常春藤皂苷元通过抑制谷氨酸诱导的铁死亡缓解HT22细胞的炎性反应

目的 探讨常春藤皂苷元(hederagenin,HG)对谷氨酸诱导的小鼠海马神经元HT22细胞铁死亡及相应炎性反应的调控作用及其潜在的机制。方法 将HT22细胞分为对照组、谷氨酸组和HG组(n=3),对照组的细胞未接受任何处理,谷氨酸组采用35 mmol/L谷氨酸对HT22细胞进行24 h干预,构建阿尔茨海默病铁死亡的体外模型,HG组使用0.5μmol/L的HG与35 mmol/L谷氨酸共同处理细胞24 h。利用FerroOrange荧光探针测定细胞内Fe^(2+)水平,检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位的变化,炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6水平,铁死亡的关键调控蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase4,GPX4)表达。结果 与对照组比较,谷氨酸组细胞内Fe^(2+)、活性氧、TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高,线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与谷氨酸组比较,HG组细胞内Fe^(2+)、活性氧、TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低,线粒体膜电位明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较,谷氨酸组细胞内GPX4表达明显降低(1.00±0.02 vs 0.46±0.04,P<0.01);与谷氨酸组比较,0.5、1.0μmol/L的HG组细胞内GPX4表达明显升高(0.64±0.03、0.59±0.05 vs 0.46±0.04,P<0.01)。结论 HG通过调节GPX4表达来抑制铁死亡,从而有效减轻炎性反应。

常春藤皂苷元抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡

目的探讨常春藤皂苷元(HDG)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制。方法人GBM细胞株U87、U251和人脑胶质细胞株(HEB)为研究对象,以HDG 0μmol/L(或0 mg/kg)为对照组,实验组分别给予不同浓度HDG;噻唑蓝法(MTT)、EdU染色及细胞平板克隆检测HDG对GBM细胞增殖的影响;锥虫蓝染色检测HDG对GBM细胞死亡的影响;细胞划痕、Transwell实验检测HDG对GBM细胞迁移和侵袭的影响;Annexin V-FITC、JC-10染色及Western blot检测细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2-Associated X的蛋白质Bax、肿瘤蛋白p53、胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3),分析HDG对GBM细胞凋亡的影响;BALB/C小鼠肿瘤异种移植实验分析HDG对GBM体内荷瘤的影响。结果与对照组(HDG 0μmol/L)比较,HDG对U87、U251细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用,且与HDG剂量呈依赖关系;锥虫蓝染色结果显示HDG导致GBM细胞的死亡数量明显增多;HDG明显诱导U87、U251细胞的线粒体膜电位下降、凋亡细胞数量增加以及凋亡相关蛋白Bax、p53、cleaved-caspase3的表达上调和Bcl-2的表达下调;HDG显著抑制BALB/C小鼠皮下GBM的大小、GBM细胞Ki67的阳性率并导致GBM细胞大量死亡;HDG对人HEB细胞以及荷瘤小鼠肝脏无明显毒性作用。结论HDG对GBM细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用且诱导其凋亡,HDG诱导GBM细胞凋亡的机制可能通过介导线粒体损伤及调控p53、Bcl-2/Bax表达。

常春藤皂苷元及其衍生物的药理作用及分子机制研究进展

常春藤皂苷元是一种五环三萜类化合物,具有多种生物活性,并有着抗肿瘤、抗抑郁、抗炎和抗菌等药理作用,其通过调控细胞凋亡、自噬及细胞周期影响肿瘤的进展,并对抑郁症、阿尔茨海默病和骨关节炎等疾病有一定的改善作用。常春藤皂苷元衍生物α-常春藤皂苷元在抗肿瘤研究中也表现出了一定的潜力,其可以诱导肿瘤细胞凋亡和铁死亡,在抑制细胞增殖和转移等方面发挥抗癌作用。本文通过整合近年来常春藤皂苷元及其衍生物的研究成果,进行综述探讨。

常春藤皂苷元(hederagenin)通过抑制STAT3通路降低CaSki宫颈癌细胞增殖能力并促进其凋亡

目的探讨常春藤皂苷元(hederagenin)对宫颈癌细胞活性及凋亡的影响及机制。方法培养CaSki宫颈癌细胞,采用(0、 10、 20、 40、 80)μg/mL常春藤皂苷元处理,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,确定其半数抑制剂量约40μg/mL。采用40μg/mL常春藤皂苷元处理宫颈癌细胞,流式细胞术测定宫颈癌细胞凋亡、 Western blot法测定宫颈癌细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-9、信号转导子和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。用STAT3信号通路抑制剂AG490和常春藤皂苷元共同处理宫颈癌细胞,用上述方法检测细胞活性和凋亡水平。结果与对照组细胞相比, 40μg/mL常春藤皂苷元处理后的宫颈癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡水平升高, c-caspase-3和c-caspase-9水平增加, p-STAT3蛋白水平降低。与常春藤皂苷元处理细胞相比, AG490和常春藤皂苷元共同处理的宫颈癌细胞活性进一步降低,细胞凋亡率增加,细胞中c-caspase-3和c-caspase-9的蛋白水平升高。结论常春藤皂苷元抑制宫颈癌细胞的增殖并诱导其凋亡,与抑制STAT3信号通路有关。

类叶牡丹3种皂苷元对L929细胞炎症模型中HDAC表达的影响

目的:研究类叶牡丹3种皂苷元抑制HDAC3/8进而抗类风湿性关节炎的作用。方法:建立TNF-α诱导的小鼠成纤维L929细胞炎症模型,通过CCK-8方法检测3种皂苷元的最佳给药浓度和TNF-α的最佳造模浓度,以IL-6浓度为指标,运用ELISA法验证炎症模型是否建立成功以及各成分的抗炎能力。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测L929细胞中HDAC3、HDAC8蛋白表达的变化。结果:通过CCK-8法得到TNF-α的最佳浓度为10 ng/mL,常春藤皂苷元选用浓度为500μmol/L和250μmol/L,齐墩果酸选用浓度为50μmol/L和25μmol/L,刺囊酸选用浓度为25μmol/L和12.5μmol/L。TNF-α诱导后L929细胞模型组中的IL-6含量明显升高(P<0.01),不同浓度给药组对IL-6的含量呈现出不同的抑制效果(P<0.05,P<0.01)。3种皂苷元成分会明显降低TNF-α诱导的L929细胞炎症模型的HDAC3、HDAC8蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:在TNF-α诱导的L929细胞炎症模型中,类叶牡丹3种皂苷元呈现出良好的抗炎效果,其作用机制可能与降低HDAC过表达有关。

HPLC法测定金银花中常春藤皂苷元、齐墩果酸、槲皮素、木犀草苷和绿原酸

目的用反相高效液相色谱法,同时测定重庆武陵山区金银花药材5种成分的量。方法采用SHIMADZUC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,检测波长为210和350 nm,进行梯度洗脱。结果上述5种成分分离效果较好。结论本法简单,准确,快速,可同时测定金银花药材中5种成分的量。

RP-HPLC法测定金银花药材中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量

目的:建立高效液相色谱法测定酸水解后金银花药材中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为 HiQ Sil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(85:15),流速1 mL·min^(-1),柱温为室温,进样量10μL,检测波长210 nm。采用硫酸加热回流水解4 h,氯仿索氏回流提取皂苷元。结果:常春藤皂苷元和齐墩果酸的线性范围分别为1.15～28.90μg及1.02～25.50μg,平均回收率分别为98.9%(RSD=1.8%)及98.5%(RSD=2.1%)。结论:所建立的 HPLC 方法重复性好,专属性强,为金银花药材质量控制标准的建立提供科学依据。

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01),呈浓度依赖性。②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P<0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果。③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少。④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响。结论常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力。

异叶败酱中三萜化合物常春藤皂苷元对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用

利用倒置显微镜观察法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、DNAladder电泳以及流式细胞分析技术,检测了从甘肃产异叶败酱(Patrinia heterophyllaBunge.)中分离得到的三萜化合物常春藤皂苷元(HG)对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用.结果表明,常春藤皂苷元在较低浓度(10～40μmol·L-1)条件下,对HL-60细胞增殖具有良好的抑制作用;在较高浓度(40～50μmol·L-1)条件下,对HL-60细胞具有致死作用;同时,常春藤皂苷元对HL-60细胞的G1期阻滞和凋亡诱导作用极可能是其实现增殖抑制和致死作用的主要途径.

红毛五加叶中常春藤皂苷元的高效液相色谱法测定

目的建立红毛五加叶中常春藤皂苷元的测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Welchrom C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85：15：0．04：0．02）；流速：1．0ml·min^-1；柱温：35℃；检测波长为210nm。结果常春藤皂苷元的线性范围为0．68～10．94μg，平均加样回收率为100．42％，RSD小于2％。结论该方法准确、专属性强，可为红毛五加叶的综合开发利用提供参考。

不同产地预知子药材中常春藤皂苷元的含量测定

目的:HPLC法测定不同产地预知子中常春藤皂苷元的含量。方法:采用高效液相色谱分析,Phenome-nex C18色谱柱,乙腈∶水∶磷酸(62∶38∶0.1)为流动相,检测波长210 nm。结果:常春藤皂苷元的保留时间为20.8min,线性范围为6.75～600μg/mL(r=0.9998),加样回收率100.89%。所测样品中常春藤皂苷元的含量在0.10～28.53 mg/g。结论:该法快捷、准确,可为预知子药材的综合开发利用提供参考。

HPLC-ELSD法测定金银花中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量

目的:建立酸水解后测定金银花中常春藤皂苷元及齐墩果酸的 HPLC-ELSD 方法。方法:采用5%的硫酸80℃加热水解6h、氯仿提取皂苷元;采用 Alltima C_(18)(4.6mm×250mm,5.0μm)为色谱柱,柱温25℃,乙腈-水(85:15)为流动相,以蒸发光散射检测器检测,漂移管温度75℃,载气流速1.9L·min^(-1),对金银花中常春藤皂苷元及齐墩果酸进行分离与测定。结果:常春藤皂苷元及齐墩果酸的线性范围分别为2.65～26.54μg,1.73～17.26μg,平均回收率分别为97.1%(RSD=2.53%),96.7%(RSD=3.77%)。结论:方法准确,专属性好,可作为检测金银花中总皂苷的有效方法。

《中国药典》2010年版威灵仙不同品种常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量探讨

目的:探讨《中国药典》2010年版中威灵仙的含量测定指标常春藤皂苷元和齐墩果酸的实用性。方法:优化《中国药典》2010年版威灵仙含量测定项下方法,并测定威灵仙中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。结果:威灵仙Clematis chinensis Os-beck的药材符合《中国药典》2010年版的要求,常春藤皂苷元和齐墩果酸均大于0.30%;东北铁线莲Clematis manshurica Rup.r的药材中齐墩果酸大于0.30%,但常春藤皂苷元含量极微。结论:《中国药典》2010年版威灵仙的含量测定指标不能同时适用于威灵仙Clematis chinensis Osbeck和东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的质量控制,建议将两个品种含量测定指标分开制定。

常春藤皂苷元抑制人乳腺癌MCF-7和肺癌A549裸鼠移植瘤生长研究

目的研究常春藤皂苷元对人乳腺癌MCF-7和肺癌A549裸鼠移植瘤生长的影响。方法采用BALB/c裸鼠在体抗肿瘤实验来考察常春藤皂苷元对乳腺癌和肺癌肿瘤的在体抑制率。结果常春藤皂苷元具有在体抗乳腺癌和肺癌肿瘤的确切活性,各给药组小鼠与阴性对照组相比较,其肿瘤的重量均具有显著性差异(P<0.01),抑瘤率均在60%以上。结论常春藤皂苷元具有显著地抑制人乳腺癌MCF-7和肺癌A549裸鼠移植瘤生长的作用。

HPLC法测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸含量

目的建立HPLC法同时测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元及齐墩果酸的含量。方法色谱柱:HypersilODS C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-冰醋酸-三乙胺(85∶15∶0.04∶0.02);流速:0.5 ml/min;检测波长210 nm。结果 TLC能检出齐墩果酸、常春藤皂苷元相应的斑点;HPLC法测定常春藤皂苷元、齐墩果酸分别在22.76～227.6、40.28～201.4μg/ml范围内线性关系良好,r值分别为0.9998、0.9997,平均回收率分别为94.6%、93.8%,RSD分别为1.8%、1.2%。结论本法可用于瘤果黑种草子中皂苷的质量控制,方法简单,结果准确,灵敏度高。

HPLC测定山银花药材中常春藤皂苷元的含量

目的建立山银花药材中的常春藤皂苷元含量的测定方法。方法以盐酸一乙醇溶液为水解溶剂，山银花样品加热回流4h，再用三氯甲烷萃取；采用HPLC，以Waters Symmetry C18（150min×4．6mm，5μm）色谱柱，甲醇-0．4％冰醋酸水溶液（80：20）为流动相，流速为1．0mL／min，柱温为30℃，检测波长为210nm，测定常春藤皂苷元含量。结果山银花中常春藤皂苷元的线性范围为2-12μg，平均加样回收率99．O％，RSD为1．9％。不同产地山银花的常春藤皂苷元含量差异较大．湖南隆回野生的含量高达2＋8％，而云南、贵州产的未检出。结论所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好．可用于山银花药材中常春藤皂苷元的含量测定。

兴安白头翁常春藤皂苷元的含量测定

[目的]建立兴安白头翁药材中常春藤皂苷元含量的测定方法.[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为BDS HYPERSIL C18色谱柱(4.6mm×250.0mm,5μm),流动相为乙腈∶水(85∶15),流动速度为0.5mL/min,柱温为30℃,检测波长为210nm.[结果]常春藤皂苷元的线性范围为1～100mg/L(r=0.9995),平均加样回收率为107.86%,RSD为0.78%.[结论]反相高效液相色谱法准确,专属性强,可作为兴安白头翁的含量测定方法.

HPLC法测定不同产地续断中常春藤皂苷元的含量

目的建立续断药材中常春藤皂苷元的含量测定方法,并分析不同产地续断中常春藤皂苷元的含量,为全面评价续断药材质量提供参考。方法采用高效液相色谱分析,Hypersil C18色谱柱,乙腈-0.05%磷酸(55∶45)为流动相,检测波长为210 nm。结果常春藤皂苷元的保留时间为19.22 min,线性范围为0.0122~1.6330 mg·mL-1(r=0.9999),加样回收率为100.2%。所测样品中常春藤皂苷元的含量在5.34~45.26 mg·g-1之间。结论本法能快捷、准确测定不同产地续断药材中常春藤皂苷元,结果显示不同产地含量存在明显差异,可为评价不同产地续断质量提供依据。

瑶药三角风中常春藤皂苷元含量测定方法建立

目的建立三角风中常春藤皂苷元含量测定方法,为该药材质量控制提供技术支撑。方法采用HPLC法对测定的色谱条件进行摸索,采用正交设计法筛选供试品溶液的制备条件,色谱条件为:色谱柱为Gemini C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(78∶22),检测波长210 nm。结果样品供试液制备条件为:甲醇超声提取,药材破碎度为过4号筛,样品取样量为2 g,提取溶剂为75%甲醇,提取时间30 min;提取物水解,水饱和正丁醇应萃取3次,加盐酸3 mL,加热回流4 h,三氯甲烷再萃取2次。结论建立的HPLC含量测定方法准确可靠,可作为瑶药三角风中常春藤皂苷元的测定方法。

超声提取山银花中常春藤皂苷元的工艺研究

目的考察酸水解后超声提取山银花中常春藤皂苷元的影响因素,设计超声提取的最佳工艺。方法设计L9(34)正交实验,安排超声温度、超声时间、溶媒倍数3个因素考察提取条件,以HPLC法检测。结果超声温度设为40℃时提取率较好;超声时间为40min时提取率略高于30min;料液比对提取率的影响较大,以1:40时最高。结论常春藤皂苷元的最佳提取工艺为辐射温度40℃、提取时间30min、料液比1:40;用本实验方法提取常春藤皂苷元,效率高,时间短,适宜山银花中常春藤皂苷元的提取。