HepaCAM基因转染对肾癌细胞侵袭活性的影响

目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因转染对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞株786-0侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞后,用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2和未转染的786-0细胞作为对照。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR法检测hepaCAM和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2和MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性变化,Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM基因后,786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),而MMP-2和MMP-9 mRNA的表达和酶活性明显受抑(P<0.05),hepaCAM基因的导入显著削弱了RCC细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:hepaCAM可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达以及抑制明胶酶的活性,进而抑制肾癌细胞786-0的侵袭力。

HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Westernblot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化。结果:RT-PCR和Westernblot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01)。细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖。

hepaCAM基因对膀胱癌细胞体外生物学的影响

目的研究野生型hepaCAM基因对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响。方法脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株,Western blot检测蛋白表达。细胞黏附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响。结果hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域,相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域。获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞。体外黏附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞黏附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组(P<0.01)。MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组(P<0.01)。结论hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间黏附及抑制细胞增殖力,从而对抗肿瘤细胞的浸润和转移。

hepaCAM基因转染对肾癌786-0细胞增殖和侵袭活性的影响

目的:肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)是近年来发现的一类免疫球蛋白超家族细胞黏附分子,具有抑癌基因特性。本文研究hepaCAM基因转染对肾癌(Renal cell carcinoma,RCC)细胞786-0增殖和侵袭能力的影响。方法:将携有hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞(实验组)后用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2(空载组)和未转染的786-0细胞(空白组)为对照,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测hepaCAMmRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测786-0细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM后786-0细胞的hepaCAMmRNA表达水平明显上调(P<0.01),MTT显示实验组与空载组相比hep-aCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6d分别为26.5%、38.1%、35.7%(P<0.01);侵袭实验显示细胞穿透ECM膜的数目为24.6±5.3(实验组)、35.5±6.23(空载组)和37.1±7.0(空白组),实验组细胞明显少于2对照组(P<0.01)。结论:抑癌基因hepaCAM转染能降低肾癌细胞786-0的增殖和侵袭活性。

hepaCAM和VEGF基因表达与肾透明细胞癌侵袭转移关系的探讨

研究肾癌细胞株786-0,RC-2及肾透明细胞癌组织中肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaC-AM)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及其与肾透明细胞癌侵袭转移的关系。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测786-0、RC-2、正常肾组织hepaCAM和VEGFmRNA表达,73例肾透明细胞癌组织及相应癌旁组织中hepaCAMmRNA表达,43例肾透明细胞癌组织及相应癌旁组织VEGFmRNA表达,并比较它们之间的差异性和相关性。与正常肾组织比较786-0,RC-2的hepaCAMmRNA显著降低(P<0.05);VEGFmRNA显著升高(P<0.05)。肾透明细胞癌组织hepaCAMmRNA显著低于癌旁组织(P<0.05);VEGFmRNA显著高于癌旁组织(P<0.05)。在肾透明细胞癌组织中临床Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期两组VEGFmRNA表达差异具有统计学意义(P<0.05),hepaCAM与VEGFmRNA呈负相关(r=-0.329,P<0.05)。提示hepaC-AM基因缺失可能参与肾透明细胞癌侵袭转移,其机制可能与调节VFGF表达改变有关,hepaCAM有望成为一种新的肾癌基因治疗的靶分子。

hepaCAM基因缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响

目的:探讨hepaCAM基因细胞外结构缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响。方法:采用脂质体法将hepaCAM缺失突变体转染T24细胞;激光共聚焦显微镜检测突变体蛋白细胞定位;Western印迹法检测蛋白的表达;体外黏附、解离实验及伤口愈合、基质胶侵袭实验研究突变体对T24细胞黏附、活动力的影响;MTT法检测对细胞增殖的改变。结果:突变体蛋白在单个细胞中的分布与野生型hepaCAM蛋白相近,定位于细胞核周边区域,但细胞相互连接后,与野生型hepaCAM蛋白定位不同,突变体蛋白呈现非特异性分布。获得稳定表达突变体蛋白的T24细胞,在细胞黏附、活动力方面明显低于表达野生型hepaCAM蛋白组,细胞增殖与表达野生型hepaCAM蛋白组相比明显增强。结论:缺失细胞外区域对hepaCAM蛋白细胞定位有重要影响,对抑制T24细胞增殖、增强细胞黏附及活动力无明显作用。细胞外区域对hepaCAM基因发挥正常作用是必须的。

5-氮-2'-脱氧胞苷逆转膀胱癌细胞hepaCAM基因的表达及对其生长的抑制

目的研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)逆转hepaCAM表达及抑制膀胱癌细胞的生长。方法 MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测hepaCAM mRNA的表达。结果在T24细胞中,3.0和10.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.3和1.0μmol/L 5-aza-CdR(P<0.05),在BIU-87细胞中,5.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.1和0.5μmol/L(P<0.05),并且药物处理细胞72 h的抑制率明显高于24和48 h(P<0.05);5-aza-CdR处理细胞后,T24和BIU-87细胞凋亡数明显增加(P<0.05);并可逆转hepaCAMmRNA表达。结论 5-aza-CdR可使hepaCAM基因重新表达,并通过诱导凋亡而抑制膀胱癌细胞的生长。

HepaCAM基因转染对膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨外源性肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)转染对人膀胱癌BIU-87细胞株生长及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)表达的影响。方法使用脂质体2000转染法将携带野生型hepaCAM基因的质粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空载质粒(pEGFPN2)转染人膀胱癌BIU-87细胞,建立稳定过表达hepaCAM基因的BIU-87细胞株。以转染空载质粒及未转染的BIU-87细胞株作为对照,采用MTT法检测各组细胞生长能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hepaCAM、VEGF mRNA水平的变化,Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。结果MTT实验示:hepaCAM基因转染(实验组)BIU-87细胞生长与空载体组和未处理组细胞比较明显受到抑制(P<0.05);hepaCAM基因在膀胱癌BIU-87细胞不表达,转染后hepaCAM mRNA明显增强(P<0.05);实验组VEGF mRNA表达(0.527±0.031)与未处理组(0.803±0.042)、空载组(0.750±0.040)比较明显下降(P<0.05)。Western blot结果示:实验组BIU-87细胞VEGF蛋白表达(0.057±0.015)与未处理组(0.263±0.032)和空载组(0.280±0.036)比较明显下降(P<0.05)。结论转染野生型hepaCAM基因可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的生长能力,并下调VEGF基因及蛋白的表达,hepaCAM基因可能是影响肿瘤的生长及侵袭转移的重要原因之一。

腺病毒介导的hepaCAM基因对膀胱癌细胞周期的影响

膀胱移行细胞癌是泌尿系恶性肿瘤之一，其生物学特性复杂，易复发。肝细胞黏附分子（hepatocytecelladhesionmolecule，hepaCAM）由Shen课题组于2005年发现，具有抑制肿瘤生长的作用。本课题组的前期研究结果也表明，外源性hepaCAM基因导入肾癌细胞和膀胱癌细胞后，能有效抑制肿瘤的生长。

新基因hepaCAM对膀胱癌细胞体外生物学影响

目的:研究肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响。方法:脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株;Western blot检测蛋白表达。细胞粘附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞粘附力、活动力及增殖力的影响。结果:hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域;相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域。获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞。体外粘附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞粘附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组。MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组。结论:hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间粘附及抑制细胞增殖力从而影响肿瘤细胞的浸润和转移。

HepaCAM对肾癌786-0细胞Caspase-3活性和表达的影响

探讨肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)在肾癌786-0细胞中不同表达水平对其凋亡及Caspase-3活性和表达的影响。将携带hepaCAM基因的重组质粒瞬时转染786-0细胞,RT-PCR鉴定hepaCAM基因在786-0中的表达;FCM检测细胞凋亡情况;分光光度计结合Western印迹法检测hepaCAM表达与Caspase-3活性及蛋白水平表达的关系。结果显示,上调hepaCAM基因表达能诱导肾癌786-0细胞凋亡,能上调Caspase-3活性及其蛋白水平且与hepaCAM表达水平呈正相关。上述结果表达,hepaCAM可能通过调节Caspase-3凋亡通路诱导肾癌786-0细胞凋亡。

肾癌中hepaCAM外显子2异常甲基化与hepCAM表达的关系

探讨肾癌中抑癌基因肝细胞粘附分子hepaCAM表达与hepaCAM外显子2 CpG岛甲基化状态的关系。采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR、RT-PCR法检测肾癌细胞株(786-0,RC-2)和43例肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAM外显子2的甲基化状态及hepaCAM mRNA的表达。786-0细胞hepaCAM表达水平低于RC-2细胞(P<0.05);786-0和RC-2细胞,前者存在hepaCAM外显子2甲基化,后者未检测到。肾癌组织中hepaCAM mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001);肾癌组织hepaCAM外显子2的甲基化率为34.9%,癌旁组织2.33%,两者差异有显著意义(P<0.001),但在临床病理参数中的差异无统计学意义(P>0.05)。hepaCAM外显子2甲基化的肾癌组织其mRNA的表达水平显著低于未甲基化的肾癌组织(P<0.05)。因此,肾癌hepaCAM外显子2的甲基化可能是导致hepaCAM表达下降或缺失的原因之一,hepaCAM甲基化的研究为探讨肾癌发生发展的机制提供了新的理论依据。

5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡

目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2)mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果:hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为(45.21±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(15.60±0.02)%和azac组(26.30±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.008);FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为(16.05±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(3.90±0.02)%和azac组(9.67±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.043);RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达(P=0.004,P=0.000),下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P=0.026,P=0.030);Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达(P=0.003,P=0.003),同时下调p-AKT(P=0.001,P=0.005)和bcl-2(P=0.000,P=0.002)蛋白的表达,差异有统计学意义。结论:azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。

一例HEPACAM基因变异致伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病2B型患儿的分析

目的探讨1例伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病(megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cyst,MLC)2B型患儿及其家系的临床特征与HEPACAM基因的变异情况。方法回顾分析1例HEPACAM基因变异导致的MLC2B型患儿的临床、影像资料及患儿母亲、舅舅的生长发育情况并复习相关文献。结果患儿,女,1岁7个月,因抽搐就诊,智力运动发育落后,头围异常增大,头颅磁共振成像提示两侧大脑半球脑白质呈广泛性长T1长T2信号、右前颞囊肿、脑回增宽、脑沟浅平。基因测序提示HEPACAM基因第3外显子存在c.437C>T错义变异,其母携带相同变异,父亲未发现异常。母亲及舅舅幼时有头围增大史,成年后母亲头围正常、舅舅头围仍大于正常成年人。结论该患儿携带HEPACAM基因一个杂合变异,诊断为MLC2B型。上述变异来源于母亲,MLC2B可能存在外显不全。

HepaCAM联合藏红花素抑制前列腺癌细胞PC3迁移活性的研究

为研究肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepa CAM）联合藏红花素（crocin）对前列腺癌（prostate cancer,PCa）细胞PC3上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭转移的影响,采用细胞免疫荧光观察迁移相关蛋白的表达情况;划痕实验检测细胞侵袭转移能力;Transwell实验检测细胞体外迁移能力;实时荧光定量PCR、Western blotting检测EMT相关分子及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）和MMP-9的表达变化。实验显示,hepaCAM过表达腺病毒与藏红花素均可有效抑制PC3细胞的侵袭转移（p〈0.01）,两者联用比单独应用效果更加明显（p〈0.01）。Q-PCR显示,过表达hepaCAM联合藏红花素组与单独处理组相比,MMP-2、MMP-9及波形蛋白（vimentin,VIM）mRNA表达水平下调更显著（p〈0.01）;E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-CA）m RNA水平上调更加明显（p〈0.01）。Western blotting显示,与过表达hepa CAM组或藏红花素组相比,两者联用组MMP-2、MMP-9、VIM蛋白表达量明显降低（p〈0.01）,同时E-CA蛋白水平上调更加明显（p〈0.01）。因此得出以下结论,hepaCAM过表达腺病毒联合藏红花素可显著抑制PC3细胞的侵袭转移,作用机制或与EMT和MMPs的表达有关。

HepaCAM通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞T24的增殖

该研究探讨了肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,Hepa CAM)对膀胱癌细胞T24增殖的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。T24细胞做空白处理、空载腺病毒(Ad-GFP)处理和Hepa CAM过表达腺病毒(Ad-GFP-Hepa CAM)处理,CCK-8法检测Hepa CAM对细胞增殖的影响,q RT-PCR和Western blot法检测Hepa CAM对β-catenin、c-Myc和cyclin D1的m RNA和蛋白表达水平的影响。采用Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl处理T24细胞,MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测GSK3β(try216)磷酸化水平及β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白水平,克隆形成试验检测细胞的克隆形成能力。结果显示,过表达Hepa CAM后,能够抑制T24细胞的生长,下调β-catenin、c-Myc及cyclin D1的m RNA和蛋白的表达水平。5,10,20μmol/L的Li Cl作用细胞2 h后,均可促进T24细胞的增殖。10μmol/L的Li Cl作用2 h后能够降低GSK3β的磷酸化水平,促进Wnt信号通路的活化。10μmol/L的Li Cl与Ad-GFP-Hepa CAM联合处理细胞后,能够逆转Hepa CAM对β-catenin、c-Myc及cyclin D1蛋白水平和细胞增殖的抑制作用。该研究表明,Hepa CAM可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞T24的增殖。

过表达HepaCAM联合谷氨酰胺剥夺抑制前列腺癌细胞的增殖

该研究旨在探讨过表达肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,HepaCAM)联合谷氨酰胺(glutamine,Gln)剥夺对前列腺癌(prostae cancer,PCa)细胞谷氨酰胺代谢及增殖的影响。采用Ad-HepaCAM腺病毒感染前列腺癌细胞株PC3、LNCaP。克隆形成实验及MTT实验检测细胞的克隆形成率及增殖活性。qRT-PCR、Western blot分别检测PC3、LNCaP细胞中谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)、溶质载体家族I成员V(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)、MYC癌基因家族(可编码c-MYC蛋白分子)以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况。结果显示,单独过表达HepaCAM与剥夺Gln均可抑制PC3、LNCaP细胞的增殖能力,两者联用效果更佳。qRT-PCR和Western blot显示,与对照组(+Gln组)相比,剥夺谷氨酰胺组(-Gln组)细胞中的GLS、SLC1A5、MYC表达呈应激抵抗式上调,过表达HepaCAM后上述基因表达重新受到抑制。该实验证明,过表达HepaCAM与Gln剥夺联用可更显著地抑制前列腺癌的增殖能力,同时,过表达HepaCAM可在一定程度上抑制前列腺癌细胞的谷氨酰胺代谢重编程。

帕比司他逆转前列腺癌细胞hepaCAM基因表达机制研究

目的:研究帕比司他(Panobinostat)逆转抑癌基因肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepa CAM)表达,协同hepa CAM抑制前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞生长。方法:不同浓度帕比司他作用于体外培养的PC3细胞,首先采用MTT法检测帕比司他对细胞增殖的影响,RT-PCR和Western blot法检测hepa CAM、组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)以及乙酰化组蛋白H3赖氨酸9(Ac-H3K9)的表达变化。接着用不同因素处理细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期改变,RT-PCR和Western blot法检测细胞周期调节因子cyclin D1和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的基因表达。结果:帕比司他抑制PC3细胞生长与作用浓度增加和作用时间呈正相关,hepa CAM mRNA、蛋白以及细胞核中Ac-H3K9表达随帕比司他浓度升高而增高,HDAC1、HDAC3、HDAC4 mRNA和蛋白的表达随浓度升高而降低;单独过表达hepa CAM腺病毒和单独使用帕比司他组PC3细胞生长明显受到抑制且随作用时间延长抑制率增加,两者联用更为明显,差异有统计学意义(P<0.05);与单独hepa CAM腺病毒组和帕比司他组相比,两者联用S期细胞比例明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),且可进一步下调cyclin D1、PCNA mRNA和蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:帕比司他可通过抑制HDACs活性,加强PCa PC3细胞组蛋白H3 N-端的赖氨酸残基乙酰化,逆转hepa CAM表达;hepa CAM腺病毒和帕比司他联用可通过阻滞细胞周期于S期协同抑制PC3细胞生长,作用机制可能与下调cyclin D1和PCNA的表达有关。这对揭示抑癌基因hepa CAM在肿瘤缺失的原因及为将帕比司他应用于临床治疗肿瘤提供了科学支持。

γ-干扰素对膀胱癌T24细胞增殖影响及分子机制研究

探讨γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)对膀胱癌细胞株T24增殖影响及其分子机制.5种不同终浓度(125、250、500、1 000、2 000 U/mL)重组人细胞因子IFN-γ处理人膀胱癌T24细胞,分别在24、48、72 h采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法检测T24增殖抑制率;以作用浓度为500 U/mL IFN-γ作用T24细胞,并设为实验组,未经IFN-γ处理设为对照组.流式细胞仪检测T24细胞周期各阶段变化;RT-PCR检测hepaCAM(hepatocyte cell adhesion molecule)基因表达;Western blot检测p21WAF1蛋白表达.结果表明:IFN-γ抑制T24增殖呈时间剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,实验组经流式细胞仪检测提示细胞G0/G1期比例增高(n=5,P<0.01);RT-PCR结果提示hepaCAM基因表达水平升高(P<0.05);Western blot结果提示p21WAF1蛋白表达水平增高,有统计学意义(P<0.01).新基因hepaCAM在IFN-γ对膀胱癌细胞株T24增殖调节中可能起作用,并可能通过上调p21WAF1蛋白表达阻滞T24细胞于G0/G1期,而抑制T24增殖.

肝细胞黏附分子诱导肾癌786-0细胞系凋亡

目的探讨肝细胞黏附分子(HEPACAM)基因转染肾癌细胞对其凋亡的影响。方法将携带HEPACAM基因的重组质粒转染786-0细胞,RT-PCR鉴定HEPACAM基因在786-0中的表达;Hoechst染色结合荧光显微镜观察细胞形态改变;FCM检测细胞周期及细胞凋亡情况;Western印迹法检测BAX、BCL-2、Cyclin D1蛋白表达变化。结果上调HEPACAM基因表达可诱导786-0细胞凋亡,阻止细胞周期于G0/G1期,并可上调BAX及下调BCL-2和Cyclin D1蛋白水平表达。结论外源导入HEPACAM基因可诱导肾癌细胞凋亡并阻止细胞周期于G0/G1期。