热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

旨在研究宿主热休克蛋白HSP90AB1对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响。选用对PRRSV易感的MARC-145细胞系,探究过表达和干扰HSP90AB1对病毒复制的影响,利用激光共聚焦免疫荧光和免疫共沉淀验证HSP90AB1与PRRSV的非结构蛋白NSP2作用关系,利用双荧光素酶试验探究HSP90AB1和NSP2对NF-kB活性的影响。结果表明,过表达HSP90AB1后显著抑制病毒的复制,干扰HSP90AB1的表达后促进病毒的复制;免疫共沉淀结果和激光共聚焦免疫荧光说明,HSP90AB1和NSP2存在相互作用;双荧光素酶报告试验表明HSP90AB1能逆转NSP2对NF-κB活性的抑制作用。综上,HSP90AB1可能通过与PRRSV NSP2相互作用,拮抗NSP2对NF-kB活性的抑制来抑制病毒的复制和感染。

低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃中热休克蛋白基因家族的表达差异比较

为研究斑马鱼热休克蛋白(HSP)应对低氧胁迫的生物学功能,对低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼Danio rerio鳃组织进行转录组测序,利用实时荧光定量RT-PCR技术检测了低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃中热休克蛋白家族基因的表达差异。结果表明:在参与比较的斑马鱼鳃转录组测序中,共找到80个热休克蛋白家族基因成员;在低氧与常氧条件下鳃中热休克蛋白家族中有28个基因表达呈明显变化,其中16个基因表达量显著上调(P<0. 05),12个基因表达量显著下调(P<0. 05); Hsp47基因是低氧胁迫下表达量增加最明显的热休克蛋白基因,Hsp90ab1基因是低氧胁迫下唯一表达量升高的大分子热休克蛋白基因;低氧胁迫下Hsp47在鳃、肌肉中的表达极显著升高(P<0. 01),Hsp90ab1在鳃、皮肤和肌肉中的表达显著或极显著升高(P<0. 05或P<0. 01);不同低氧浓度胁迫下斑马鱼鳃中HSP47和HSP90ab1蛋白表达均呈现显著增加(P<0. 05)。研究表明,HSP47和HSP90ab1可能是斑马鱼低氧应激中最重要的热休克蛋白成员,具有重要的适应功能。

HSP90AB1与IBV S1蛋白互作调节病毒吸附的研究

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种IBV毒株的S1蛋白发生互作,Gst-pull-down试验证明,HSP90AB1与M41株S1蛋白的互作属于直接互作。进一步的免疫沉淀试验表明,细胞膜HSP90AB1与内源性S1蛋白同样具有互作关系。进一步研究发现过表达HSP90AB1会促进IBV Beaudette对Vero细胞的吸附,而敲低HSP90AB1则抑制病毒吸附H1299细胞;使用商品化的HSP90AB1家兔单克隆抗体预处理Vero细胞则抑制了病毒的吸附;用HSP90AB1蛋白阻断结合位点使病毒吸附细胞的能力显著降低。以上结果表明,HSP90AB1对IBV吸附细胞具有正调节作用,其可能是IBV入侵细胞的一个关键宿主因子。