单核细胞增生李斯特菌LLO-InlP缺失株的构建及部分生物学特性研究

目的构建单核细胞增生李斯特菌LLO-InlP缺失株,探究LLO、InlP基因对单核细胞增生李斯特菌生物学特性的影响。方法通过温度敏感型(Ts)质粒载体基因敲除法,构建单核细胞增生李斯特菌LM681ΔInlP、LM681ΔLLO-InlP基因缺失株,通过检测不同时间的OD 600 nm值绘制生长曲线分析LM681、LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO三株菌的体外生长能力;以感染复数MOI值为10感染细胞,测定LM681、LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO对人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SV40)、人绒毛膜癌细胞(JEG-3)黏附侵袭能力;动物水平上测定小鼠半数致死量、感染后的脑、肝、脾载菌量。结果成功获得片段大小为1125 bp的缺失株LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO(亲本株LM681为2292 bp);生长曲线结果显示,各菌OD 600值无统计学差异;3株菌体外感染HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭试验结果显示,LM681ΔInlP、LM681ΔInlP-ΔLLO较LM681对HTR-8/SV40细胞、JEG-3细胞黏附侵袭率均极显著降低(HTR-8/SV40细胞F LM681ΔInlP-LM681=102.792、F_(LM681ΔInlP-ΔLLO-LM681)=128.459,均P<0.01,JEG-3细胞F LM681ΔInlP-LM681=203.755、F_(LM681ΔInlP-ΔLLO-LM681)=81.279,均P<0.01);LM681亲本株的LD_(50)为10^(6.78),LM681ΔInlP缺失株的LD_(50)为107.45,在攻毒剂量范围LM681ΔInlP-ΔLLO不存在LD_(50),LM681ΔInlP-ΔLLO较LM681的LD_(50)提高了6.78个对数数量级,LM681ΔInlP-ΔLLO组织载菌量整体较亲本株LM681降低。结论LLO、InlP基因缺失在动物感染水平和体外培养细胞感染水平上均极大程度的降低了LM的的毒力,且InlP基因对LM681菌株黏附侵袭滋养层细胞具有一定意义,为研究InlP在单核细胞增生李斯特菌致病中的作用奠定基础。

安徽省114株EHECO_(157)∶H_7菌株毒力因子基因的初步分析

目的 对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论 检测结果显示 ,有 6 3 2 %的EHECO1 57∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33 3% ,说明分离的EHECO1 57∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中 ,有 14 0 %的菌株在 2 4h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18 8% ,显著低于不发酵菌株的 70 4 % 。

抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb及抗链球菌溶血素O检测在类风湿关节炎急性阶段的诊断价值

目的探讨抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O检测在类风湿关节炎急性阶段的诊断价值。方法收集67例类风湿关节炎急性阶段患者为病例组,选取院内体检健康者50例为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体,流式细胞术检测血小板膜糖蛋白GPⅠb的表达,免疫比浊法检测抗链球菌溶血素O的水平。采用Pearson分析进行相关分析,利用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、血小板膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O诊断类风湿关节炎急性阶段的曲线下面积(AUC)。结果病例组抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析中,抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O与类风湿关节炎急性阶段呈正相关(r=0.514、0.620、0.710)。ROC曲线分析显示,抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O的AUC分别为0.82、0.82、0.91,最佳诊断界值分别为21.84RU/mL、14.79%、51.32IU/mL。结论抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体、膜糖蛋白GPⅠb、抗链球菌溶血素O检测对类风湿关节炎急性阶段具有一定的诊断价值,可作为类风湿关节炎急性阶段的辅助诊断指标。

干式时间分辨荧光免疫层析法检测血清抗链球菌溶血素“O”的方法学性能验证

目的验证时间分辨荧光免疫层析法抗链球菌溶血素“O”(ASO)检测试剂的方法学性能。方法参照CLSI对上海捷门生物技术有限公司生产的干式时间分辨荧光分析仪(FIT-1000)ASO荧光免疫层析法检测的精密度、正确度、线性及参考范围进行验证。并以贝克曼IMMAGE800免疫散射速率法作为参考系统,对临床标本进行比对实验。结果正确度试验,检测ASO浓度分别为83.2,136和269 IU/ml的校准品,相对偏倚分别为-1.03%,-0.99%和-2.70%。检测低、高两个浓度血清标本的ASO精密度,CV分别为8.32%,6.39%。ASO浓度范围46.37~868.13 IU/ml时,线性方程为Y=0.9588X-3.889(r2=0.9985)。临床标本(n=61)比对实验,Deming回归方程Y=1.256X-6.51,r=0.9506。性能评价项目结果均达到厂商声明标准。结论应用干式时间分辨荧光分析仪(FIT-1000)及配套试剂检测ASO,其正确性、重复性良好,可满足临床尤其是基层医疗单位的要求。

猩红热患儿风湿三项指标、心肌酶参数和白细胞参数的分析

目的分析猩红热患儿风湿三项指标、心肌酶参数和白细胞参数的临床意义。方法选择2013年6月至2015年6月就诊于邯郸市传染病医院的113例猩红热患儿作为猩红热组,另外选择同期20例正常体检的儿童作为对照组。检测其天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)和肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)、溶血素抗体"O"(ASO)、类风湿因子(RF)和C反应蛋白(CRP),白细胞计数(WBC)、中性粒细胞(N)和淋巴细胞(L)进行统计分析。结果风湿三项中,猩红热组的RF和CRP高于对照组[(26.6±7.1)k U/L比(15.2±4.6)k U/L,(18.2±4.5)mg/L比(3.0±1.1)mg/L](P<0.01);心肌酶参数中,猩红热组LDH、CK-MB、α-HBDH高于对照组[(219.5±36.3)U/L比(177.5±24.7)U/L,(25.3±11.7)U/L比(19.4±3.3)U/L,(176.6±26.2)U/L比(144.9±35.7)U/L](P<0.01);白细胞参数中,猩红热组WBC、N高于对照组[(12.2±4.4)×10~9/L比(6.8±1.4)×10~9/L,(0.63±0.14)比(0.50±0.07),L低于对照组[(0.24±0.06)比(0.38±0.05)](P<0.01)。风湿三项和心肌酶参数中脓毒性高于中毒型、轻型和普通型;中毒型高于轻型;轻型高于普通型(P<0.05)。白细胞参数中,脓毒型和中毒型中的N高于普通型和轻型(P<0.05);L低于普通型和轻型(P<0.05)。结论猩红热患儿风湿三项指标、心肌酶、WBC和N随病情的轻重呈现递增的趋势,其浓度越高,患儿的病情越严重,预后较差。