带3蛋白C末端132个氨基酸残基与血型糖蛋白A相互作用位点的研究

目的 利用酵母双杂交系统探寻带 3蛋白与血型糖蛋白A(GPA)的相互作用位点。方法 采用PCR方法 ,从pFAST Bac AE1 C end杆状病毒表达载体中扩增出AE1 C end截断突变体 (Arg832 Arg879) ,将突变体的cDNA片段插入酵母双杂交系统GAL4AD端表达载体中 ,观察其在选择性培养基上的表达情况。用醋酸锂法将构建好的重组质粒与BD端表达质粒共同转化酵母菌AH10 9,经酵母双杂交营养缺陷培养和 β 半乳糖苷酶检测证实带 3蛋白C 末端与GPA之间的作用位点。结果 成功构建了AE1 C 末端截断突变体酵母双杂交的AD端表达质粒 ,证实带 3蛋白C 末端截断突变体与GPA不止有一个相互作用位点。结论 带 3蛋白与GPA的作用位点不仅在带 3蛋白的酸性C端域 。

L-链N-末端及补体决定区3上的氨基酸残基改变增加人类N血型抗原重组F(ab)亲和力

背景 为了解糖肽特异性抗体细微特性,本文着重研究人类MN血型系统。F(ab)噬菌体展示技术曾被应用于F(ab)家族构建,其间H-链Fd片段保持不变,L-链则被拖曳。这样形成了2种F(ab):N92和NNA7,分别对N具有低和高的亲和力。尽管它们的L-链序列较短,并具有92％的氨基酸同源性,它们在N-末端及补体决定区3(CDR3)89、91。

乳腺癌患者不同病理特征中H3K9ac、PD-L1、VISTA表达及其联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值

目的探讨乳腺癌患者不同病理特征中组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)、程序性死亡因子配体1(PD-L1)、T细胞激活抑制物免疫球蛋白的可变区结构域(VISTA)及其联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值。方法选取2018年5月至2020年7月平顶山市第一人民医院收治的130例乳腺癌患者,免疫组化检测乳腺癌组织及癌旁组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况。比较乳腺癌组织、癌旁组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;比较乳腺癌不同病理特征中H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;随访3 a,根据是否发生转移、复发、死亡分为预后不良和预后良好;比较预后不良和预后良好乳腺癌患者H3K9ac、PD-L1及VISTA表达情况;分析H3K9ac、PD-L1、VISTA表达联合检测对乳腺癌不良预后的预测价值。结果乳腺癌组织中H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率均高于癌旁组织(P<0.05);不同组织分化程度、T分期、N分期、阳性淋巴细胞数目中H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);随访3 a,130例乳腺癌患者失访7例(5.38%),预后不良22例,预后良好101例。预后不良患者H3K9ac、PD-L1、VISTA高表达率高于预后良好患者(P<0.05);H3K9ac、PD-L1、VISTA联合检测预测乳腺癌患者不良预后的AUC为0.902,大于各指标单独预测的0.714、0.866、0.781(P<0.05)。结论乳腺癌患者癌组织中H3K9ac、PD-L1及VISTA均呈高表达,其高表达与分化程度、分期、淋巴细胞数目等病理特征相关,H3K9ac、PD-L1、VISTA联合检测对乳腺癌患者不良预后具有较高的预测价值。

3-苄基-6-(1-氨基烃基)-1,2,4-三唑并[3,4-b]-1,3,4-噻二唑的合成与波谱表征

3 苄基 4 氨基 5 巯基 1,2 ,4 三唑与氨基酸在三氯氧磷存在下反应 ,合成 3 苄基 6 (1 氨基烃基 ) 1,2 ,4 三唑并 [3,4 b] 1,3,4 噻二唑 ,其结构经元素分析、红外光谱、核磁共振氢谱、碳谱、质谱等确证 .这是稠杂环接氨基酸残基的首次报道 .

三阴性乳腺癌组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征和预后的关系

目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)、组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(H3K9ac)表达与临床病理特征和预后的关系。方法选择TNBC患者145例,收集术中切除的TNBC组织,采用免疫组化法检测H3K4me3、H3K9ac和Ki-67表达,分析TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达与临床病理特征、Ki-67表达强度以及预后的关系。结果145例份TNBC组织中,H3K4me3高表达84例份、低表达61例份,H3K9ac高表达78例份、低表达67例份。TNBC组织H3K4me3、H3K9ac表达均与T分期、N分期和组织分化程度有关(P均<0.05),而与年龄、绝经状态、肿瘤直径、病理类型无关(P均>0.05)。随着Ki-67表达强度增加,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac阳性表达逐渐增多(P均<0.05)。TNBC组织H3K4me3高表达者与低表达者3年累积生存率分别为60.7%、78.7%,H3K9ac高表达者与低表达者3年累积生存率分别为58.3%、82.0%,TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达者3年累积生存率均显著低于其低表达者(P均<0.05)。结论TNBC组织H3K4me3、H3K9ac高表达,其高表达与肿瘤侵袭、转移以及患者预后不良密切相关。

组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A在中枢神经系统疾病中的作用

组蛋白甲基化修饰是表观遗传的重要机制之一,最近研究发现组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)在个体发育、组织分化和肿瘤发生发展等过程中发挥重要的调控作用。成年动物大部分脑区已经失去神经发育功能,但是最新单细胞测序技术和精神疾病的动物模型研究揭示动物脑内KDM5A表达改变与神经疾病发生相关,提示KDM5A是探究脑疾病潜在的靶分子。本文从KDM5A分子结构、表达调控通路等方面总结最新进展,从而为后续其他中枢神经系统疾病研究提供参考。

Tb^(3+)离子与植物辣根过氧化物酶的作用方式探讨

利用紫外可见吸收光谱、红外光谱、荧光光谱、原子吸收及酶分离方法, 首次研究了稀土离子 Tb3+与植物辣根过氧化物酶(HRP)的相互作用方式. 结果表明, Tb3+与 HRP 作用方式包括: (1) Tb3+与肽链上的氨基酸残基作用, 影响酶活性中心的微结构; (2) Tb3+能部分取代酶中的 Ca2+; (3) Tb3+能部分剪切肽链上的氨基酸残基, 改变酶的结构. 因此,Tb3+与 HRP 的相互作用可能以一种方式为主, 或几种作用方式同时存在.

HBV X蛋白反式调节基因XTP11的克隆化研究

目的:应用寡核苷酸基因芯片技术及生物信息学分析,筛选并克隆乙肝病毒X蛋白(HBxAg)反式激活新型靶基因。方法:以HBxAg表达质粒pcDNA 3 1(-) X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA 3. 1(-)为平行对照,提取mRNA并进行寡核苷酸基因芯片分析。对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性。通过序列同源性搜索和比对和电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列。从转染了pcDNA 3 . 1(-) X的HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)技术,扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实。结果:该新基因命名为XTP11,在GenBank中注册,注册号为AY740 5 2 0。该基因的编码序列全长为13 44个核苷酸(nt) ,编码产物由44 8个氨基酸残基(aa)组成。结论:HBxAg反式激活新型靶基因XTP11的筛选与克隆,为进一步研究HBxAg反式激活作用的分子生物学机制奠定基础。

血清T_3、T_4变化与心血管疾病关系的探讨

临床常用T3、T4放射免疫分析了解甲状腺功能情况,但甲状腺激素水平变化与心功能关系的研究报导较少.我们最近检测了70例心血管疾病患者血清T3、T4水平变化情况,发现心血管病患者血清T3水平有降低趋势且与心功能损伤程度呈正相关,而T4.变化不大.

氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2及组蛋白H3赖氨酸残基甲基化水平的抗结肠癌作用研究

目的探索氨苄西林通过调控泛素样含PHD和环指域蛋白2(UHRF2)和组蛋白H3赖氨酸残基(H3K9)甲基化水平的抗结肠癌作用机制。方法将SW480、HT29细胞均分为对照组和实验组。实验组给予含1μg·mL^(-1)氨苄西林的RPMI培养基进行培养;对照组给予不含氨苄西林的RPMI培养基进行培养。用蛋白质印迹法检测UHRF2和H3K9甲基化水平,用CCK-8实验法检测细胞的增殖能力,用划痕实验法检测细胞的迁移能力,用Transwell实验法检测细胞的侵袭能力。结果在SW480细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为102.36±10.12和698.67±36.92,H3K9二甲基化(H3K9me2)蛋白相对表达水平分别为406.59±20.97和721.52±36.20,H3K9三甲基化(H3K9me3)蛋白相对表达水平分别为219.78±25.88和821.97±50.61,细胞凋亡率分别为(45.28±6.35)%和(26.18±3.25)%,细胞划痕愈合率分别为(9.47±3.54)%和(26.29±4.29)%,侵袭细胞数分别为(29.23±3.78)和(39.52±4.15)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在HT29细胞中,实验组和对照组的UHRF2蛋白相对表达水平分别为160.85±29.74和551.79±39.76,H3K9me2蛋白相对表达水平分别为385.26±46.98和601.30±29.86,H3K9me3蛋白相对表达水平分别为496.85±36.22和725.91±53.62,细胞凋亡率分别为(50.35±7.43)%和(29.45±5.65)%,细胞划痕愈合率分别为(6.54±4.16)%和(21.14±5.74)%,侵袭细胞数分别为(32.22±3.62)和(41.63±5.59)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氨苄西林可能通过下调UHRF2蛋白水平及H3K9甲基化水平,从而抑制结肠癌细胞的生长。

促血小板生成素研究进展

血小板减少性出血一直是临床上存在的主要问题之一,特别是在肿瘤化疗和骨髓移植后,血小板恢复缓慢,极有可能导致严重后果。而目前所采用的输注血小板的方法,不仅需要大量的浓缩血小板,而且常发生同种免疫而致血小板输注无效、感染及其他难以控制的并发症。因而寻找一种能促进体内血小板生成的生长因子即显得极为重要。促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)

NEP1-40和NT-3基因共转染施万细胞来源外泌体对神经干细胞存活与分化的影响

目的 观察Nogo胞外肽端残基1-40(Nogo extracellular peptide residues 1-40,NEP1-40)和神经营养因子3(neurotrophin 3,NT-3)基因共转染施万细胞来源外泌体(Schwann cell-derived exosome,SCDE)对神经干细胞(neural stem cell,NSC)存活与分化的影响,为SCDE与NSC共移植的体内试验奠定基础。方法 通过慢病毒载体将NEP1-40及NT-3双基因转染入施万细胞,收集SCDE进行鉴定。选取传代3次的NSC,将其接种到接种板中,分为常规培养组、单纯外泌体培养组(加入空载质粒修饰SCDE进行培养)和双基因外泌体培养组(加入双基因修饰SCDE进行培养)。检测各组细胞的活性,并通过免疫荧光检测神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和半乳糖神经酰胺酶(galactosylceramidase,GALC)阳性的细胞来评价NSC的存活与分化情况。结果 双基因转染后荧光强度均较高且细胞状态较好。双基因组NEP1-40和NT-3的信使RNA和蛋白相对表达水平均高于空载质粒组(P<0.05)。双基因组SCDE中NEP1-40和NT-3的蛋白相对表达水平均高于空载质粒组(P<0.05),两组的SCDE中CD63的蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。细胞活性方面,双基因外泌体培养组细胞活性最强,单纯外泌体培养组次之,常规培养组最弱,组间两两比较差异有统计学意义(1.28±0.04 vs. 0.72±0.09 vs. 0.41±0.04,P<0.05)。细胞存活情况方面,双基因外泌体培养组的NeuN阳性细胞(5.23±0.22 vs. 2.36±0.09 vs. 1.00±0.01)和GALC阳性细胞(2.29±0.06 vs.1.75±0.02 vs.1.00±0.04)存活情况最佳,单纯外泌体培养组次之,常规培养组最差,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);常规培养组的GFAP阳性细胞存活情况最佳,单纯外泌体培养组次之,双基因外泌体培养组最差(1.00±0.04 vs. 0.52±0.04 vs. 0.30±0.01),组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞分化情况方面,双基因外泌体培养组的NeuN阳性细胞(0.44±0.02 vs. 0.29±0.01 vs. 0.16±0.01)和GALC阳性细胞(0.38±0.07 vs. 0.23±0.02 vs.0.12±0.01)分化情况最佳,单纯外泌体培养组次之,常规培养组最差,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);常规培养组的GFAP阳性细胞分化情况最佳,单纯外泌体培养组次之,双基因外泌体培养组最差(0.52±0.05 vs.0.42±0.03 vs. 0.30±0.09),组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 通过慢病毒载体可将NEP1-40及NT-3双基因成功转染入施万细胞,能有效提高SCDE中相关蛋白含量,且该外泌体在体外能有效促进NSC的存活与分化。

揭示LSD1在胚胎干细胞分化中起关键作用的机制

据Whyte WA2012年2月1日（Nature，2012Feb1．doi：10．1038，naturel0805）报道，一种赖氨酸特异性去甲基酶1（1ysine-spec-ific demethylase 1，LSDl）在胚胎干细胞分化为其他细胞类型时发挥着关键性作用。 LSDl是一种组蛋白去甲基酶,作用在组蛋白H3特异性赖氨酸残基上，从而改变染色体DNA上基因转录。

重组人甲状旁腺秦（1—84）[rhPTH（1-84）]

人甲状旁腺素（1—84）[hPTH（1—84）]，是由甲状腺主细胞分泌的含84个氨基酸残基组成的多肽类激素，分子量约为9500道尔顿。它调节钙、磷代谢的生理作用主要通过其靶器官肾、骨来完成；另外对小肠的作用需要借助维生素D3来实现。

重组人甲状旁腺素（1-84）

人甲状旁腺素（1-84）[hPTH（1-84）J，是由甲状腺主细胞分泌的含84个氨基酸残基组成的多肽类激素，分子量约为9500道尔顿。它调节钙、磷代谢的生理作用主要通过其靶器官肾、骨来完成；另外对小肠的作用需要借助维生素D3来实现。

八角茴香油精馏釜底残液中1个新的苯甲醛类化合物

目的研究八角茴香油精馏釜底残液的化学成分。方法运用多种色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从八角茴香油精馏釜底残液中得到2个化合物,分别鉴定为(E)-1,4-二(4-甲氧基苯基)-3-丁烯-2-酮(1)和4-羟基-3-(3-甲基-3-丁烯-2-基)苯甲醛(2)。结论化合物1的核磁数据为首次报道,化合物2为新化合物。

诱骗受体3分子研究进展

1998年Piui等通过搜索表达标签数据库，在原发性肺和结肠肿瘤中发现并克隆表达了一个可溶性的受体，命名为诱骗受体3（decoy receptor3，DcR3），又称为肿瘤坏死因子受体6（tumor necrosis facwr receptor6，TR6）或M68。DcR3属于肿瘤坏死因子受体（tumor necrosis factor receptor，TNFR）超家族的成员，其开放阅读框编码300个氨基酸（包括29个氨基酸残基组成的信号肽），但没有跨膜区，是一个分泌性的蛋白。

职业性铝接触工人认知功能与H3K4me3和BDNF的关系

目的探讨职业性铝接触对工人认知功能影响及其与外周血淋巴细胞组蛋白H3赖氨酸残基4位点三甲基化修饰（H3K4me3）、血浆脑源性神经生长因子（BDNF）蛋白水平的关系。方法于2015年9月，采用整群抽样的方式，选择山西某铝厂235例男性工人作为研究对象。采用简短精神状态量表（MMSE）、画钟试验（CDT）、数字广度测验[DST，包括正序测试（DSFT）和倒序测试（DSBT）]、物体记忆测验（FOME）、言语流畅性测验（VFT）等进行调查，收集研究对象的一般情况并进行认知功能评分；采用石墨炉原子吸收法测定血铝含量，以血铝水平的肘（P25，P75）分为低、中、高血铝组；酶联免疫吸附试验（ELISA）方法定量检测外周血淋巴细胞中H3K4me3水平和血浆BDNF蛋白水平。结果工人血铝水平M（P25，P75）为134．36（100．14，178．96）μg/L。高血铝组工人MMSE、DSFF、DSBT、DST平均得分分别为27．98±1．53、9．19±2．00、6．08±1．63、15．27±3．11，均低于低血铝组（28．83±1．25、10．64±2．87、7．19±3．07、17．81±4．72），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。3个血铅组工人的CDT、FOME、VFT平均得分比较，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。高血铝组工人外周血淋巴细胞H3K4me3水平为（18．45±9．81）ng/μg Pro、血浆BDNF蛋白水平为（26．07±10．18）ng／ml，均分别低于低血铝组[（23．76±9．89）ng/μg Pro、（31．66±9．24）ng/ml]，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。Spearman秩相关分析结果显示，H3K4me3、BDNF、MMSE、DSFT和DST与血铝水平之间存在负相关（rs=-0．307、-0．214、-0．252、-0．197和-0．181，均P〈0.01）。结论长期职业性铝接触可能引起认知功能改变，并伴随外周血淋巴细胞H3K4me3水平和血浆BDNF蛋白表达降低。