白花蛇舌草提取物通过AMPK/ATG5信号通路对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用机制研究

目的:通过5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/自噬相关蛋白5(ATG5)信号通路,探讨白花蛇舌草提取物减轻急性胰腺炎(AP)大鼠肺损伤的机制。方法:建立AP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、提取物(白花蛇舌草提取物)组、3-MA(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤)组、AICAR(AMPK激活剂)组、提取物+AICAR组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;ELISA检测血清淀粉酶(AMY)、IL-1β、IL-6、IL-18水平;检测大鼠腹水量及肺湿/干重比(W/D);HE观察胰腺及肺组织病理损伤;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬底物p62、IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、胰蛋白酶原活化肽(TAP)、AMPK、p-AMPK、ATG5、自噬标志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、泛素特异性蛋白酶10(UPS10)表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腹水量、肺W/D、胰腺和肺组织病理损伤评分、血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平、胰腺组织p62、TAP、pro-IL-1β表达、肺组织pAMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表达均升高(P<0.05),胰腺和肺组织LAMP2蛋白表达降低(P<0.05);模型大鼠经白花蛇舌草提取物或自噬抑制剂3-MA干预后,上述指标均得到显著改善(P<0.05),且白花蛇舌草提取物的改善效果优于3-MA(P<0.05);而AMPK激活剂AICAR可削弱白花蛇舌草提取物对AP大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可通过抑制AMPK/ATG5信号通路减轻炎症反应、降低自噬水平改善AP大鼠肺损伤。

白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液的抗炎作用研究

目的:比较白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液体内外抗炎作用的差异,为进一步的临床研究提供理论依据。方法:用水或75%乙醇对白花蛇舌草鲜品进行回流提取,并对提取液进行浓缩和冷冻干燥,得到提取物粉末;将提取物粉末配置相应的生药溶液,观察其对炎症模型的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)和小鼠的抗炎作用,并比较水提液和醇提液在其中的作用差异。结果:白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均可抑制脂多糖致炎的RAW264.7的活力,并且总体上水提液对致炎的RAW264.7中白介素-6、白介素-1β、肿瘤坏死因子-α等炎症因子的抑制率优于醇提液;此外,白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均能减轻炎症模型小鼠耳肿胀和减少扭体次数,且水提液的整体效果优于醇提液。结论:白花蛇舌草水提液和醇提液的抗炎作用有差异,水提液综合抗炎效果优于醇提液,这可能与其成分差异有关。

白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系,并分析其可能机制。方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine, EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响;采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性,采用pH计检测细胞外液pH值,采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗,分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响;采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达,采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达。用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株,并进行HDE相应干预后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8实验显示,HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示,HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成,降低乳酸脱氢酶活性,升高细胞外培养液pH值,增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,HDE抑制了GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting实验显示,与对照组相比,HDE组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少;而与HDE组相比,HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中,HIF-1α mRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05)。结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关。

白花蛇舌草多糖的提取工艺、生物学功能及在畜禽生产上应用的研究进展

白花蛇舌草是一种药食同源性植物,对畜禽绿色健康养殖、畜产品安全等都有积极作用。迄今为止从白花蛇舌草中鉴定出180多种化合物,包括环烯醚类、黄酮类、蒽醌类、酚类、挥发油和多糖等。多糖类化合物是白花蛇舌草主要的生物活性成分之一,具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等多种药理活性。为此,本文对白花蛇舌草多糖的提取工艺、生物学活性的作用机制及其在畜禽生产上的应用进行阐述,并对白花蛇舌草多糖目前存在的问题和在畜禽生产上的前景进行展望,为白花蛇舌草多糖在新型饲料添加剂方面的开发利用提供参考。

白花蛇舌草不同提取工艺对抗肿瘤活性的影响

目的 为研制低毒高效的抗癌制剂 ,确定不同的白花蛇舌草提取物 (汤剂、亲脂提取物、粗多糖 )的抗肿瘤作用。方法 采用水提取法、醇提取法、脱脂水提醇沉法分别制备了白花蛇舌草汤剂、亲脂提取物和粗多糖。用 S-180细胞植入小鼠作为模型 ,进行了抑制肿瘤的试验。结果 白花蛇舌草的水提液 (汤剂 )对 S- 180肿瘤细胞没有明显的抑制作用 ;白花蛇舌草水溶性的多糖和亲脂提取物对 S- 180肿瘤细胞具有显著的抑制作用 ;在抑瘤的同时 ,多糖部分具有对化学损伤的保护作用 ;水溶性的多糖和亲脂提取物合并给药并未显示协同抗肿瘤活性。结论 白花蛇舌草的脂溶性部位和多糖具有良好的抗肿瘤应用前景 。

白花蛇舌草水溶性提取物的抗肿瘤作用和对化疗损伤的保护作用的研究(英文)

白花蛇舌草Hedyotisdiffusa是一种传统的抗肿瘤中药 ,可广泛应用于治疗各种肿瘤 ,从白花蛇舌草中提取出水溶性提取物 (H1 和H2 ) ,采用接种S 180的荷瘤小鼠灌服其 10天 ,观察H1 和H2 的抗肿瘤活性。H1 (12 5 ,6 2 5mg·kg- 1 )和H2(6 2 5 ,31 2 5mg·kg- 1 )能显著抑制小鼠移植性S 180实体瘤的生长 ,而且H1 和H2 与环磷酰胺合用 ,可以明显改善环磷酰胺所致的免疫器官萎缩和造血系统的损伤。

复方白花蛇舌草和半枝莲总黄酮提取工艺的研究

本研究采用正交试验设计法优选复方白花蛇舌草和半枝莲(质量比为1∶1)总黄酮的提取工艺,得到的最佳提取工艺为:用药材30倍量的70%乙醇加热回流提取3次,每次2 h。实验表明本研究所优选的提取工艺方法简便,工艺可行性强。

白花蛇舌草对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响

目的从基因水平研究白花蛇舌草对体外培养的人肝癌Bel7402细胞诱导凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用人肝癌Bel7402细胞常规体外培养,随机设定空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组、白花蛇舌草组。倒置显微镜直接观察细胞形态变化。HE染色法光镜下观察细胞形态改变,计算凋亡指数。采用MTT法检测白花蛇舌草对癌细胞的生长抑制作用。RT-PCR半定量法检测Bcl-xl、p53基因mRNA表达的变化。结果光镜下观察到白花蛇舌草组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;凋亡指数略低于5-Fu阳性对照组,但与空白对照组比较有显著差异(P<0.01);细胞抑制率略低于5-Fu阳性对照组,与空白对照组相比有显著差异(P<0.01);上调p53基因mRNA表达,降低Bcl-xl基因mRNA表达,与空白对照组比较均有显著差异。结论白花蛇舌草抑制人肝癌Bel7402细胞增长,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因Bcl-xl基因表达有关。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

几种传统中药中多糖的提取及抗肿瘤活性研究

采用超声提取黄药子、黄药子+当归(质量比3∶2)、白花蛇舌草+半枝莲(质量比3∶2)三味传统中药的单复方药中的多糖成分,并应用比色法原理对提取的多糖含量进行测定,其中黄药子+当归(质量比3∶2)的粗多糖含量最大,为16.509%。经测定3种多糖都有一定的抗肿瘤活性,其活性次序为黄药子+当归(3∶2)>白花蛇舌草+半枝莲(3∶2)>黄药子。

白花蛇舌草中黄酮提取工艺的优化及其结构鉴定

[目的]采用微波辅助提取白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)中的黄酮类化合物,并优化其提取工艺,对提取物的化学结构进行鉴定,为白花蛇舌草药用价值的进一步开发提供参考。[方法]用正交试验优化白花蛇舌草黄酮类化合物的最佳提取工艺条件,通过紫外光谱、红外光谱等对提取物的化学结构进行表征。[结果]影响黄酮提取率的因素主次顺序为:提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比;最佳提取工艺为:乙醇浓度为80%,提取时间为40min,料液比为1∶40,提取温度为80℃,在此条件下白花蛇舌草中黄酮的提取率达2.86%。白花蛇舌草的黄酮类化合物主要成分为黄酮醇类。[结论]该研究为白花蛇舌草药用价值的进一步开发提供了参考。

白花蛇舌草-半枝莲药对提取物抑菌活性部位研究

目的通过测定白花蛇舌草-半枝莲药对醋酸乙酯/95%乙醇(1∶1)提取上清液F0、析出浸膏F1、析出浸膏经AB-8大孔树脂富集后组分F2及F2经聚酰胺分离得到的各组分的抑菌活性,寻找药对提取物抑菌活性的活性部位或活性成分。方法采用一剂量法和二倍稀释法测定各提取对5种微生物(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、毛霉、酵母菌)的抑菌活性。结果与结论 F0抑制金黄色葡萄球菌活性最强;F1没有抑菌活性;F1经过大孔树脂富集后组分F2抑菌活性得到显著增强,其抑制枯草芽孢杆菌活性强于F0,抑菌效价值达8.37μg.ml-1;F2经聚酰胺分离得到的F2-10组分是抑制枯草芽孢杆菌的活性部位;各提取物对霉菌和酵母菌均无抑制活性。

白花蛇舌草多糖提取的工艺优化及抗氧化活性研究

目的：优选白花蛇舌草的水提醇沉多糖提取工艺条件。方法：以白花蛇舌草多糖含量为指标,蒽酮比色法测定指标成分含量,在单因素试验基础上,采用L9（34）正交试验考察料液比、超声提取时间、重复提取次数和乙醇浓度对白花蛇舌草多糖含量的影响,优化其提取工艺。并用DPPH自由基清除率法对其抗氧化活性进行测定。结果：白花蛇舌草多糖最佳提取的工艺条件为料液比1：14,提取时间30~40 min,重复提取次数3次,提取乙醇浓度60%。自由基清除实验显示,白花蛇舌草多糖具有浓度相关的自由基清除能力和抗氧化能力。结论：优选的水提醇沉提取工艺稳定可行,所提取白花蛇舌草多糖具有较强的自由基清除效果,是一种极具开发潜力的优良天然抗氧化剂。

白花蛇舌草中熊果酸的提取工艺研究

本研究通过单因素实验,以提取的选择性和提取率为指标,考察了白花蛇舌草中熊果酸的提取过程的几个影响因素;并通过正交实验,对过程参数进行了优化。结果表明,各因素对熊果酸提取效果的影响程度从高到低分别是:提取时间>提取次数>乙醇体积分数>液固比;确定的最适提取条件为:95%乙醇溶液在回流温度下提取两次,每次1.5h,液固比为8:1。

白花蛇舌草提取物通过Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化

目的:探讨白花蛇舌草提取物对胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化(EMT)的影响,分析其与Hippo-Yap相关蛋白(YAP)信号通路活化的关系。方法:体外培养胰腺癌SW1990细胞,试验分为7组:对照组(不添加任何药物处理),低剂量组(白花蛇舌草提取物20 mg/ml),中剂量组(白花蛇舌草提取物50 mg/ml),高剂量组(白花蛇舌草提取物100 mg/ml),抑制剂组(XMU-MP-1抑制剂),高剂量+抑制剂组,阳性对照组(冬凌草甲素15μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测SW1990细胞凋亡情况;Western blot检测YAP及其磷酸化蛋白(p-YAP)、E钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、转录因子(Snail)表达情况。结果:与对照组相比,白花蛇舌草提取物不同剂量组SW1990细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组均显著高于中剂量组、低剂量组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组SW1990细胞凋亡率、p-YAP及E-cadherin蛋白表达量均显著降低(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著高于高剂量+抑制剂组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组YAP、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达量显著升高(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著降低(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著低于高剂量+抑制剂组(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可能通过活化Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞EMT的发生。

白花蛇舌草提取物通过下调Hippo-YAP信号通路促进结肠癌细胞凋亡

目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细胞分为对照组和实验组,各组细胞做成细胞爬片,细胞免疫荧光检测YAP1蛋白水平。各组细胞消化离心做成细胞蜡块,免疫组织化学方法检测YES相关蛋白(YAP1)、p53基因(p53)、尾型同源盒转录因子2(CDX-2)、白介素6(IL-6)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白水平。结果白花蛇舌草提取物可不同程度抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖。细胞免疫荧光结果显示,对照组YAP1蛋白表达较实验组强。免疫组化结果显示YAP1的表达与TNF-α的表达有一定相关性。结论白花蛇舌草提取物通过抑制Hippo-YAP信号通路的活性,抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,诱导其凋亡。白花蛇舌草提取物可能是一种潜在的肠癌治疗药物。

提取工艺对白花蛇舌草提取液稳定性和抗氧化活性的影响

采用回流、超声、超高压三种方法提取药材白花蛇舌草中的黄酮和对香豆酸。结果表明,黄酮提取率分别为1.305%(回流),1.301%(超高压),1.258%(超声),对香豆酸提取率分别为0.123%(超声),0.111%(回流),0.098%(超高压)。三种提取工艺对黄酮和对香豆酸的提取率差别不大,测试结果的差异为试验误差。测定三种提取方法下的提取液pH值变化表明,超高压的提取液稳定,而回流和超声的提取液不稳定。三种提取方法所得提取液的DPPH自由基和羟自由基清除活性表明,提取液抗氧化活性能力由高到低依次为超高压,超声,回流。

白花蛇舌草多糖的微波预处理提取及抗氧化稳定性研究

以白花蛇舌草为原料,采用微波预处理-热水浸提法,在不同的料液比、提取温度、提取时间和醇沉浓度下,探讨白花蛇舌草多糖的提取工艺。通过清除DPPH自由基法,测定多糖的抗氧化活性,并研究不同条件下多糖的抗氧化稳定性。研究结果表明,多糖提取的最佳工艺条件为料液比1∶40,提取时间2.5h,提取温度60℃,醇沉时乙醇浓度为60%。白花蛇舌草多糖具有较好的抗氧化能力,温度、p H及Na+、K+、Ca2+、Zn2+、Cu2+几种金属离子对多糖清除DPPH自由基影响较大;Al3+和光照影响则较小。

串联固相萃取法选择性富集白花蛇舌草中的环烯醚萜苷类成分

研究了从白花蛇舌草水提取物中选择性富集环烯醚萜苷类成分的方法。该方法采用硅胶基质的寡聚乙二醇(OEG,实验室自合成)和ODS两种填料依次作为固定相,对白花蛇舌草水提醇沉样品进行固相萃取,并以超高效液相色谱(UPLC)系统对在富集的各个阶段得到的产物进行了色谱表征。实验结果表明,采用该方法得到的终产物的产率为8.21%。从UPLC谱图中可以看出固相萃取环烯醚萜苷类成分选择性富集的过程。终产物中14种典型的环烯醚萜苷类化合物含量明显升高,可达白花蛇舌草水提物的6.1倍,回收率为50.1%,富集效果明显。因此,将白花蛇舌草水提物醇沉后依次经过OEG柱与ODS柱的串联固相萃取可选择性地富集环烯醚萜苷类成分。该方法操作步骤较少,操作简便,选择性好,提取效率较高,富集效果明显。

白花蛇舌草乙醇提取物抗炎作用研究

目的观察白花蛇舌草乙醇提取物(EEHD)的抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型[选昆明种小鼠50只,随机分成五组,每组10只,分别按125、250、500 mg/(kg·d)剂量给试验组灌胃白花蛇舌草乙醇提取物,连续8 d;对照组灌胃阿司匹林100 mg/(kg·d),连续8 d;空白组灌胃生理盐水0.5 ml/(kg·d),连续8 d]和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)致小鼠腹腔白细胞增多模型[选小鼠50只,随机分成五组,每组10只,分别按125、250、500 mg/(kg·d)剂量给试验组灌胃白花蛇舌草乙醇提取物,连续8 d;对照组灌胃阿司匹林100 mg/(kg·d),连续8 d;空白组灌胃生理盐水0.5 ml/(kg·d),连续8 d]研究白花蛇舌草抗炎作用。结果连续灌胃给药8 d,与空白组比较,对照组及250、500 mg/(kg·d)试验组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有抑制作用(P<0.05)。与空白组比较,对照组及500 mg/(kg·d)试验组能显著抑制CMC-Na引起的小鼠腹腔白细胞游走(P<0.05)。结论白花蛇舌草具有显著的抗炎作用。