Haploidentical hematopoietic stem-cell transplantation for acute myeloid leukemia in first relapse after complete remission by standard induction chemotherapy

Objective To investigate the therapeutic effects of haploidentical hematopoietic stem - cell transplantation ( Haplo - PBSCT) for acute myeloid leukemia in first relapse after complete remission by standard induction chemotherapy. Methods Eighty - nine cases of AML in first relapse after complete remission by standard DA

当归多糖促进骨髓移植重建受体小鼠造血功能

目的探讨当归多糖(ASP)调控骨髓基质细胞(BMSCs)促进供体骨髓移植(BMT)重建受体小鼠造血功能的机制。方法分离纯化8~10周龄雄性C57BL/6J小鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs),移植给同龄同种雌性受体小鼠,第9天取受体鼠BMMNCs,再次移植给雌性受体小鼠。移植受体鼠分为对照组:假照射;辐射组:8.0 Gy X射线全身一次性照射;骨髓移植组:照射同辐射组,经尾静脉移植雄性供体BMMNCs(5×10^(6)个细胞);骨髓移植ASP组:同骨髓移植组,从移植的第1天起连续腹腔注射ASP[100 mg/(kg·d)×9]。模型构建期间记录小鼠体重与生存变化,模型构建结束后采集受体小鼠BMMNCs检测Y染色体性别决定区(SRY)基因,测定外周血血常规指标,计算股骨BMMNCs数,观察骨髓组织病理学;分离培养受体鼠BMSCs,观察细胞贴壁生长,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测BMSCs增殖;分析细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;检测BMSCs培养上清液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平,检测BMMNCs与各组BMSCs共培养48 h,形成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数量;Real-time PCR分析受体BMMNCs的Notch信号通路相关基因(Notch1、Jagged1、Hes1)表达。结果单纯辐射组小鼠全部死亡,骨髓移植ASP组受体鼠体重下降不明显;在受体雌鼠BMMNCs中检测到SRY基因;骨髓移植ASP组受体鼠外周血血常规和BMMNCs总数下降幅度不显著,骨髓组织病理学损伤减轻;ASP能促进BMSCs增殖,降低BMSCs中ROS、MDA含量,提高SOD活性;促进BMSCs分泌SCF、GM-CSF及IGF-1,提高BMMNCs与受体BMSCs共培养后的CFU-Mix产率;提高受体小鼠BMMNCs中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达。结论ASP促进受体小鼠造血功能重建机制与减轻造血微环境氧化应激损伤,提高BMSCs分泌造血生长因子,调控Notch信号通路有关。

当归多糖调节骨髓造血微环境治疗再生障碍性贫血的机制

背景:如何改善造血微环境是目前再生障碍性贫血治疗的热点问题。目的:结合GEO测序分析、网络药理学与实验验证当归多糖改善骨髓造血微环境治疗再生障碍性贫血的作用机制。方法:借助GEO数据库获得了再生障碍性贫血相关差异表达基因并进行GO和GSEA分析。结合文献与PubChem、SwissTargetPrediction、PharmMapper数据库获取当归多糖活性成分和靶点。取交集靶点后利用STRING和Cytoscape构建蛋白相互作用网络,并进行GO和KEGG富集分析。构建再生障碍性贫血小鼠模型,利用血细胞分析仪、流式细胞术、ELISA、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot方法验证当归多糖对再生障碍性贫血的疗效与作用机制。结果与结论:(1)共筛选出834个差异表达基因,参与细胞发育、造血、髓系细胞分化等生物学过程;(2)检索得到当归多糖相关347个靶点并筛选出77个潜在治疗基因,其中VEGFA、EGLN1、BCL2、干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素6等血管生成、凋亡及免疫相关因子度值显著;(3)KEGG通路富集分析治疗靶点主要富集在Th17细胞分化、NK相关细胞毒性、细胞黏附因子等干扰素γ、白细胞介素2、白细胞介素4相关信号通路;(4)动物实验表明,当归多糖能够显著改善再生障碍性贫血小鼠骨髓造血,增加外周血细胞及骨髓单个核细胞计数,提高小鼠存活率;与模型组相比,当归多糖组小鼠Th1/Th2细胞比例显著下降(P<0.01),干扰素γ水平显著降低(P<0.01),白细胞介素4水平升高(P<0.05),VEGFA表达显著升高(P<0.01),EGLN1表达显著降低(P<0.01),骨髓单个核细胞凋亡率、活性氧水平显著降低(P<0.01),Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01);(5)结果表明:当归多糖能够通过调节异常T细胞亚群,促进血管生成以改善造血微环境,并抑制骨髓单个核细胞凋亡,以改善再生障碍性贫血小鼠的造血功能。

中医药干预慢性再生障碍性贫血骨髓造血微环境“土壤学说”的研究进展

为深入研究中医药治疗慢性再生障碍性贫血干预骨髓造血微环境损伤的“土壤学说”的疗效机理,本文对近年来发表的治疗慢性再生障碍性贫血有关骨髓微血管密度、骨髓基质细胞相关因子、黏附分子和信号转导通路等方面的报道进行综述,为今后深入拓展中医药治疗慢性再生障碍性贫血对造血微环境的影响和疗效机理的研究提供新的思路。

NK细胞疗法在多发性骨髓瘤治疗中的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中单克隆浆细胞的恶性增殖为特征的血液系统肿瘤。NK细胞是一类具有强大自然杀伤活性的先天性淋巴细胞,能够识别并消灭肿瘤细胞和病毒感染细胞,其作为潜在的抗癌疗法引起关注。在MM患者中,NK细胞的数量和功能均受到抑制,导致对骨髓瘤细胞的免疫监视和清除能力降低。恢复或增强NK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤作用是MM免疫治疗的一个重要策略,目前针对NK细胞相关治疗在临床试验中取得了一定进展。本文对NK细胞在MM免疫治疗中应用前景的最新研究进展作一综述。

基于间充质干细胞的小鼠急性移植物抗宿主病骨髓微环境损伤体外细胞模型的建立与评价策略研究

目的:建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)骨髓微环境损伤的体外细胞模型并进行评价。方法:以6-8周龄雌性C57BL/6N小鼠作为骨髓和淋巴细胞的供体,6-8周龄雌性BALB/c小鼠作为aGVHD模型的受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy,72.76 cGy/min)γ射线全身照射后6-8 h内,尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10^(7)/只),建立骨髓移植(BMT)组小鼠模型(n=20);尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10^(7)/只)及脾脏淋巴细胞(2×10^(6)/只),建立小鼠aGVHD模型(n=20)。造模后d 7麻醉小鼠,摘取眼球取血,静置离心后吸取血清。分离小鼠间充质干细胞(MSC),分别用添加了2%、5%和10%的BMT组血清和相同浓度的aGVHD组血清的培养基进行培养。通过成纤维细胞集落形成实验(CFU-F)评价两组血清对MSC集落形成能力的影响;通过CD29和CD105免疫荧光染色评价两组MSC表面分子表达的差异;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog的表达情况。结果:成功建立起可以模拟小鼠aGVHD骨髓微环境损伤的体外细胞模型。CFU-F实验表明,在培养后d 7,与BMT组相比,aGVHD血清浓度为2%和5%时,MSC集落形成能力显著降低(P<0.05);在培养后d 14,与BMT组相比,不同aGVHD血清浓度组MSC集落形成能力均显著降低(P<0.05)。免疫荧光染色实验表明,MSC表面分子CD29^(+)和CD105^(+)细胞百分比在不同aGVHD血清浓度组较BMT组均降低,在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.001,P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示,aGVHD血清浓度组MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nanog表达下降,在aGVHD血清浓度为10%时差异最为显著(P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论:不同浓度的小鼠aGVHD血清和小鼠MSC共同培养,发现添加不同浓度的小鼠aGVHD血清MSC的自我更新能力受损程度不同,为开展aGVHD骨髓微环境损伤领域研究提供了新的工具。

Novel agents targeting leukemia cells and immune microenvironment for prevention and treatment of relapse of acute myeloid leukemia after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Relapse remains the worst life-threatening complications after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation(allo-HSCT)in patients with acute myeloid leukemia(AML),whose prognosis has been historically dismal.Given the rapid development of genomics and immunotherapies,the interference strategies for AML recurrence have been changing these years.More and more novel targeting agents that have received the U.S.Food and Drug Administration(FDA)approval for de novo AML treatment have been administrated in the salvage or maintenance therapy of post-HSCT relapse.Targeted strategies that regulate the immune microenvironment of and optimize the graft versus leukemia(GVL)effect of immune cells are gradually improved.Such agents not only have been proven to achieve clinical benefits from a single drug,but if combined with classic therapies,can significantly improve the poor prognosis of AML patients who relapse after allo-HSCT.This review will focus on currently available and promising upcoming agents and also discuss the challenges and limitations of targeted therapies in the allogeneic hematopoietic stem cell transplantation community.

鸡骨髓源造血干细胞的体外培养及分化诱导

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3配体、10μg/mL白细胞介素-3、50 ng/mL白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34^(+)HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34^(+)HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34^(+)HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34^(+)HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。

化疗引起骨髓抑制的机制及中医药防治的研究进展

骨髓抑制是化疗后常见并发症,患者会出现免疫抑制、贫血、出血等临床表现,严重时患者不能完成足量、全程的化疗。引起骨髓抑制的机制主要包括2个方面:一方面,化疗通过诱导造血干细胞衰老和造血祖细胞凋亡,影响骨髓的造血功能;另一方面,化疗还能通过诱导骨髓成骨-成脂分化异常,破坏造血生态位,导致信号通路异常,造血生长因子紊乱,影响造血微环境。在治疗骨髓抑制方面,传统医学凭借其多靶点、毒副作用小、成本低等优势得到临床重视,相关的临床研究和基础动物研究等在不断进行中并取得一定进展。因此,本文主要对化疗造成骨髓抑制的机制及中医药防治相关研究进展进行综述,为临床化疗药物选择及骨髓抑制的防治提供参考。

补髓生血丸对再生障碍性贫血小鼠造血功能及骨髓VEGF、TPO、VCAM-1水平的影响

目的 观察补髓生血丸(熟地黄、鹿角胶、黄芪、当归等)对再生障碍性贫血(AA)小鼠的防治作用,并从改善骨髓造血微环境角度分析相关作用机制。方法 将昆明种雄性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组(再造生血片,2.70 g·kg^(-1))及补髓生血丸低、中、高剂量组(2.25,4.50,9.00 g·kg^(-1)),每组15只。采用白消安(10 mg·kg^(-1))及环磷酰胺(20 mg·kg^(-1))交替腹腔注射给药12 d,制备AA小鼠模型。造模同时灌胃给药,每日1次,连续30 d。检测小鼠外周血象;采用瑞士-姬姆萨染色法观察小鼠骨髓涂片;进行骨髓有核细胞计数;HE染色法观察骨髓病理变化;ELISA法检测小鼠血清及骨髓中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素(TPO)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)的水平。结果 各组间的血清及骨髓TPO水平无明显差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠的红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)水平均明显下降(P<0.05);血清及骨髓中VCAM-1含量明显下降(P<0.05),血清中VEGF含量明显下降(P<0.05);小鼠的骨髓有核细胞数量显著减少(P<0.01),骨髓脂肪化明显,出现较大和特大的脂滴空泡,骨髓象损伤评分显著升高(P<0.01);小鼠骨髓腔明显空虚,造血细胞被大量的脂肪细胞代替,造血细胞数量明显减少,淤血、出血和间质水肿等现象显著,巨核细胞未见,骨髓病理损伤评分显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠的RBC、HGB水平均明显升高(P<0.05),补髓生血丸高剂量组小鼠的WBC、PLT水平明显升高(P<0.05);各给药组小鼠的血清及骨髓中VCAM-1含量均明显上升(P<0.05,P<0.01),补髓生血丸高剂量组小鼠血清VEGF含量明显上升(P<0.05);各给药组小鼠的骨髓有核细胞数量显著上升(P<0.01),骨髓增生活跃,有核细胞密布,脂滴明显减少、变小,补髓生血丸中、高剂量组小鼠的骨髓象损伤评分明显降低(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠骨髓可见有核细胞、巨核细胞逐渐增多,淤血、出血减轻,脂肪细胞减少,补髓生血丸中、高剂量组小鼠骨髓病理损伤评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 补髓生血丸能够改善AA小鼠的造血功能,可能与提高VCAM-1、VEGF水平,改善骨髓造血微环境有关。

当归补血汤化学成分及其促造血功能研究进展

当归补血汤是补气生血的经典中药名方,具有促进造血、保护肾组织、调节免疫、抗纤维化、抗肿瘤及抗抑郁等作用。本文通过分析近15年关于当归补血汤促进造血功能的研究文献,总结了当归补血汤的化学成分,并从促进造血干细胞和外周血细胞的形成、抑制造血干细胞衰老、改善骨髓造血微环境、调节肠道菌群、调节免疫系统及调节髓外器官造血等方面综述当归补血汤对造血系统的影响。

低氧诱导因子1α在G-CSF诱导小鼠造血干细胞动员中的表达变化

目的:探究小鼠骨髓微环境低氧诱导因子1α(HIF-1α)在G-CSF动员造血干细胞(HSC)过程中的表达变化及相关机制。方法:采用流式细胞术检测注射G-CSF前后小鼠外周血Lin-Sca-1+c-kit+(LSK)细胞比例,并采用RQ-PCR、免疫组化等方法检测G-CSF动员不同时间点小鼠骨髓及骨内膜HIF-1α、骨钙素(OCN)mRNA和蛋白的表达水平,光学显微镜下观察小鼠股骨标本成骨细胞数。结果:G-CSF动员4 d小鼠外周血LSK细胞比例开始升高,动员5 d达到高峰,均较对照组显著升高(P<0.05);稳态小鼠HIF-1α mRNA在骨髓有核细胞和骨内膜成骨细胞中表达差异无显著统计学意义(P=0.073),OCN mRNA主要表达于骨内膜细胞,显著高于骨髓有核细胞(P=0.034);动员过程中HIF-1α基因、蛋白表达水平升高,OCN基因、蛋白表达水平下降,骨内膜成骨细胞数量减少(P<0.05);HIF-1α的表达变化晚于OCN(P=0.004),且与小鼠外周血LSK细胞比例变化趋势一致(P=0.000)。结论:在G-CSF介导的HSC动员过程中,骨髓HIF-1α表达增加,成骨细胞受抑引起HSC向外周迁移是导致其变化的原因之一。

真实世界遗传学高危的急性髓系白血病患者临床结局分析

目的:观察标准化疗诱导的预后不良组急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的临床特征。方法:回顾性分析南方医科大学珠江医院2016年1月至2020年12月收治的98例首个疗程使用标准方案化疗的预后不良组AML患者的临床和实验室资料。结果:预后不良组AML患者中位年龄为37(18~67)岁,其中男性占61.2%。复杂核型(30.0%)、+8(20.0%)、单体核型(18.9%)是最常见的细胞遗传学异常,FLT3-ITD(34.1%)、ASXL1(20.5%)、RUNX1(15.9%)、DNMT3A(15.9%)、TET2(15.9%)是最常见的基因突变,其首疗程完全缓解率为37.8%。中位总生存期(median overall survival,m OS)和中位无事件生存期(median event-free survival,mEFS)分别是17个月和6个月,中位无复发生存期(median relapse-free survival,mRFS)为12个月。移植方面,有55例患者进行了异基因造血干细胞移植,中位随访16个月,m OS尚未达到,显著高于未移植组的9个月(P<0.001)。移植后1年及2年累积复发率分别是22.7%及31.8%,1年的非复发死亡率为15.8%。此外,对于34例首个疗程诱导后评估为未缓解的患者,不同方案的治疗效果比较显示:CAG±去甲基化药物方案相较于标准“3+7”方案具有更高的再诱导完全缓解率(77.8%vs.23.1%;P=0.027)。结论:预后不良组AML患者缓解率低,复发率高,生存期短。对于首疗程诱导化疗效果较差的预后不良组AML,CAG联合去甲基化药物是一种可考虑的再诱导方案。

异基因造血干细胞移植患者泪液中IL-36的表达情况及其与眼表微环境的相关性分析

目的:通过检测异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者泪液中IL-36(α、β、γ)的表达情况,研究其与眼表微环境的相关性,并进一步分析其表达与眼部移植物抗宿主病(oGVHD)的关系。方法:前瞻性研究。选取2020-01就诊于我院血液科,行allo-HSCT患者35例70眼,另选取年龄、性别相匹配的健康志愿者35例70眼做为正常对照组。allo-HSCT组受检者术后随访3次,每3mo 1次,对术后是否出现眼部症状的受检者分为oGVHD组和非oGVHD(Non-oGVHD)组。对受试者进行眼表疾病指数(OSDI)问卷调查、泪液分泌试验(Schirmer试验)、泪膜破裂时间(TBUT)、角膜荧光素钠染色(FL)、结膜印迹细胞学染色(CIC)评估眼表状况,并用ELISA检测受检者泪液中IL-36(α、β、γ)表达水平。结果:正常对照组中,IL-36(α、β、γ)表达水平分别为74.32±5.27、70.02±8.43、97.41±8.66pg/mL;allo-HSCT组中,IL-36(α、β、γ)基线表达水平分别为77.27±7.03、74.53±7.53、100.77±9.74pg/mL,两组比较无差异(t=1.648、1.954、1.262,均P>0.05)。Non-oGVHD组不同时点IL-36α、IL-36β、IL-36γ比较均无差异(P>0.05),oGVHD组不同时点IL-36α、IL-36β、IL-36γ比较均有差异(P<0.05)。与Non-oGVHD组相比,oGVHD组不同时点的IL-36α、IL-36β均明显升高(均P<0.05)。oGVHD组泪液中IL-36(α、β、γ)表达水平与OSDI评分、FL、CIC呈正相关,与TBUT、Schirmer试验呈负相关(均P<0.05)。结论:检测泪液中IL-36(α、β、γ)水平对allo-HSCT后oGVHD的诊断有重要意义;在oGVHD患者眼部不适症状出现之前,IL-36(α、β、γ)已在oGVHD患者泪液中高表达,且与眼表参数存在相关性。

骨髓微环境中巨噬细胞调控造血机制的研究进展

骨髓巨噬细胞是造血微环境的重要组成部分,与造血调控和造血干细胞移植(HSCT)关系密切。最近的研究表明,骨髓巨噬细胞是造血干细胞龛的重要组成部分,有助于调控造血干/祖细胞的动员和功能;造血干细胞移植后,骨髓微环境受损,大量巨噬细胞浸润,调控巨噬细胞的相关信号通路能够促进造血的恢复及造血功能重建。体外巨噬细胞与造血干细胞共同培养后,明显增加了造血干细胞数量及克隆形成的能力,证明巨噬细胞在骨髓造血微环境中对造血调控具有重要作用。本文就骨髓造血微环境中巨噬细胞对造血作用的研究进展作一综述。

人参多糖对粒单系造血祖细胞增殖分化的影响

本文采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学等实验血液学技术检测人参多糖 (GPS)体外作用对人粒单系造血祖细胞 (CFU GM)增殖分化的影响及GPS刺激制备的胸腺细胞培养上清液(HTCM)、脾细胞培养上清液 (HSCM)、骨髓基质细胞条件培养液 (HBMSCM)中GM CSF的生物活性。结果发现 :①在有外源性粒单系集落刺激因子 (GM CSF)存在的情况下 ,GPS能显著促进CFU GM的增殖与分化。②经GPS体外诱导制备的胸腺细胞、脾细胞、骨髓基质细胞的条件培养液能明显提高人CFU GM的产率。③经GPS体外刺激后 ,胸腺细胞、脾细胞、骨髓基质细胞GM CSF蛋白表达水平较对照组明显提高。结果表明GPS可能通过直接和 或间接途径促进胸腺细胞、脾细胞和造血诱导微环境中的基质细胞合成和分泌GM CSF或GM CSF样活性 ,进而促进CFU

人骨髓间充质干细胞支持体外造血(英文)

体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境系统 ,其中的细胞成分是该系统的关键。存在于骨髓中的间充质干细胞 (MSCs)是成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种骨髓基质细胞的前体细胞 ,在造血调控中可能具有一定的作用。本研究首先建立了成人骨髓MSCs的分离及体外培养的方法 ,并应用长期骨髓细胞培养体系 ,观察了MSCs滋养层体外维持长期培养启动细胞 (LTC IC)的能力及其促进造血细胞分化的功能。结果显示 :①脐带血来源的CD34+细胞粘附于滋养层上形成造血灶 ,表明MSCs可形成与骨髓基质细胞相似的体外造血微环境 ;②共培养 5周后造血细胞仍具有体外集落形成能力 ,说明MSCs具有维系LTC IC的能力 ;③流式细胞术分析显示 ,体外培养 5周后约 1%悬浮细胞表达CD34,15 %细胞CD4 1a阳性 ,提示MSCs促进造血细胞向巨核系细胞分化。

三七总皂甙对红系祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养和造血生长因子检测等实验血液学技术,研究三七总皂甙对小鼠红系祖细胞增殖调控的生物学机理.结果表明:三七总皂甙对正常或骨髓抑制一贫血模型小鼠的红系祖细胞增殖有明显促进作用;三七总皂甙亦可提高阿糖胞苷所致祖细胞的“自杀”率;经三七总皂甙诱导制备的脾细胞、L细胞(成纤维细胞株)培养上清液对红系祖细胞的增殖具有较高刺激活性.该文提示三七总皂甙可能通过诱导造血微环境中的成纤维细胞、淋巴细胞等分泌较高活性的红系造血调控因子和/或协同造血生长因子,以促进红系祖细胞增殖分化,这或许是三节“补气、活血”的生物学机理之一.

成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建及发挥调控作用

目的对成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建并在其中发挥调控作用的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对成骨细胞作为骨髓造血微环境的主要成分、对破骨细胞、造血干细胞细胞周期和相关黏附因子,以及细胞因子的调控研究进展进行回顾性总结与分析。结果成骨细胞是成熟个体中骨髓造血微环境的关键构成成分。成骨细胞通过细胞受体-配体的信号传导、细胞因子、细胞黏附及对其他参与构建骨髓造血微环境中的细胞的调控作用,将原始造血干细胞维持在静止状态,保持了其自我更新,多向分化的干细胞特性。结论对成骨细胞与骨髓造血微环境相互作用的进一步研究,为造血干细胞的临床移植应用提供了更好的理论基础。

人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定

目的:体外分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC)。方法:利用密度梯度离心法分离出人骨髓单个核细胞(MNC),通过贴壁筛选法建立hBMSC的体外培养体系,并通过一系列检测方法对所培养的细胞进行鉴定。结果:细胞主要呈“成纤维样”,但体积较大、形状不规则、细胞质突起多,细胞核大而疏松,核仁明显。流式细胞仪检测:CD34阳性率为2.09%、CD29阳性率为94.46%;CD54及CD105表达阳性。细胞周期及透射电镜检测提示细胞处于相对原始状态。免疫细胞化学染色显示:CD14、CD45、胶原蛋白Ⅱ呈阴性;CD106、CD166、纤维连接蛋白、波形蛋白及胶原纤维酸性蛋白呈阳性。细胞化学染色:糖原染色呈强阳性;碱性磷酸酶染色呈阴性。通过诱导分化培养可诱导出成骨细胞。结论:成功建立了稳定的hBMSC体外培养体系,按照此培养体系进行培养可获得hBMSC。hBMSC可传代培养,但在培养过程中细胞逐渐出现老化现象,且不能冻存。