减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用

为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。

离子交换树脂法规模化生产乳源酪蛋白糖巨肽及其对流感病毒的血凝抑制活性

目的:优化规模化生产乳源酪蛋白糖巨肽(CGMP)的工艺条件,并探讨其对流感病毒的血凝抑制能力。方法:以阴离子交换树脂为分离介质,唾液酸含量为产品的活性检测指标,分别从上样体积、上样流量、洗脱液浓度、洗脱液体积和树脂使用周期5个工艺条件,在前期小试和中试的基础上,考察从乳清粉中规模化生产CGMP;同时利用血球凝集抑制试验验证产品CGMP对流感病毒的抑制活性。结果:优化的CGMP产品技术路线为上样体积3BV、上样流量0.8 L/min、洗脱体积1BV、洗脱液浓度0.6 mol/L、树脂适宜使用周期4次。该工艺条件下处理乳清粉溶液体积为108 L(2160 g)、树脂36 L,得到CGMP产品21.183 g,得率为0.981 g/100 g,产品纯度为89.032%,回收率为51.972%,唾液酸含量为21.503 g/100 g,蛋白CGMP产品对流感病毒A(H1N1)和流感病毒B的最低抑制质量浓度分别为1.0000,1.2500 mg/mL。结论:利用优化的技术路线生产获得CGMP产品的纯度和唾液酸含量均优于市售商品CGMP,且对流感病毒有明显的抑制作用。

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1∶512;阳性血清HI效价达1∶1024;阴性血清HI效价小于1∶8,且特异性均良好。用制备的HI试验抗原与不同PPV疫苗株的阳性血清进行HI试验,同时,用制备的阳性血清、阴性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原进行HI试验。结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,制备的阴性血清与不同疫苗株抗原均呈阴性反应,可用于PPV制品的统一评价。

水禽禽流感H5N1亚型改良HI抗体检测方法的研究

鉴于在采用1%鸡红细胞悬液作为指示细胞检测水禽血清的HI抗体效价水平过程中常出现非病毒性凝集情况,亟需要建立一种快速简便经济的适合水禽血清抗体效价检测的方法。本研究通过对未经处理与采用不同红细胞吸附处理被检水禽血清以1%鸡、鸭或鹅红细胞悬液进行测定其HI抗体效价的结果对比,结果表明建立采用1%与待检水禽血清同源1%红细胞悬液做指示细胞的改良HI试验比采用鸡红细胞悬液测定结果高1～1.5log2,且可以有效避免非病毒性凝集情况的出现。

鸡传染性支气管炎HA抗原的制备及HI试验方法的建立

用１０％Ａ型魏氏梭菌滤液处理１００倍浓缩ＩＢＶＭ４１株病毒液，成功地制备了ＩＢＶＨＡ抗原，效价为１∶６４～１∶１０２４。用该抗原建立了ＩＢＶＨＩ试验方法。抗原在４℃保存，５个月效价不变；加入０．１％的甲醛及１／万的硫柳汞使抗原效价下降１～２个滴度。对ＳＰＦ鸡血清、Ｍ４１阳性血清、其它鸡病标准阳性血清以及疫苗免疫试验鸡只血清的ＩＢＶＨＩ抗体监测结果证明，该方法操作简便、快速、敏感性高、特异性强。

几种常用ND HI试验方法的比较与分析

对几种常用 ND HI试验方法作比较 ,结果表明 ,在全量法和微量法中以生理盐水为稀释液 ,以 1 %红细胞悬液作反应指示剂和 1 0 0 %凝集抑制为判定终点的方法效果为佳。全量法测得的 HI滴度较微量法的约高 0 .5～ 1个滴度 ,其灵敏度和准确性较高 ,从而更适于实际工作中 ND抗体水平的免疫监测。

RPHI和HI对EHF患者进行血清学分型的比较研究

作者应用RPHI和HI两种方法,对EHF患者进行血清学分型的比较。通过对57例不同病日的EHF患者血清与野鼠型及家鼠型病毒血凝素抗原(分别称为A-Ag及R-Ag)同时进行HI、RPHI。在EHF疾病过程中,两种抗体的效价呈平行性升降,存在明显的正相关(用A-Ag时,r=0.94;用R-Ag时r=0.98),对3,5,7,10,17病日的患者进行可分型率的统计发现,HI,RPHI的可分型符合率为58,75,96,36,100,100％;另对189份荧光阳性的患者血清检测的结果,HI,RPHI两法判别家、野鼠型的总符合率为90.5％。上述结果表明:与HI相比,RPHI用于EHF患者的血清学分型,不仅操作简便,勿需复杂费时的血清处理,并具有更高的特异性和灵敏度,可普遍应用于患者的早期诊断和血清流行病学的分型研究。

SPF鸡新城疫非特异性HI抗体的血涂片鉴别研究

试验以某SPF鸡场的30份HI抗体效价疑似阳性血清为研究对象,建立了快速准确的血涂片鉴别诊断法。以间接免疫荧光法进行验证,结果提示血涂片法与间接免疫荧光法的结果完全一致,证明了血涂片法可以用于新城疫非特异性HI抗体的鉴别诊断,具有简单、方便的优点。

鸡新城疫抗体消长规律及血清抗体稳定性

为研究鸡新城疫灭活疫苗免疫后抗体消长规律及血清抗体稳定性,采用血凝抑制试验方法测定新城疫病毒-禽流感病毒(H9亚型)二联灭活疫苗免疫鸡血清新城疫抗体效价及经室温、4℃、-20℃、-80℃反复冻融和加热等不同方式处理的血清中新城疫抗体效价。结果表明,试验鸡于1日龄和21日龄用灭活疫苗免疫两次后,在第二次免疫后14 d新城疫抗体平均效价达到8.1 log_(2),35 d达到最高值为8.9 log_(2);免疫后70 d抗体效价保持在7.8 log_(2),且自二免后14~70 d,新城疫抗体效价维持在7.8 log_(2)~8.9 log_(2)。血清新城疫抗体在室温和4℃相对稳定,室温下放置13 d对新城疫抗体效价几乎无影响;但4℃保存9 d,对新城疫抗体效价有一定影响,且差异显著(P<0.05);56℃下30 min对新城疫抗体效价无影响;反复冻融3次对新城疫抗体效价影响极显著(P<0.01)。肉鸡于1日龄和21日龄用灭活疫苗免疫两次后,新城疫抗体水平高,且高水平抗体维持时间长。鸡血清新城疫抗体可耐56℃加热,室温保存活性稳定,反复冻融则影响其效价。

禽流感H9非免疫鸡场与免疫鸡场鸡群HI抗体的比较研究

为了解禽流感H9在非免疫鸡群的感染情况和免疫鸡场的免疫效果,本试验在四川分别选择一个非免疫鸡场和免疫鸡场,用微量HI试验对187份不同日龄的非免疫鸡血清(56、85、92、149、256、410日龄)和222份不同日龄的免疫鸡血清(53、87、145、264、398日龄)进行了抗体检测,结果显示:非免疫鸡群禽流感H9阳性率分别为34.38%、37.14%、29.41%、38.71%、46.67%、52.00%,免疫鸡群阳性率分别为76.27%、84.31%、88.37%、91.89%、81.25%。试验表明非免疫鸡群的禽流感H9感染较严重,免疫鸡群免疫后的效果较好。

新版国家标准《新城疫诊断技术》血凝和血凝抑制试验的理解与操作实践

血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)主要是用于新城疫病原鉴定和抗体效价测定,新版《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2020)对HA和HI试验判定结果进行了修改和细化,使其更加标准和规范。为尽快理解新版标准要求,熟练掌握操作要领,对新、旧版标准中HA和HI试验进行了比较,新版标准增加了对HA和HI试验4HAU抗原配制的标定、静置时间以及结果判定的改变。新版标准在操作步骤上更为精准详细,4HAU抗原配置更加准确,从而使得HI试验结果更加科学。本文结合实际检测,为广大实验室检验人员、大专院校学生及科研人员更好地理解新版标准,更熟练地操作,从而为提高试验结果准确性提供了参考。

检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用

将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒，而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清，其中血凝抑制抗体阳性为161份，阴性为42份，阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份，阴性为53份，阳性率为73.89％，两种方法阳性符合率为93.16％，经统计学检验P＞0.05，两者差异不显著。结果表明，乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛，具有简便、准确的优点，在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。

天津地区猪流感血清学调查

2002年-2005年期间,采用血凝抑制试验对天津市10个区县44个养猪场进行了猪流感病毒抗体检测,结果75%的被调查猪场抗体检测结果有阳性,检测的648份血清样品中,69.6%为阳性。流感病毒抗体亚型调查结果显示该地区流行的猪流感病毒主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为55.4%和39.4%。部分猪群中存在抗H9亚型流感病毒抗体,阳性率为5.4%,但未发现H5亚型流感病毒抗体。此外,部分猪群中同时存在2种或3种亚型(H1,H3和H9)流感病毒的抗体,表明这些猪曾经同时被2种或3种不同亚型的流感病毒感染。

二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定

本试验对从广西分离的 4株疑似副鸡嗜血杆菌 (H .pg) (GX_95 ,GX_97,GX_98_1,GX_98_2 )进行生物学特性研究。根据生物学特性 ,GX_97和GX_98_1被定为H .pg,GX_95和GX_98_2的生化反应特性有明显差异 ,用标准H .pg血清未能定型。交叉血凝抑制 (HI)试验显示 ,各菌株之间的交叉HI效价达 16 0 ,但各菌株与其本身的抗血清HI效价达 12 80 ,显示出很强的菌株特异性。抗菌素敏感试验也显示GX_97。

藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响

探讨藏药绿萝花对机体免疫功能的影响,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.本研究以L9(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以N2Hmice小白鼠为研究对象,以Con A诱导小鼠淋巴细胞转化试验(CCK-8法)、血凝和血凝抑制试验及巨噬细胞吞噬试验为研究方法,以(SI)刺激指数、(HI)新城疫抗体效价、吞噬百分率和吞噬指数为检测指标,探讨不同剂量绿萝对机体免疫功能的影响.实验结果显示低剂量绿萝花能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,其增强作用极显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠血清ND抗体产生的作用,作用显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠外周血淋巴细胞增殖的作用,作用显著优于空白组.研究结果表明低(1.08g/次/d,7d)、中(2.16g/次/d,7d)剂量绿萝花对小鼠免疫功能具有增强作用.

3种犬细小病毒感染诊断方法比较

本研究应用犬细小病毒抗原快速检测试剂盒、血凝/血凝抑制试验和PCR方法对120份具有腹泻/呕吐症状的患犬粪便样本进行了犬细小病毒检测。结果显示,3种方法检测阳性份数分别为60,49,68。犬细小病毒抗原快速检测试剂盒与血凝/血凝抑制(HA/HI)试验相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为100.0%,84.5%,90.8%;与PCR法相比较,敏感性、特异性及总符合率分别为85.3%,96.2%,90.0%。从试验结果看,HA/HI法具有较高的特异性,但敏感性较低;PCR具有高度敏感性和特异性,但不适合临床推广;细小病毒抗原快速检测试剂盒,在正确操作下结果可靠,是临床诊断犬细小病毒感染的首选方法。

血凝性脑脊髓炎病毒血凝抑制试验方法的研究

为检测某猪场的猪感染血凝性脑脊髓炎病毒的情况,用250 mL/L 的鸡红细胞和200 g/L的高岭土去除非特异性物质,使用4单位抗原及5 mL/L鸡红细胞做HI 试验,发现这些条件较适宜。用此法对其他5 种猪传染病抗血清进行检查,发现均不产生非特异性血清学反应。另外,本试验用滤纸吸附血清与分离血清做HI比较试验,其HI价差异不显著,从而为以后进行血清学调查提供了一种便利的方法。用分离的HEV与日本HEV 67N毒株抗原进行比较,两者的HI价一致。

流行性出血热灭活疫苗人群免疫及流行病学效果观察

为了观察EHF灭活疫苗的免疫力和流行病学效果,选择一个发病率在380～860/10万的集体单位职工作为疫苗接种组,并以该单位所在地的同一景观生活的农民作为对照组(发病率在170～120/10万之间)。1989年10月首次免疫接种后,抗EHF病毒NT抗体阳转率为148/150,HI抗体为149/150;2种抗体的几何平均滴度分别为80.67和38.68。1年后抗体阴转为20～25%。1990年9月加强免疫接种后,NT抗体阳转率为100%,几何平均滴度为81.85,1年后阴转率为5～8%。经3年的流行病学效果观察,观察点再未发生EHF病例,认为该疫苗足以控制本病流行。