热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)对人类ether-a-go-go相关基因(hERG)-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型(WT)、突变型(A561V)、杂合型(WT/A561V)细胞模型,采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载(Itf NC)、Hsp90减表达(Hsp90-)、过表达空载(Ovp NC)或Hsp90过表达(Hsp90+)质粒至各细胞模型(即Itf NC组、Hsp90-组、Ovp NC组、Hsp90+组),另设不加载体的对照(Ctl)组,采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG(135 kDa)蛋白表达水平均较野生型明显升高(均P<0.05)。野生型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)、hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),突变型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),杂合型细胞模型Hsp90+组hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05)。融合Hsp90和hERG蛋白后,Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质,Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少,Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较,Hsp90+组Ikr曲线左移14.709,斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50 mV处达到最高;杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30 mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05),在30、40 mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05)。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用,而上调Hsp90可促进WT/A561V hERG的折叠转运,进而影响通道功能。

黏虫HSP90/70组织蛋白基因的分子特征与表达特性

为解析黏虫Mythimna separata响应环境胁迫的分子机制,采用RACE和RT-PCR的方法从黏虫中克隆了1个HSP90/70组织蛋白(heat shock 90/70 organizing protein, HOP)基因,并采用qRT-PCR分析了其在多种生物和非生物胁迫下的表达特性。结果表明,MsHOP具有1个1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸,预测的分子量为61.7 kDa。序列分析表明,MsHOP主要由已报道的3个保守四肽重复结构域(TPR1, TPR2A和TPR2B)和2个天冬氨酸-脯氨酸重复基序(DP)构成。基于鳞翅目昆虫HOP构建的系统进化树显示MsHOP与棉铃虫Helicoverpa armigera HOP和烟芽夜蛾Heliothis virescens HOP的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,MsHOP在黏虫所有发育时期和组织均表达,分别在5龄幼虫和雌成虫中肠的表达量最高。在30℃下处理1 h后,MsHOP的表达水平较对照显著提高,而在33℃~39℃下处理1 h后MsHOP的表达水平则与对照差异不显著。饥饿24~72 h后,MsHOP的表达与对照相比无明显变化。Bt能显著诱导MsHOP的表达,其表达水平随Bt浓度的升高而上调,并在64 IU/mL浓度下的表达量最高。幼虫饲养密度对MsHOP的表达也具有显著影响,其表达水平随密度的升高而上调,在20头/瓶的饲养密度下达到最大值。这些结果表明,MsHOP可能在黏虫的生长发育、抵御杀虫剂和密度胁迫中发挥重要作用。

灰飞虱热激蛋白Hsp90基因的克隆、序列分析与表达模式

【目的】灰飞虱Laodelphax striatellus(Fallén)是水稻上的重要害虫,它严重影响了水稻的产量和品质,特别由其传播的水稻条纹叶枯病毒对水稻的危害甚至更为严重。灰飞虱分布广,对环境有很强的适应性。本研究旨在探讨灰飞虱对温度胁迫适应的分子机制进行了初步的探讨。【方法】本研究采用RT-PCR与RACE技术克隆了热激蛋白Hsp90基因的全长,利用各种生物信息方法分析了该热激蛋白的特征,实时荧光定量PCR技术用于研究Hsp90基因在不同生长发育阶段和不同温度条件下表达变化规律。【结果】我们获得一条Hsp90基因的cDNA全长序列,命名为LsHsp90(GenBank登录号为KF660250)。LsHsp90全长为2 740 bp,编码729个氨基酸,等电点为5.0,分子量为83.7 kDa。氨基酸序列中含有Hsp90蛋白家族的5个签名序列及胞质特征序列MEEVD。结构预测表明LsHsp90具有Hsp90蛋白家族典型的结构特征。系统进化关系分析表明它与多种昆虫的Hsp90序列有较高的同源性。不同发育阶段的灰飞虱体内LsHsp90表达水平处于动态的变化过程中,并在4龄若虫期达到最大值,最低表达量在其雌成虫阶段。不同性别的灰飞虱成虫体内LsHsp90表达量有显著差异(P=0.008)。高温和低温胁迫都可以诱导灰飞虱体内LsHsp90的表达,最大的表达量分别在40℃和-9℃。在40℃下处理不同时间后发现,LsHsp90的表达水平在处理后0.5 h时最高,但随着时间的延长,LsHsp90的表达水平逐渐降低。而在-4℃下,LsHsp90的表达水平在处理后1 h时达到最大值。【结论】灰飞虱体内的LsHsp90可以响应温度的诱导,它可能在灰飞虱温度胁迫适应过程中起到重要的作用。

热休克蛋白90^ α在血管内皮生长因子165基因治疗大鼠脑梗死中的表达及意义

目的观察热休克蛋白(HSP)90^ α在血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗大鼠脑梗死中的表达，为治疗脑梗死提供实验依据。方法雌性Wistar大自鼠25只，体重为250～300g，随机分为5组，每组5只。正常对照组(A组)予常规饲养；假手术组(B组)在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中，仅将栓线插入颈内动脉约1cm即可；单纯MCAO对照组(C组)，采用改进的线栓法制成永久性MCAO模型；空载质粒对照组(D组)在MCAO模型术后，头顶部剃毛，消毒后采用立体定位仪在梗死区相应部位钻一小孔，以5μl空载质粒(pUCCAGGS，20μg／μl)，然后缝合切口，精心饲养；治疗组(E组)的方法同D组。注入等量的pUCCAGGS／hVEGF165取代空载质粒。实验7d后断头取脑，采用免疫组织化学的方法显示脑中的hSP90^ α表达情况。结果A、B两组整个脑部均无HSP90^ α表达；C、D两组仅有少量表达；E组的半暗带内有明显表达，与C、D组的差异有显著性(P<0．01)，半暗带以外区域仅有少量表达或不表达。结论VEGF165基因可诱导HSP90^ α在特定部位表达。

朱砂叶螨HSP90基因克隆及原核表达

采用RT-PCR及RACE技术克隆朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus的热激蛋白90(HSP90)基因,并进行序列分析,得到一条长2595bp的cDNA序列,该序列开放阅读框(open reading frame,ORF)为2169bp,编码722个氨基酸,分子量约为83.45kDa,理论等电点为4.81,3′非编码区(untranslated region,UTR)为249bp,5′UTR为177bp。通过Antheprot分析发现5个HSP90家族的签名序列及胞质HSP90特征序列MEEVD。同源性分析表明,朱砂叶螨HSP90编码区核苷酸序列和其他已知的HSP90,尤其是节肢动物昆虫的HSP90,具有很高的相似性。将鉴定正确的原核重组表达质粒pET43a-TcHSP90,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(origami)进行原核表达,应用SDS-PAGE和Western blotting技术分离并检测融合蛋白,结果表明构建的原核表达质粒可以在宿主菌中稳定、正确表达。朱砂叶螨TcHSP90基因的克隆、原核表达,为进一步研究HSP90的性质和功能的研究提供有用的实验材料。

日本三角涡虫热休克蛋白90基因克隆及其表达模式

目的克隆日本三角涡虫热休克蛋白90(Djhsp90)基因,并对其在不同应激条件下表达模式进行分析。方法采用PCR技术克隆日本三角涡虫hsp90 cDNA全长序列和基因组DNA序列,利用生物信息学软件对其序列进行分析,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测其在再生、饥饿和热激过程中的表达模式。结果 Djhsp90 cDNA全长2354 bp,含有2148 bp的开放阅读框(ORF),编码715个氨基酸,含有真核生物HSP90家族蛋白的5个标签序列和末端高度保守序列MEEVD。基因组DNA测序表明,该基因仅含有1个内含子(48 bp),内含子的5’-和3’-剪切位点符合经典的"GT-AG"法则。涡虫切断后1d Djhsp90的表达量显著增加,2d达到高峰,3d后逐步下降到正常水平。持久饥饿过程中Djhsp90的表达量维持在较高水平。提高培养温度能显著诱导Djhsp90的表达,且涡虫头部对热效应最敏感。结论我们成功克隆了日本三角涡虫hsp90基因,并证实切割、饥饿和热激能诱导其表达上调。

冷冻对G422胶质瘤HSP90α和P53基因表达的影响

目的 :研究冷冻后G4 2 2胶质瘤HSP90α和P5 3基因表达的变化及两者之间的关系 ,探讨其变化在冻化疗联合应用中的意义。方法 :G4 2 2胶质瘤接种于小鼠后下肢肌腹内 ,长到 2cm大小随机分组实施冷冻 (- 180℃冷冻 90s) ;免疫组化方法检测HSP90α和P5 3的冻前及冻后 6、12、2 4、4 8、72h的表达。结果 :HSP90α的表达在冻后 6h显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,冻后 2 4、4 8、72h其表达显著增高 ;P5 3基因表达于冻后各时点均增高 ,尤以冻后 2 4h和 4 8h最为显著 (P <0 .0 1)。结论 :冷冻影响G4 2 2胶质瘤的HSP90α及P5 3的表达 ,两者的表达呈显著正相关 ;推测冻后两者的表达变化在冻化疗联合应用中起到关键性调节作用。

拟黑多刺蚁hsp90基因的RNA干扰及其对EcR和USP基因mRNA表达的影响

【目的】对拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)成虫热激蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)基因进行RNA干扰(RNAi),为分析hsp90基因的功能及将RNAi技术用于害虫防治提供参考。【方法】采用Trizol法提取拟黑多刺蚁总RNA,反转录合成cDNA第一链用于hsp90基因的克隆。利用T7RiboMAXTM Express RNAi System将hsp90合成双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),将其配制成120,60,30,15和7.5ng/μL的溶液饲喂拟黑多刺蚁雌蚁、雄蚁和工蚁成虫进行RNAi,共饲喂14d,记录成虫死亡率,确定dsRNA最适质量浓度,并以此剂量对各品级成虫进行干扰,通过荧光实时定量PCR,检测干扰效果及干扰hsp90基因对EcR、USP mRNA表达的影响。【结果】成功获得拟黑多刺蚁hsp90基因片段,其长度523bp,并合成了dsRNA。饲喂dsRNA后发现,dsRNA质量浓度越大,拟黑多刺蚁死亡率越高,在dsRNA质量浓度为120ng/μL时,饲喂5d后成虫全部死亡;30ng/μL是dsRNA干扰的最适质量浓度。以30ng/μL dsRNA干扰后,荧光实时定量PCR结果表明,拟黑多刺蚁每个品级成虫hsp90基因mRNA均被沉默。hsp90基因被干扰后,EcR的表达没有显著变化,USP的表达显著降低。【结论】采用饲喂法成功干扰了拟黑多刺蚁hsp90基因mRNA的表达;hsp90基因与USP基因表达有一定的相关性。

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达中的作用

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法 用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun N-末端蛋白激酶 (JNK)的底物 c- Jun的磷酸化程度 ;分别用 JNK1的显性负突变质粒 DN- JNK1、p38c DNA反义表达质粒 anti- p38及 ERK激酶的特异性抑制剂 PD980 5 9瞬时转染或处理Jurkat细胞 ,再行 RT- PCR检测 hsp90 α和 hsp90 β基因的表达水平。分别以转染空载体 (p CDNA3)及未经任何处理的 Jurkat细胞作为相应对照组。结果 45℃热休克 15 min后 ,Jurkat细胞中 JNK1和 p38激酶的磷酸化程度与热休克前相比明显增强 ,ERK的磷酸化较热休克前有所增强。转染 DN- JNK1的细胞中 hsp90 α和 hsp90 β基因的组成性和热诱导表达均较转染空载体的对照组降低 ,尤其对 hsp90 α基因的热诱导表达的影响更为明显 (仅为对照组的6 8% ) ;转染 anti- p38后 ,hsp90 α基因的组成性表达和 hsp90 β基因热诱导表达分别比转染空载体的对照组增加2 6 %和 2 2 % ;经 PD980 5 9处理的 Jurkat细胞中 ,hsp90 α基因的组成性表达比未处理的细胞增加 46 % ,但 PD980 5 9处理对 hsp90 α和

热休克蛋白90对猪胚胎发育过程的影响

[目的]探讨热休克蛋白90对猪胚胎发育过程的影响.[方法]采用改良的退火控制引物差分显示(ACP)技术检测人工授精和核移植猪胚胎中的差异表达基因,再利用实时定量PCR法确认基因的表达情况.[结果]通过改良的ACP技术获得了若干个差异表达基因,利用实时定量PCR法进行了进一步确认,结果见热休克蛋白90在核移植猪胚胎中的表达水平明显低于人工授精猪胚胎(P<0.01).[结论]热休克蛋白90可能参与猪胚胎的发育过程.

Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞株SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响观察

目的探讨Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响。方法将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A、B、C组,A组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L WH-4,B组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L 17-AAG,C组加入等量生理盐水,培养48 h后,采用MTT法测算各组肝癌细胞SK-HEP-1增殖抑制率,并计算IC 50。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A1、B1、C1组,分别加入2.3μmol/L WH-4、2.6μmol/L 17-AAG及生理盐水,培养48 h后,采用BrdU法观察肝癌细胞SK-HEP-1增殖活性。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A2、B2、C2组,分别加入2.25μmol/L WH-4、2.80μmol/L 17-AAG、生理盐水,培养48 h后,采用软琼脂平板实验检测肝癌细胞SK-HEP-1克隆形成率,流式细胞术检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡率,采用Western blotting法检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡蛋白Bcl2、Bax、Bcl-xL。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A3、B3、C3组,分别加入2.30μmol/L WH-4、2.65μmol/L 17-AAG及生理盐水。培养48 h后,采用qPCR法检测耐药基因ABCB1、ABCG2。结果WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1有抑制作用,且呈浓度依赖性(R 2=0.647(48h),P均<0.05),IC 50为(2.35±0.25)μmol/L。与C1组相比,A1、B1组SK-HEP-1绿色荧光减弱。A2、B2组克隆形成率相比,P<0.05。与B2组比较,A2组细胞凋亡率升高(t=0.342,P<0.05),Bax蛋白相对表达量升高,B淋巴细胞瘤-2基因及Bcl-xL蛋白相对表达量降低。A3组ABCB1、ABCG2基因相对表达量低于B3组(t分别为-8.88、-13.00,P均<0.05)。结论Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1具有增殖抑制、诱导凋亡作用,同时可降低耐药基因的表达。

腐烂茎线虫热激蛋白新基因的克隆与序列分析

热激蛋白90基因(heat shock protein 90genes,hsp90s)是与生物发育、生物防御反应以及生物抗环境胁迫等相关的多功能基因。本试验以RT-PCR结合RACE方法从腐烂茎线虫Ditylenchus destructor中克隆出1个hsp90,命名为Dd-hsp90-1,基因登录号为HQ901595。Dd-hsp90-1cDNA全长序列含有1个2 160bp的开放性阅读框(ORF),编码719个氨基酸残基,其5′末端和3′末端分别含有70bp和117bp的非编码区(UTR)。Dd-hsp90-1内含子外显子结构分析结果表明,其基因组序列包含9个内含子,且各内含子两端剪接位点序列遵守GT/AG规则。Dd-hsp90-1基因的推定蛋白Dd-HSP90-1分子质量约为82.79ku。该基因为单拷贝基因,并且与其他热激蛋白90基因高度同源。Dd-HSP90-1具有热激蛋白90家族保守的序列和基系。此外,该基因还具有胞质型热激蛋白90的5个特征序列和特异MEEVD基系,这表明Dd-hsp90-1为胞质型热激蛋白90。系统进化分析结果显示,Dd-hsp90-1与松材线虫热激蛋白90基因(GenBank登录号ACY01918)亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达到86.65%。同时,热激蛋白90基因的系统进化分析结果也体现了植物寄生线虫之间的取食行为差异。

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。

不同断奶日龄对仔猪肝脏热休克蛋白基因表达的影响

为研究不同断奶日龄对仔猪肝脏热休克蛋白70(Hsp70)、热休克蛋白90(Hsp90)和热休克蛋白27(Hsp27)基因表达的影响,试验选取体重相近的24头健康杜长大仔猪,按4种断奶日龄(14日龄、21日龄、28日龄和35日龄)随机分为4个处理组,每组包含6个重复,仔猪42日龄时全部处死取样,用RT-PCR方法检测肝脏中上述基因的相对表达水平。结果表明,在4组断奶日龄仔猪肝脏中,14日龄断奶组Hsp70mRNA的相对表达量显著高于28和35日龄断奶组(P<0.05),显著低于21日龄断奶组(P<0.05);14和21日龄断奶组Hsp90mRNA的相对表达量均显著高于28和35日龄断奶组(P<0.05);14日龄断奶组的Hsp27mRNA的相对表达量均显著高于21、28和35日龄断奶组(P<0.05)。结果提示,断奶日龄显著影响仔猪热休克蛋白基因的表达,且随断奶日龄的推迟,HSPs mRNA的相对表达量呈下降趋势。

乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞热休克蛋白90α基因表达的影响

乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）与肝细胞癌的发生高度相关。我们前期研究发现，热休克蛋白（heat shock protein，HSP）90α在转染HBVX基因的人肝癌HepG2细胞中异常过表达。体外抑制HSP90α基因的表达可明显抑制肝癌细胞的侵袭、转移能力。有研究结果显示HSP90α基因5′侧翼区序列对于HSP90α在肝癌细胞中的高表达起重要作用。我们研究了HBx对HepG2细胞HSP90α基因表达的调控作用，现报道如下。

“靶点+活性”快速发现苦蘵中靶向Hsp90抗胰腺癌有效成分的研究

本研究基于"靶点+活性"双重导向快速发现技术筛选苦蘵中靶向Hsp90蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单体。通过将体外抗肿瘤活性筛选技术、双萤光素酶报告基因技术与多元色谱分离技术相耦合,从中药苦蘵中筛选靶向Hsp90的活性单体。研究化合物抗胰腺癌细胞BXPC-3生长活性,初步探讨化合物抑制Hsp90分子机制。结果显示从苦蘵中分离得到醉茄内酯类化合物withanolide E (WE)与4β-hydroxywithanolide E (HWE)。MTT结果显示,WE与HWE处理BXPC-3细胞48 h的半数抑制率(IC_(50))分别为0.71±0.03和1.23±0.10μmol·L^(-1);萤光素酶报告基因实验结果显示, WE与HWE可使细胞热休克元件活性增强12.5±3.4倍与28.1±3.4倍;两者均呈现量效与时效关系。分子机制研究提示,与DMSO组相比5μmol·L^(-1) WE和HWE分别处理BXPC-3细胞48 h可诱导Hsp90二聚体蛋白表达上调6.5±1.3和11.8±2.0倍, Hsp90客户蛋白Akt表达下调至DMSO组的21.7%±2.8%和9.8%±1.4%; shRNA干扰Hsp90基因表达可阻断其抑制Akt表达与杀伤肿瘤细胞的作用。采用"靶点+活性"双重导向快速发现技术可从苦蘵中筛选得到靶向Hsp90蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单体WE与HWE;其分子机制可能与诱导胰腺癌细胞形成无活性Hsp90二聚体,进而抑制Hsp90客户蛋白Akt表达有关。

用全基因组芯片筛选出佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中表达热休克蛋白90客户蛋白的基因

目的用全基因组芯片筛选出在类风湿性关节炎发生发展中差异表达热休克蛋白90(HSP90)客户蛋白的基因。方法按照体重将SD大鼠随机分为2组:正常对照组和模型组,每组3只。模型组大鼠左后足皮下注射弗氏完全佐剂0.1 mL制备关节炎模型,正常对照组予以等量0.9%NaCl。造模后第21天,深度麻醉下取2组大鼠滑膜组织,用Array star大鼠全基因组芯片来检测差异表达的信使核糖核酸(mRNA),再根据已知的942个HSP90的客户蛋白进一步筛选对应的mRNA。结果筛选出85个与佐剂性关节炎发生发展有关的差异表达HSP90客户蛋白的mRNA,其中上调53个,倍数最高的是白细胞介素-1β(IL-1β);下调32个,倍数最高的是莫霍克同源框(MKX)。结论在HSP90的客户蛋白中,IL-1βmRNA等53个上调的mRNA和MKX等32个下调的mRNA与佐剂性关节炎发生发展密切相关。

突变型p53蛋白稳定表达机制的研究进展

野生型p53(wild-type p53,wtp53)是一种抑癌基因,细胞内其蛋白的稳定性受鼠双微体2(mouse double minute 2,MDM2)蛋白的调节,保持在一个较低的水平;但是p53基因突变后其功能即发生改变,从抑癌基因转变成了对肿瘤发生和发展起促进作用的癌基因,且在肿瘤中高表达。因此,突变型p53(mutant type p53,mtp53)已经成为肿瘤治疗中一个重要的靶点。研究显示,mtp53蛋白的稳定性对其表达并行使功能具有重要作用。因此,了解mtp53蛋白稳定表达的途径,即可为下调mtp53的表达提供一些新的靶点,为肿瘤治疗提供新的途径。本研究旨在对影响mtp53蛋白稳定性的可能途径作一综述。

干扰素诱导基因IFIT3对膀胱癌细胞生物学功能及化疗耐药性的影响

目的:探讨干扰素诱导基因IFIT3在膀胱癌中的表达及对膀胱癌细胞生物学功能和化疗耐药性的影响。方法:本研究通过q RT-PCR或Western blot检测了30例膀胱移行细胞癌患者的肿瘤组织和配对正常癌旁组织标本以及人膀胱癌细胞系T24及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1中IFIT3的表达水平。通过浓度递增法构建顺铂(DDP)耐药T24细胞(T24/DDP),然后对细胞转染靶向IFIT3的si RNA(si-IFIT3)及阴性对照(si-NC)。将细胞分为4组,分别为T24-si-NC组、T24-si-IFIT3组、T24/DDP-si-NC组、T24/DDP-si-IFIT3组,通过MTT法检测细胞增殖,使用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,使用Transwell法检测细胞侵袭能力。通过qRT-PCR或Western blot检测HSP90α(HSP90AA1)、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果:与配对癌旁组织和SV-HUC-1相比,膀胱癌组织和T24细胞中IFIT3的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。与正常T24细胞相比,T24/DDP细胞中的IFIT3 m RNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的IC_(50)值和侵袭细胞数显著降低,而细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的Bcl-2、MMP2和MMP9蛋白相对表达量显著降低,而Bax和Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。String数据库显示,IFIT3与HSP90AA1基因存在互作关系。与T24/DDP-si-NC组相比,T24/DDP-si-IFIT3组的HSP90α(HSP90AA1)表达水平显著降低(P<0.05)。结论:下调IFIT3的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,下调IFIT3可部分通过抑制HSP90α(HSP90AA1)的表达来降低膀胱癌细胞对顺铂的耐药性。