减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

离子交换树脂法规模化生产乳源酪蛋白糖巨肽及其对流感病毒的血凝抑制活性

目的:优化规模化生产乳源酪蛋白糖巨肽(CGMP)的工艺条件,并探讨其对流感病毒的血凝抑制能力。方法:以阴离子交换树脂为分离介质,唾液酸含量为产品的活性检测指标,分别从上样体积、上样流量、洗脱液浓度、洗脱液体积和树脂使用周期5个工艺条件,在前期小试和中试的基础上,考察从乳清粉中规模化生产CGMP;同时利用血球凝集抑制试验验证产品CGMP对流感病毒的抑制活性。结果:优化的CGMP产品技术路线为上样体积3BV、上样流量0.8 L/min、洗脱体积1BV、洗脱液浓度0.6 mol/L、树脂适宜使用周期4次。该工艺条件下处理乳清粉溶液体积为108 L(2160 g)、树脂36 L,得到CGMP产品21.183 g,得率为0.981 g/100 g,产品纯度为89.032%,回收率为51.972%,唾液酸含量为21.503 g/100 g,蛋白CGMP产品对流感病毒A(H1N1)和流感病毒B的最低抑制质量浓度分别为1.0000,1.2500 mg/mL。结论:利用优化的技术路线生产获得CGMP产品的纯度和唾液酸含量均优于市售商品CGMP,且对流感病毒有明显的抑制作用。

间接EL ISA与HI检测鸡新城疫抗体相关性

应用间接 EL ISA和微量红细胞凝集抑制试验 ,同时对来自两个鸡场的 1 71份血样进行常规鸡新城疫抗体检测。结果表明 ,二种方法的抗体效价检测结果呈显著相关 ,其相关系数为 0 .92 49(r2= 0 .8560 ) ,设置 t检验 ,差异显著 t<0 .0 0 0 1 ,(n= 1 71 ) ,并测得总体和各鸡群的回归方程 ,其中总体的回归方程式为 EL ISA =0 .2 80 5× HI-0 .450 9。 EL ISA方法具有敏感 ,特异 ,快速 ,简便的优点 。

His-N2蛋白体外排除抑制大肠杆菌DH5α黏附猪肠黏液蛋白的研究

以植物乳杆菌KLDS1.0320候选表面黏附蛋白NP_785232 N端前两个结构域组成的融合表达蛋白为研究对象,采用体外模拟肠道环境的方法研究其对大肠杆菌DH5α黏附猪肠黏液的排除抑制作用。对猪肠黏液进行固定,加入His-N2融合表达蛋白37℃孵育1h,再加入大肠杆菌DH5α菌悬液37℃孵育1h,洗去未黏附的菌体,之后用1%Triton?X-100进行裂解,将裂解液涂布LB琼脂平板以进行菌落计数。结果表明:pH值为6.6时,相对于缓冲液阴性对照组,His-N2蛋白对大肠杆菌DH5α黏附猪肠黏液的抑制率为(50.37±3.66)%,相对于BSA蛋白对照组的抑制率为(38.33±4.55)%;pH值为7.5时,相对于缓冲液阴性对照组,His-N2蛋白对大肠杆菌DH5α黏附猪肠黏液的抑制率为(42.18±3.44)%,相对于BSA蛋白对照组的抑制率为(34.48±3.90)%。在体外模拟条件下,由植物乳杆菌KLDS1.0320的候选表面黏附蛋白NP_785232 N端前两个结构域组成的His-N2蛋白能排除抑制大肠杆菌DH5α对猪肠黏液蛋白的黏附。

几种常用ND HI试验方法的比较与分析

对几种常用 ND HI试验方法作比较 ,结果表明 ,在全量法和微量法中以生理盐水为稀释液 ,以 1 %红细胞悬液作反应指示剂和 1 0 0 %凝集抑制为判定终点的方法效果为佳。全量法测得的 HI滴度较微量法的约高 0 .5～ 1个滴度 ,其灵敏度和准确性较高 ,从而更适于实际工作中 ND抗体水平的免疫监测。

西藏兔病毒性出血症的研究——病原鉴定及疫苗免疫效力试验

1994年 6～ 7月 ,西藏林芝地区家兔大批急性死亡 ,经过流行病学调查 ,临诊症状观察 ,病理剖检等结果与兔病毒性出血症特征相符。进一步作病毒学检查表明 ,病变组织超薄切片经电子显微镜观察发现有大量直径约 30nm的球状裸露的病毒粒子 ;自然病死兔肝组织匀浆上清能凝集人O型红细胞 ,而且血凝性能被兔出血症病毒阳性抗血清所抑制 ,致病性试验结果表明 ,该病毒对兔有很强的致病性 ;用西藏自然病死兔肝组织匀浆试制的灭活疫苗免疫家兔后 ,分别用西藏自然病死兔肝组织匀浆和江苏兔出血症病毒攻毒 ,均 1 0 0 %保护 ,而未接种灭活疫苗的对照兔 1 0 0 %死亡。上述结果表明 ,西藏林芝地区八一新村家兔急性死亡是由兔病毒性出血症病毒所致死。自制的西藏兔病毒性出血症灭活疫苗经安全、免疫效力等试验 ,推广应用效果好。

二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定

本试验对从广西分离的 4株疑似副鸡嗜血杆菌 (H .pg) (GX_95 ,GX_97,GX_98_1,GX_98_2 )进行生物学特性研究。根据生物学特性 ,GX_97和GX_98_1被定为H .pg,GX_95和GX_98_2的生化反应特性有明显差异 ,用标准H .pg血清未能定型。交叉血凝抑制 (HI)试验显示 ,各菌株之间的交叉HI效价达 16 0 ,但各菌株与其本身的抗血清HI效价达 12 80 ,显示出很强的菌株特异性。抗菌素敏感试验也显示GX_97。

流行性出血热灭活疫苗人群免疫及流行病学效果观察

为了观察EHF灭活疫苗的免疫力和流行病学效果,选择一个发病率在380～860/10万的集体单位职工作为疫苗接种组,并以该单位所在地的同一景观生活的农民作为对照组(发病率在170～120/10万之间)。1989年10月首次免疫接种后,抗EHF病毒NT抗体阳转率为148/150,HI抗体为149/150;2种抗体的几何平均滴度分别为80.67和38.68。1年后抗体阴转为20～25%。1990年9月加强免疫接种后,NT抗体阳转率为100%,几何平均滴度为81.85,1年后阴转率为5～8%。经3年的流行病学效果观察,观察点再未发生EHF病例,认为该疫苗足以控制本病流行。

猪乙型脑炎乳胶凝集试验与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验 (HI)和乳胶凝集试验 (LAT)两种方法检测乙型脑炎弱毒疫苗免疫猪血清 ,结果均呈阳性反应。用LAT对来自 12个猪场的 94份猪血清进行了乙型脑炎病毒 (JEV)抗体检测 ,并与HI进行了对比 ,两种方法检测结果阳性符合率和总符合率分别为 90 .3% (5 6 /6 2 )和 88.3% (83/94 ) ,两种方法检测结果差异不显著 (p >0 .0 5 )。对来自无乙型脑炎的 12头健康猪血清进行检测 ,两种方法检测结果均为阴性。结果表明 ,用LAT与HI检测乙型脑炎结果符合 ,前者更为简便和实用。

H5亚型禽流感灭活疫苗免疫后鸡血凝抑制抗体动态变化观察

选择国家指定的两个厂家生产的禽流感灭活疫苗(H5亚型,N28株)进行无母源抗体来航鸡的免疫试验。通过鸡免疫后血凝抑制(HI)抗体的动态性检测,对两个疫苗的免疫效果进行了观察。研究结果表明,两个疫苗均具有良好的免疫效果,但也存在一定程度的差异; 加强免疫可以明显提高抗体水平,延长免疫保护时间。

四川省2002年人群流感病毒感染状况分析

目的 :了解流感病毒在四川省健康人群中的感染状况 ,为我省流感流行趋势的预测和预防提供理论依据。方法 :采用血凝抑制试验 (HI test)对不同地区不同年龄组人群的 14 3份血清标本进行检测。结果 :四川省 2 0 0 2年健康人群对A/上海 / 7/ 99、A/福建 / 15 1/ 2 0 0 0、B/上海 / 2 0 / 2 0 0 1和 B/浙江 / 2 / 2 0 0 1的抗体阳性率分别为 96 .5 %、10 0 %、96 .5 %和 6 7.8% ;对 A/上海 / 7/ 99、 A /福建 / 15 1/ 2 0 0 0、 B/上海 / 2 0 / 2 0 0 1和 B/浙江 / 2 / 2 0 0 1的抗体几何平均滴度分别为 5 9、 2 0 7、 76、 2 3。结论 :B/浙江 / 2 / 2 0 0 1类病毒有引起流感爆发的潜在可能性。

青海湖鸟岛斑头雁种群对H5N1亚型禽流感病毒的免疫状况

斑头雁(Anserin dicus)是2005年青海湖H5N1型高致病性禽流感的主要被感染物种。为了解斑头雁目前对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)免疫状况,2008年春季,在青海湖鸟岛采集该种群弃卵(68枚)和巢卵(125枚),以血凝抑制试验(HI)检测抗H5N1亚型禽流感病毒的卵黄母源抗体(IgY)。根据测试结果推断,在高致病性禽流感暴发3年后,青海湖鸟岛繁殖的斑头雁种群有26.5%～35.2%的繁殖对可能已经获得了对H5N1型禽流感病毒的免疫能力。另外,以斑头雁巢密度和抗体效价进行相关分析发现,斑头雁母源抗体水平与斑头雁巢密度正相关(r=0.736,P=0.000),表明高密度繁殖群内的母源抗体传递更具有适应性意义。

3种犬细小病毒感染诊断方法比较

本研究应用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、血凝/血凝抑制试验和PCR方法对120份具有腹泻/呕吐症状的患犬粪便样本进行了犬细小病毒检测。结果显示,3种方法检测阳性份数分别为60,49,68。犬细小病毒抗原快速检测试剂盒与血凝/血凝抑制(HA/HI)试验相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为100.0%,84.5%,90.8%;与PCR法相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为85.3%,96.2%,90.0%。从试验结果看,HA/HI法具有较高的特异性,但敏感性较低;PCR具有高度敏感性和特异性,但不适合临床推广;细小病毒抗原快速检测试剂盒,在正确操作下结果可靠,是临床诊断犬细小病毒感染的首选方法。

绿头鸭卵黄硒含量与禽流感新城疫病毒抗体滴度关系探讨

绿头鸭(Anas platyrhynchos)是大庆龙凤湿地的优势物种,为研究绿头鸭卵黄硒含量与病毒抗体之间的相关关系,采用血凝抑制试验及原子荧光光谱法(AFS)检测105枚绿头鸭卵黄内硒含量及H1、H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)抗体。结果表明,卵黄硒含量为0.48μg/g±0.15μg/g;卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体阳性率分别为:100%、59.05%、71.43%、68.57%;其评价抗体滴度分别为:6.17log2、2.89log2、3.34log2、4.22log2。经相关分析结果表明,卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体滴度与卵黄硒含量的相关系数分别为:0.077、0.714、0.690、0.611。由此可见,龙凤湿地绿头鸭种群卵黄硒含量与相关病毒抗体之间呈明显的正相关,说明硒元素对动物机体抗病毒能力起到一定的增强作用。

西藏林芝地区首次发现兔出血症病毒血清亚型

经交互保护试验发现，用西藏兔出血症病毒制备的疫苗免疫家兔后能抵抗同源病毒和江苏兔出血症病毒攻击，保护率均为１００％；而用江苏兔出血症病毒制备的疫苗对西藏兔出血症病毒却不能提供有效的保护，保护率仅为３３．３％。交互血凝抑制和琼脂扩散试验表明，两者在血凝素抗原及琼脂扩散抗原上均存在较大差异。首次发现兔出血症病毒血清亚型。

大流行流感疫苗血清学检测中马血球和鸡血球血凝抑制试验方法的比较

血凝抑制试验(HI)是评价季节性流感疫苗免疫效果的经典方法。由于对人、禽流感病毒的受体不同,不同来源的红血球检测敏感性可能有差异。实验中比较了经典的鸡血球HI方法和国外报道的马血球HI方法,发现两种方法在检测大流行流感疫苗接种者血清时,于不同毒株抗原检测时表现各不相同,检测结果差异在2倍之内,说明经典的鸡血球HI方法仍适用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。

检测鸡产蛋下降综合症抗体的ELISA法在田间应用的可行性研究

应用商品化酶联免疫吸附试验(BLISA)试剂盒和血凝抑制试验(HI)法,同时测定了173个常规鸡产蛋下降综合症(EDS_(76))抗体送检样品.结果显示,ELISA 法的灵敏度和特异性分别为 HI 法的93.9%和100%.每一样品用这二种方法在相互独立的条件下,检测取得了基本相同的结果,Kappa 值达到了0.97,表明了这二种方法有很好的一致性。二种方法抗体效价的相关性分析表明,相关系数为0.77.在对带有高、中、低抗体和阴性混合血清的重复测定中,发现随着 S/P 值的变小,其标准差也随之减小,显示了较好的重复性.本试验还对阴阳性判别的临界点的设定对试验灵敏度的影响进行了分析。

2006-2007年广州市大学城流感疫情病原体分析

目的分析2006-2007/06广州市大学城内不同校区的流感疫情的病原体。方法在疫区采集咽拭子标本,用MDCK细胞培养法分离病毒,用豚鼠红细胞凝集试验进行鉴别,对阳性标本进行病毒传代,然后用红细胞凝集抑制试验进行分型。提取不同校区病毒株的RNA,通过RT-PCR方法扩增流感病毒血凝素全长基因,测序并采用DNAs-tar软件对其核苷酸序列进行分析。结果2006年,35份咽拭子标本中有20份标本(57.1%)在HA试验中呈阳性反应,HI试验显示均为H1型流感病毒;2007年,48份咽拭子标本中有19份标本(39.6%)在HA试验中呈阳性反应,HI试验显示均为H3型流感病毒。2006年,两所校区的流感病毒株血凝素基因的同源性为96%;2007年,3所校区的流感病毒株血凝素基因的同源性为99%。结论2006年-2007年发生在不同校区的流感疫情都是各由同一病毒株所引起的。

卵肉兼用鸡鸡新城疫免疫监测

用鸡新城疫(ND)血球凝集抑制(HI)试验对卵肉兼用的贵州黄鸡进行ND免疫监测。结果表明,该场鸡群从7日龄至510日龄整个饲养过程,鸡群始终处于免疫保护状态中,说明ND免疫程序是合理的;免疫临界滴度、免疫鸡只HI价的个体差异致使有发生ND的可能。

2012-2017年辽宁省猪流感血清学调查分析

目的摸清近年来辽宁省规模猪场猪流感流行状况。方法本研究于2012年10月至2017年3月从辽宁省规模化猪场中采集猪血清样品共计2 161份,采用血凝抑制试验(HI)进行了欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(pdm/09H1N1)、H3N2SIV和H7N9亚型流感病毒抗体检测。结果 2012-2017年期间,EA H1N1年平均抗体阳性率分别为29.00%、49.62%、42.50%、3.64%、1.46%、13.89%;pdm/09H1N1年平均抗体阳性率分别为6.49%、12.69%、18.00%、64.24%、39.79%、35.56%;H3N2年平均抗体阳性率分别为0.87%、1.54%、0、0、0、0;H7N9亚型抗体未检测到;2012-2014年期间辽宁省猪群中EA H1N1SIV为优势亚型,2015-2016年期间EA H1N1SIV抗体阳性率明显下降,最低至1.46%,2017年EA H1N1SIV抗体阳性率又显著上升至13.89%;而2012-2015年期间辽宁省猪群中pdm/09H1N1SIV抗体阳性率逐年升高,2015年达到最高值至64.55%,2015-2017年期间辽宁省猪群中SIV pdm/09H1N1为优势亚型;SIV感染表现出一定的区域性分布特征,辽东、辽南和辽北地区阳性率较辽西和辽中地区高。结论检测结果表明,2012-2017年间辽宁省猪群中EA H1N1和pdm/09H1N1亚型SIV感染较为普遍,H3N2亚型流感抗体阳性率较低,未检测到H7N9流感病毒抗体。