6 mm);流动相:甲醇-乙腈-四氢呋喃-0.4%醋酸水(6∶1.5∶18.5∶74);检测波长:332 nm。结果:实验表明VG药动参数AUC0→t与剂量的增长呈正比,VR、VIT在大鼠血浆中的AUC0→t与给药剂量不成正比,表明VR、VIT在大鼠血浆中遵循非线性药代动力学行为。结论:建立HPLC测定大鼠体内3种黄酮方法简单、专属性强,适用于黄酮类成分大鼠体内的药代动力学研究。

星点设计-效应面法优化山楂叶总黄酮微孔渗透泵控释片处方

目的应用星点设计-效应面法优化山楂叶总黄酮微孔渗透泵控释片处方。方法以乳糖的用量、致孔剂用量、包衣增重为考察因素,2、6、12 h山楂叶总黄酮的累计释放度为评价指标,采用Design-expert软件对实验数据进行多元线性模型和二次多项式模型拟合,得出最佳数学模型,然后绘制效应图和等高线图,通过重叠等高线图得到最优处方并进行验证。结果二次多项式模型相关系数优于多元线性模型,为最终拟合模型;最佳处方的各时间点累计释放度的实际值和预测值接近,相对偏差绝对值小于5%,且3个验证处方零级释放特性良好。结论通过星点设计-效应面法建立的模型预测性良好,可用于对山楂叶总黄酮微孔渗透泵控释片处方的优化。

山楂叶总黄酮对脑缺血的保护作用

为研究山楂叶总黄酮 (HawthornLeavesFlavonoids ,HLF)对脑缺血的保护作用。采用两种动物模型 :①通过小鼠急性脑缺血模型 ,计算脑指数 ,检测脑组织内的丙二醛 (MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na+ -K+ -ATP酶 (Na+ -K+ -ATPase)和Ca2 + -ATP酶 (Ca2 + -ATPase)的活性。②采用大鼠的大脑中动脉血栓模型 (MCAO) ,产生局灶性脑缺血 ,计算脑梗塞范围。结果显示 ,HLF降低了模型组小鼠脑指数、脑内MDA ,升高了LDH、Na+ -K+ -ATPase和Ca2 + -ATPase的活性。提示HLF对小鼠脑缺血有一定的保护作用。

山楂叶总黄酮生物溶蚀性骨架型缓释片的制备

目的制备山楂叶总黄酮生物溶蚀性骨架型缓释片,考察其释药机制。方法采用熔融法制备山楂叶总黄酮生物溶蚀性骨架型缓释片,以累积释放量为指标,确定最佳处方,拟合释药动力学方程。结果山楂叶总黄酮生物溶蚀性骨架型缓释片的处方组成为:山楂叶总黄酮100.0 g,硬脂醇26.0 g,羟丙甲纤维素10.0 g,乳糖60.0 g,硬脂酸镁4.0 g,预胶化淀粉60.0 g;所制备的缓释片累积释放百分率2 h为23.3%,5 h为55.2%,8 h为78.4%,12 h为92.2%,在12 h内呈现良好的缓释特征;结论山楂叶总黄酮生物溶蚀性骨架型缓释片释放行为符合一级动力学方程,释放机制为扩散和溶蚀双重机制。

山楂叶总黄酮活血化瘀作用实验研究

目的:观察山楂叶总黄酮(Hawthorn Leaves Flavonoids,HLF)活血化瘀作用。方法:采用体内血栓形成、血小板聚集、微循环、血液流变学测定等方法。结果:HLF可显著抑制大鼠血栓形成,抑制ADP诱导的小鼠血小板体外聚集,显著改善小鼠耳廓微循环状态,降低大鼠血液粘度。结论:HLF具有良好的活血化瘀作用。

山楂叶总黄酮中不同极性成分磷脂复合物的表观油水分配系数研究

目的:探讨山楂叶总黄酮磷脂复合物提高总黄酮有效部位中不同极性成分的油水分配系数,从而改善口服生物利用度。方法:采用摇瓶法,运用HPLC测定山楂叶总黄酮中牡荆素鼠李糖苷、芦丁、槲皮素的含量,并计算山楂叶总黄酮、山楂叶总黄酮与磷脂的物理混合物以及山楂叶总黄酮磷脂复合物中此3种成分在正辛醇/水系统的表观油水分配系数。结果:山楂叶总黄酮磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷、芦丁、槲皮素3种成分的表观油水分配系数均高于山楂叶总黄酮、山楂叶总黄酮与磷脂的物理混合物中相应的成分。结论:对于含有不同极性成分的中药总黄酮有效部位,制备磷脂复合物可能是提高口服生物利用度的有效方法。

壳聚糖/海藻酸盐复合支架联合山楂叶总黄酮修复脊髓损伤

背景:有研究证明山楂叶总黄酮对脊髓损伤具有一定的治疗作用,但是给药方式局限于腹腔注射,而直接应用于脊髓损伤部位的报道较少见。目的:比较负载山楂叶总黄酮缓释微球壳聚糖海藻酸盐复合支架与腹腔注射山楂叶总黄酮联合壳聚糖海藻酸盐复合支架修复脊髓损伤的效果。方法:制备壳聚糖海藻酸盐复合支架、山楂叶总黄酮缓释微球与负载山楂叶总黄酮缓释微球的壳聚糖海藻酸盐复合支架。取40只SD大鼠,建立脊髓全切损伤模型,随机分4组:损伤对照组术后腹腔注射生理盐水;支架组植入壳聚糖海藻酸盐复合支架,术后腹腔注射生理盐水;支架+药物注射组植入壳聚糖海藻酸盐复合支架,术后腹腔注射20 mg/(kg·d)的山楂叶总黄酮;负载药物支架组植入负载缓释微球的壳聚糖海藻酸盐复合支架,术后腹腔注射生理盐水。术后8周内应用BBB评分与斜板实验评估大鼠运动功能,术后8周时进行脊髓组织病理组织形态观察及Western Blot检测。结果与结论:①自术后2周开始,植入支架3组大鼠的BBB评分与斜板实验角度均高于损伤对照组(P<0.05),支架+药物注射组、负载药物支架组高于支架组(P<0.05),负载药物支架组高于支架+药物注射组(P<0.05);②苏木精-伊红染色显示,损伤对照组损伤区域未见脊髓组织,其余3组植入的支架与损伤脊髓端连接较紧密,并且支架材料中长入了组织与细胞,支架+药物注射组与负载药物支架组长入的组织较多;③Western Blot检测显示,植入支架3组的胶质纤维酸性蛋白表达低于损伤对照组(P<0.05),神经丝蛋白200、髓磷脂碱性蛋白、生长相关蛋白43表达高于损伤对照组(P<0.05);负载药物支架组的胶质纤维酸性蛋白表达低于支架组、支架+药物注射组(P<0.05),支架+药物注射组低于支架组(P<0.05);负载药物支架组的神经丝蛋白200、髓磷脂碱性蛋白、生长相关蛋白43表达高于支架组、支架+药物注射组(P<0.05),支架+药物注射组的神经丝蛋白200、髓磷脂碱性蛋白、生长相关蛋白43表达高于支架组(P<0.05);④结果表明,山楂叶总黄酮腹腔注射或以缓释微球局部应用联合壳聚糖海藻酸盐复合支架均可促进脊髓损伤的修复,其中以缓释微球局部应用的效果更好。