hepaCAM基因对膀胱癌细胞体外生物学的影响

目的研究野生型hepaCAM基因对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响。方法脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株,Western blot检测蛋白表达。细胞黏附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响。结果hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域,相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域。获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞。体外黏附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞黏附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组(P<0.01)。MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组(P<0.01)。结论hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间黏附及抑制细胞增殖力,从而对抗肿瘤细胞的浸润和转移。

hepaCAM基因缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响

目的:探讨hepaCAM基因细胞外结构缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响。方法:采用脂质体法将hepaCAM缺失突变体转染T24细胞;激光共聚焦显微镜检测突变体蛋白细胞定位;Western印迹法检测蛋白的表达;体外黏附、解离实验及伤口愈合、基质胶侵袭实验研究突变体对T24细胞黏附、活动力的影响;MTT法检测对细胞增殖的改变。结果:突变体蛋白在单个细胞中的分布与野生型hepaCAM蛋白相近,定位于细胞核周边区域,但细胞相互连接后,与野生型hepaCAM蛋白定位不同,突变体蛋白呈现非特异性分布。获得稳定表达突变体蛋白的T24细胞,在细胞黏附、活动力方面明显低于表达野生型hepaCAM蛋白组,细胞增殖与表达野生型hepaCAM蛋白组相比明显增强。结论:缺失细胞外区域对hepaCAM蛋白细胞定位有重要影响,对抑制T24细胞增殖、增强细胞黏附及活动力无明显作用。细胞外区域对hepaCAM基因发挥正常作用是必须的。