血红蛋白携氧-释氧动力学研究

本文研究了鸡、家兔、鲤鱼、蟾蜍4种实验动物血红蛋白(hemoglobin,Hb)携氧-释氧动力学过程,初步建立Hb携氧-释氧动力学研究方法,并探讨Hb携氧-释氧动力学过程与动物生存环境之间的关系。结果显示:4种动物Hb携氧动力学曲线均呈"S"形曲线特征,与传统的Hb氧解离曲线(oxygen dissociation curve,ODC)相似;同时不同动物Hb携氧-释氧动力学曲线也有各自特点,如鸡Hb释氧时间长达(1411±6)s;在Hb携氧-释氧曲线I阶段,鲤鱼上升斜率远大于家兔等。提示Hb携氧-释氧动力学曲线可反映不同动物Hb携氧效率的差异。与传统ODC参数P50相对应,由动力学曲线可得到Hb携氧动力学参数T50。T50是Hb达到50%氧饱和度所需时间,可直观反映Hb携氧效率的差异。4种实验动物Hb均有较稳定的T50,从大到小依次为:鸡、家兔、鲤鱼和蟾蜍。对Hb携氧动力学曲线与ODC综合分析,可得到Hb携氧效能参数E50,E50表示Hb达到50%氧饱和度所用时间与环境氧分压之间的关系,即E50(50%Sat,XPO2,YT)。E5有可能成为全面评价Hb携氧效能的综合指标。

纯化工艺对牛血红蛋白携氧/释氧能力的影响研究

目的考察纯化过程中不同实验条件对牛血红蛋白携氧/释氧能力的影响,筛选获得稳定携氧/释氧能力血红蛋白的方法,为血红蛋白氧载体(HBOC)的原料制备提供工艺方案。方法采用低渗溶血、微滤、阴离子层析、超滤等步骤,从新鲜牛血中分离得到纯化的牛血红蛋白。在纯化过程中,运用红细胞携氧/释氧功能评价装置对牛血红蛋白进行分析,同时检测纯化样品的高铁血红蛋白(MetHb)含量、纯度、回收率等,对纯化工艺条件进行筛选。结果研究确定较优的纯化条件为:溶血选用PB溶血液,微滤选用聚偏二氟乙烯(PVDF)材质滤膜,层析条件筛选为缓冲液A(20 mmol/L Tris-HCl,pH 8.0),缓冲液B(20 mmol/L Tris-HCl+0.15 mol/L NaCl,pH 8.0),超滤选用PBS缓冲液。该方法对牛血红蛋白的携氧/释氧能力基本无影响,分离纯化的牛血红蛋白氧饱和度达50%时的氧分压(P50)为(28.69±0.11)mmHg,变异系数(CV)为0.40%,Hill系数为2.49±0.04,CV 1.52%,纯度达到99%以上,MetHb含量低于1%。结论在纯化过程中不同实验条件可对牛血红蛋白携氧/释氧能力造成差异影响,该研究为筛选最佳工艺参数奠定了基础。