蜡样芽孢杆菌溶血素BL的表达及多克隆抗体的制备

为了获得蜡样芽孢杆菌溶血素BL的三个亚基HblA、HblC和HblD的蛋白质和多克隆抗体,试验采用PCR方法分别扩增得到HblA、HblC和HblD基因片段,基于原核表达载体pET-28a构建重组表达质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞分别表达重组蛋白HblA、HblC和HblD,通过Ni2+亲和层析柱对其进行纯化,用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠制备相应的多克隆抗体,通过Western-blot检测蜡样芽孢杆菌BC12培养上清液中的溶血素BL。结果表明:试验成功构建出HblA、HblC和HblD基因的重组表达质粒;获得与预期大小相符的重组蛋白HblA、HblC和HblD,蛋白质条带大小分别为44.7,52.1,46.8 ku;制备出HblC和HblD的多克隆抗体,该抗体均能特异性识别蜡样芽孢杆菌培养上清液中的溶血素BL亚基。说明试验制备的多克隆抗体可用于蜡样芽孢杆菌溶血素BL的检测。

原料乳中蜡样芽孢杆菌部分致病基因的鉴定及毒力评价

研究原料乳中蜡样芽孢杆菌的潜在威胁,对我国10个省市原料乳中蜡样芽孢杆菌的污染状况进行调查,并利用PCR扩增技术及血平板检测的方法分析乳源性蜡样芽孢杆菌中的毒性分布。结果表明,原料乳中蜡样芽孢杆菌检出率为33%,检出水平为1×103～1×106CFU/ml,检出的蜡样芽孢杆菌中25株(75.8%)能产生溶血素BL,24株(72.7%)含有bceT基因,至少产生一种毒素的菌株有31株占检出菌总数的93.9%。研究结果证实我国原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染状况不容乐观,严格监控原料乳中的蜡样芽孢杆菌污染,对生产出优质乳制品具有重要意义。

牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL亚基的原核表达及其生物学活性分析

蜡样芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌,分布广泛,具有一定的致病性。不同的蜡样芽孢杆菌携带有不同的毒力因子,这直接决定了蜡样芽孢杆菌株致病性的差异。研究和探讨毒力因子分布以及具体毒素的生物活性有助于对蜡样芽孢杆菌病采取更科学的防控。本研究通过原核表达系统将溶血素BL三亚基重组表达,并对表达蛋白进行了纯化和部分生物学活性的检测。研究结果表明,牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL可以在原核表达系统中成功表达和纯化,牛源致病性蜡样芽孢杆菌溶血素BL拥有溶血性、细胞毒性、很好的免疫原性以及对小鼠具有一定的免疫保护性。本研究表达了溶血素BL三亚基,并探究了牛源致病性蜡样芽孢杆溶血素BL的生物学活性。本研究为进一步揭示蜡样芽孢杆菌溶血素BL的致病作用机制和建立针对牛源致病性蜡样芽孢杆菌病的检测方法奠定了理论基础。