低分子质量肝素锂的制备及其体外抗凝血性能评价

以肝素钠粗品为原料,采用超声盐解-阳离子交换转锂-二氧化氯氧化-醇沉-干燥的新型离子交换工艺制备低分子质量肝素锂。采用Box-Behnlen实验对制备工艺条件进行优化。通过FT-IR、UV-Vis、1HNMR、XPS、比旋光度等对产品进行组成、结构和性能表征,考察了其活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)体外抗凝3项指标。结果表明,盐解辅以超声、转锂时锂型树脂交换、ClO_(2)氧化脱色为该工艺改良的3个关键环节。最佳工艺条件下制得肝素锂效价为173.3 IU/mg,锂质量分数为3.6%,比旋光度为+51.422°。自制肝素锂与肝素钠标准品具有高度相似的结构特征,保留了肝素中—OSO_(3)^(-)、—COO^(-)、OH^(-)等活性基团。自制肝素锂展现出较强的体外抗凝血活性,主要通过内源凝性途径和共同途径作用于凝血过程,可作为医用采血器的预置抗凝剂。

不同样本类型对于Hcy检验结果一致性的影响

目的探讨不同样本类型同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)检验结果是否具有可比性和一致性。方法选取本院2021年12月至2022年2月期间检测Hcy的201例患者为研究组,选取同期的50例健康体检者为对照组,采集每名受试者同一时间的新鲜血清、肝素锂血浆、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K_(2))血浆及枸橼酸钠血浆样本。比较每名患者同一时间不同类型血液样本Hcy检验结果是否存在显著性差异,及与健康体检者的差异,并判断其一致性。结果与对照组相比,各组患者的血清、血浆中的Hcy检验结果均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。EDTA-K_(2)血浆样本的Hcy水平高于血清、肝素锂血浆和枸橼酸钠血浆样本的Hcy水平,差异有统计学意义(P<0.05);肝素锂血浆和枸橼酸钠血浆样本的Hcy水平与血清样本的Hcy水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血清、肝素锂血浆、EDTA-K_(2)血浆及枸橼酸钠血浆样本的Hcy检验结果均在可接受误差范围内,不同样本类型的Hcy检测结果比对分析一致性良好。结论血清样本、不同抗凝剂血浆样本同一时间检验均可得到检测一致性结果,在确保Hcy准确性的前提下,可减少患者采血量,降低检验工作量。

肝素锂抗凝血浆与血清样本中34项生化检测结果的偏倚评估

目的观察肝素锂对常规生化检测结果的影响,探讨肝素锂抗凝血浆能否用于生化检测以及能否用血清参考范围解释血浆检测结果。方法按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的《用患者样本进行方法比对及偏倚评估:批准指南》(EP9-A方案),随机抽取40例患者和健康体检者静脉血样本,分别注入红色真空采集管和肝素锂抗凝管中,于同一生化仪中对34项生化项目进行检测,并对结果进行统计学分析。结果34项测定指标中除脂蛋白(a)[Lp(a)]、前白蛋白(PA)、5′-核苷酸酶(5′-NT)、腺苷脱氨酶(ADA)外,其余各项目的相关系数(r)均≥0.975。34项指标中血浆与血清葡萄糖(Glu)、钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、磷(P)的平均偏倚>1/2美国临床医学检验部门修正法规(CLIA′88)允许误差。血浆Lp(a)、PA、5′-NT、ADA检测结果与其血清检测结果相比,差异有统计学意义(P<0.05),平均偏倚均较大,分别为-11.9%、27.68%、-37.03%、29.31%;其余25项指标血浆测定值与血清测定值之间差异均<1/2 CLIA′88允许误差。结论大部分常规生化检验项目可用肝素锂抗凝血浆代替血清,但Glu、K、Na、Cl、P应建立血浆参考范围,其余项目可用血清参考范围解释血浆检测结果。Lp(a)、PA、5′-NT、ADA项目不宜用肝素锂抗凝血浆作为样本进行测定。

肝素锂抗凝血浆与血清54项生化检验项目结果的对比分析

目的探讨肝素锂抗凝血浆代替血清在生化检验中的可行性。方法对比测定了100例肝素锂抗凝血浆和血清标本的54项生化指标。结果丙氨酸转移酶(ALT)等45项生化指标抗凝血浆与血清测定结果差异无统计学意义(P>0.05);总蛋白(TP)、钾离子(K+)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖(GLU)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、脂肪酶(LPS)结果比较,差异有统计学意义(P<0.05),但结果相关性好(r值最大0.998,最小0.887);转铁蛋白(TRF)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、亮氨酸转肽酶(LAP)3项比较,差异有统计学意义(P<0.01),无相关性(r<0.6)。结论肝素锂具有抗凝能力强,不影响细胞体积,不溶血等优点,除AFU、TRF、LAP不宜检测外,可用于常规生化检验,特别适合用于门诊、急诊和凝血功能异常的患者。

肝素抗凝血浆用于常规生化项目检测的可行性研究

目的探讨肝素锂抗凝的血浆能否代替血清用于常规生化项目的测定。方法选取在该院检测常规生化检验项目的40例患者,每位患者同时采集血清标本与肝素锂抗凝血浆标本各一份,分别使用同一台全自动生化分析仪测定常规生化项目39项。可接受标准(须同时符合以下条件):(1)相关系数(r)≥0.975;(2)回归方程的斜率在0.95~1.05;(3)对同一指标,90%以上患者血浆相对血清结果的偏倚≤1/2允许总误差(TEa)。结果39项生化检测指标中,符合判定标准的有总胆红素(TBIL)、清蛋白(ALB)、尿酸(UA)、载脂蛋白B100(APOB100)、肌酸激酶(CK)、同型半胱氨酸(HCY)、血糖(GLU)、总胆汁酸(TBA)、前清蛋白(PA)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A1(APOA1)、脂蛋白(LPa)和碱性磷酸酶(ALP)共13项。结论大多数临床常规生化项目血浆与血清结果不符,在考虑使用血浆替代血清时应特别审慎。

肝素钠、肝素锂抗凝血浆代替血清生化检验的比较研究

目的探讨肝素钠、肝素锂抗凝血浆代替血清用于临床生化检验的可行性。方法随机抽取40例患者和健康体检者静脉血标本,将每例标本3ml分别注入普通试管及肝素钠、肝素锂抗凝管中,于同一生化仪上对常规生化项目进行检测,并对结果进行统计学分析。结果Cr、ALT、AST、GGT、TBil、ALB、TBA、P、CHO、CK-MB、AMS、TG、Glu、CL等项目肝素锂抗凝血浆与血清比较,差异无统计学意义(P>0.05);而BUN、UA、ALP、DBil、TP、Mg、HDL-C、LDL、LDH、CK、K、Na、TCa等项目肝素锂抗凝血浆与血清2组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而BUN、UA、ALP、TBil、DBil、Mg、CHO、LDL、LDH、CK、TG、K、Na、TCa等项目肝素钠抗凝血浆与血清2组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。BUN、Cr、UA、ALT、AST、GGT、ALP、TBil、DBil、TP、ALB、TBA、Mg、CHO、HDL-C、LDL、LDH、CK、CK-MB、AMS、TG、Glu、Cl、Na等24个项目肝素锂与肝素钠抗凝血浆与血清相关性良好(r>0.800),而P、K、TCa3个项目肝素锂与肝素钠抗凝血浆与血清相关性较差(r<0.760)。结论大部分常规临床生化检验项目可用肝素锂抗凝血浆代替血清作为标本,但需建立回归方程或血浆参考体系,少数项目不宜用肝素类抗凝血浆。

标本类型和离心时间对临床常用心肌损伤标志物检测结果的影响

目的探讨肝素锂抗凝血浆、乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血浆、血清等3类标本和缩短离心时间对肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(Myo)等心肌损伤标志物检测结果的影响。方法使用VITROS 5600生化免疫分析仪检测28例3类标本的心肌损伤标志物,并进一步行cTnI的EDTA-K2干扰试验;将21例肝素锂抗凝标本在4 000r/min分别离心2和10min后检测心肌损伤标志物。采用SigmaPlot 11.0统计软件进行分析。结果 EDTA-K2抗凝组cTnI比肝素锂抗凝组低约15%,血清组CK-MB比肝素锂抗凝组高出大概7%,差异均有统计学意义(P<0.05)。干扰试验证实EDTA-K2对检测cTnI存在负干扰。将肝素锂抗凝标本离心2min与10min的心肌损伤标志物比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝素锂抗凝血浆、EDTA-K2抗凝血浆和血清的心肌损伤标志物检测结果间存在不一致性;缩短离心时间既不影响检测结果,又能缩短标本周转时间,使临床和患者获益。

肝素锂抗凝采血对FT_3、FT_4及TSH测定的影响

目的探讨肝素锂抗凝标本能否取代或与普通干燥管标本通用。方法随机取受试者32例,一次性肘静脉穿刺采血6 ml,分装于肝素锂真空管(肝素管)和普通干燥真空管(干管)各3 ml,化学发光免疫分析常规测定各自的TSH、FT3及FT4。结果32例受试者2种试管采血测定的TSH及FT4值无明显差异(TSH:t=1.846,P=0.075;FT4:t= 1.649,P=0.110)且高度相关(TSH:r=1.000,P=0.000;FT4:r=0.999,P=0.000),临床诊断完全一致。FT3的结果则显著不同,肝素管测定的结果显著低于干管(t=-6.253,P=0.000),绝对值相差最大为16.44 pmol/L,最小为0.76 pmol/L;相对相差最大为57.5%,最小为15.6%;但2组FT3测定值具有高度相关性(r=0.999,P=0.000 0),若通过回归处理建立肝素管自己的正常值范围,则它们的诊断结果完全一致。结论肝素管与干管采血测定TSH、FT4,结果完全一致,可以通用;而肝素管与干管测定的FT3显著不同,不能通用,但两组数值高度相关,可以通过建立各自的正常值或回归方程进行数据处理后互相替代。

抗凝剂对血小板及其参数检测结果的影响分析

目的 探讨和分析不同抗凝剂对检测血小板及其参数的影响。方法 用三种常用抗凝剂EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素铿的抗凝全血,于采血后2小时内在室温(约22℃)下,采用CELL-DYN 1700全自动血细胞分析仪进行平行测定血小板及其参数。结果 在测定的血小板四项参数中以EDTA-K2抗凝血的测定值为标准,测得其它两种抗凝剂对血小板均有不同程度的影响。结论 EDTA-K2是一种良好的抗凝剂,在血小板及其参数分析中可保持良好的稳定性,而其它两种抗凝剂对血小板则有不同程度地影响,不适合用于血小板分析。

肝素锂对电化学发光法测定甲状腺激素影响的研究

目的探讨使用肝素锂抗凝采血管对电化学发光法检测甲状腺激素及相关抗体的影响。方法随机选取60例华西医院门诊患者,同时采用美国BD公司无添加剂的红头管和肝素锂抗凝的绿头管收集患者血液标本,离心后用罗氏Cobas e601型电化学发光免疫分析仪测定甲状腺激素及其相关抗体并比较两种样本间检测结果的差异,检测项目包括:游离三碘甲酰原氨酸(FT_3)、游离甲状腺素(FT_4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白(TG)、三碘甲酰原氨酸(T_3)、甲状腺素(T_4)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(A-TG)和抗过氧化物酶抗体(A-TPO)。结果血清样本和肝素锂抗凝血浆样本中FT_3、FT_4、T_3、T_4和TSH检测结果差异无统计学意义(P> 0. 05),而肝素锂抗凝血浆样本中A-TG和TRAb检测浓度明显高于血清样本,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论肝素锂可干扰A-TG和TRAb测定,检测该两种抗体应使用血清样本。

肝素锂抗凝血浆与血清样品28项生化检验项目的可比性分析

目的:探讨肝素锂抗凝血浆代替血清标本进行生化检验的可行性。方法:对比测定了30例肝素锂抗凝血浆和血清标本的28项生化检验指标。结果:28项生化检验结果经显著性t检验,24项血清与血浆结果差异无显著性,P>0.05,TBIL、TP、LDH结果差异有显著性,P<0.05。CK-MB结果差异有显著性,P<0.001。结果:经相关性检验,27项检测结果相关,r值最大0.9984,最小0.8587,CK-MB检测结果不相关。结论:肝素锂具有抗凝能力强,不影响细胞体积,不溶血,分离血浆速度快,减少放置误差等优点,除了CK-MB不宜检测外,更适合于生化项目的速检。

肝素酶和氯化锂对抗肝素的RT-PCR抑制作用的试验条件优化

目的探讨肝素酶和氯化锂在对抗肝素抑制逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)作用的试验条件优化及它们各自的优缺点。方法从随机采集20份人临床肝素抗凝全血中提取总RNA并经电泳鉴定后,每份RNA分为未处理组、肝素酶Ⅰ在0.4U、0.5U即时,30min,60min几种条件下的处理组和氯化锂在-20℃下10min、60min,过夜几种条件下的处理组,再逆转录合成cDNA,分别行看家基因β-actin的PCR反应,经1%琼脂糖凝胶电泳观察和比较获得的目的片段。结果从肝素抗凝全血分别抽提的总RNA,经电泳鉴定完整性好,可以进行逆转录-聚合酶联反应。未经处理的RNA经看家基因β-actin的RT-PCR反应后,未能扩增到目的片段;在肝素酶Ⅰ处理组中,仅肝素酶Ⅰ0.5U,并作用60min条件下能扩增出β-actin片段;在氯化锂处理组中,三种时间段作用下,均能扩增出β-actin片段,并且过夜条件下扩增获得的目的片段的量最多;经优化的试验条件的肝素酶Ⅰ和氯化锂作用RNA后,扩增得到的β-actin片段的量基本一致。结论获得肝素酶Ⅰ和氯化锂处理肝素抑制RT-PCR的试验优化条件,并比较了各自的优缺点,为临床相关试验提供一定帮助。

乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症简易纠正方案

目的乙二胺四乙酸(EDTA)依赖性假性血小板减少症标本通过肝素锂、枸橼酸钠及改良方案进行纠正,对血小板测定结果进行评估,建立一个简单、实用、且不延长结果报告时间(TAT)的方法。方法征集EDTA依赖性假性血小板减少症志愿者120例,同时收集肝素锂、枸橼酸钠、EDTA-K3抗凝标本各一份,其中EDTAK3标本采用改良方法处理后再检测,三组检测结果与参考方法的测定结果进行比较。评估差异有无统计学意义。结果肝素锂、枸橼酸钠、改良方案的纠正率分别为80.5%、39.2%、100.0%;与参考方法比较,P值分别0.129、0.013、0.051。TAT分别为(2.03±0.29)、(1.8±0.35)、(0.47±0.19)h。结论肝素锂组的结果与参考方法测定结果相关性最好,可比性最好。其次是改良组和枸橼酸钠组。改良方案对TAT影响最小、不用进行患者的二次采血,并且结果与枸橼酸钠相似,因此该改良方案可以用于临床上对PTCP标本的纠正。

不同抗凝剂对红细胞渗透脆性试验结果的影响

目的了解EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂抗凝血对红细胞渗透脆性试验结果的影响。方法对40份分别用EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂抗凝的血标本进行红细胞渗透脆性试验;剩余血液用0.9%NaCl洗涤3次后配成50%红细胞悬液再进行试验;同时进行不加抗凝剂的对照试验。结果EDTA-K2抗凝血标本及洗涤后的渗透脆性均明显高于对照组,枸橼酸钠、肝素锂抗凝血标本对渗透脆性有一定影响,经洗涤后与对照组没有明显的差别。结论可以用枸橼酸钠或肝素锂抗凝血标本经洗涤后进行红细胞渗透脆性试验,不能用EDTA-K2抗凝的标本。

两种抗凝剂对实验用小型猪血液生理指标的影响

目的比较分析两种抗凝剂对实验用小型猪血液生理指标的影响。方法将22只成年的实验用小型猪,分别用EDTA三钾和肝素锂抗凝采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标。结果使用不同的抗凝剂,同一批样本的血液生理指标中单核细胞绝对值(MON)有差异(P<0.05),平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板比积(PLT)、血小板平均体积(PCT)、血小板平均体积(MPV)、淋巴细胞绝对值(LYM)、嗜酸性粒细胞绝对值(EOS)、嗜碱性粒细胞绝对值(BAS)、淋巴细胞绝对值(LYM)%、单核细胞绝对值(MON)%、嗜酸性粒细胞百分率(EOS)%和嗜碱性粒细胞百分率(BAS)%这12个指标有显著差异(P<0.01);EDTA三钾抗凝的血液生理指标中血小板比积(PLT)、中性粒细胞绝对值(NEUT)和中性粒细胞百分率(NEUT)%有性别差异(P<0.05),MON、EOS、MON%和EOS%性别差异有显著性(P<0.01);肝素锂抗凝的血液生理指标中血小板体积分布宽度(PDW)、中性粒细胞绝对值(NEUT)和LYM%有性别差异(P<0.05),MON、EOS、MON%、NEUT%和EOS%性别差异有显著性(P<0.01)。结论不同的抗凝剂对实验用小型猪血小板和白细胞分类计数参数影响显著,进行相关实验时应妥善选择血液抗凝方式。

抗凝剂对血小板计数结果的影响分析

目的分析不同抗凝剂对血小板计数结果的影响。方法选择5例乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝全血标本血细胞分析仪计数血小板结果重度减低的患者,采集EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂、氟化钠抗凝静脉血标本和手指末梢血标本,分别采用血细胞分析仪(仪器法)和显微镜计数法(手工法)计数血小板,并同时制备涂片标本,经瑞氏-姬姆萨染液染色后显微镜镜检。结果 5例患者EDTA-K2、枸橼酸钠、肝素锂及氟化钠抗凝静脉血标本仪器法、手工法血小板计数结果均明显低于手指末梢血标本,血涂片标本镜检均可见血小板大片聚集;手指末梢血标本仪器法、手工法血小板计数结果均正常,血涂片标本镜检可见血小板分布正常,无聚集现象。结论多种抗凝剂均有可能诱导血小板发生聚集,从而引起血小板假性减少。发生抗凝剂依赖性血小板假性减少时,应采用不加抗凝剂的手指末梢血标本进行血小板计数,从而获得准确结果。

乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症检测方法探讨

目的探讨乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)几种检测方法的可靠性。方法对5例EDTA-PTCP患者和20位健康体检者同时用经乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、枸橼酸钠和肝素锂三种抗凝管及末梢血稀释的方式采集标本,分别用血液分析仪在三种抗凝管采集标本后5 min、30 min、60 min测定血小板计数,采集末梢血用显微镜手工计数血小板,对所有标本涂片染色观察血小板形态。结果 5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30 min和60 min血小板计数(PLT)比5 min时测定结果显著偏低,差异具有统计学意义(P<0.05)。DTA-PTCP患者EDTA-K2采血后30 min和60 min抗凝血涂片染色均见明显的血小板聚集现象,而健康体检者EDTA-K2抗凝血涂片及未抗凝血直接涂片染色见血小板散在分布。在采血30 min后测定,EDTA-K2采血管PLT明显低于枸橼酸钠、肝素锂及手工计数结果,差异均具有统计学意义(P<0.05);20例健康体检者在采血后5 min、30 min、60 min时EDTA-K2采血管PLT与枸橼酸钠、肝素锂、手工计数的结果比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对疑似EDTA-PTCP患者可以用EDTA-K2采血管重新采血立即测定,或不使用抗凝剂直接抽血立即测定,也可以使用枸橼酸钠或肝素锂抗凝管初步确认,同时涂片染色并手工计数得到正确的结果。

肝素管取血浆与干燥管取血清心肌酶谱检测结果的比较研究

①目的探讨肝素锂抗凝标本取代普通干燥管标本检测心肌酶谱的可行性。②方法随机取受试者60例,均一次性肘静脉穿刺取血6mL,分别装于肝素锂真空管(肝素管)和普通干燥真空管(干管)各3mL,常规测定各自的心肌酶谱。③结果60例受试者两种试管采血测定的心肌酶谱结果统计,均无明显差异(P>0.05),且高度相关。④结论肝素管与干管采血测定心肌酶谱结果完全一致,肝素管可用于急诊心肌酶谱测定,有利于缩短报告时间,更好地为临床服务。

肝素锂血浆与血清样本进行甲状腺功能指标测定的对比分析

目的探讨肝素锂血浆行甲状腺功能指标测定的可行性。方法随机选取该院门诊患者和健康体检者43例。按常规方法分别采血至2个真空玻璃试管中各3 m L,其中一管不抗凝,另外一管为肝素锂抗凝。取血后充分混匀即刻离心分离血浆,不抗凝血清室温放置1 h后血清析出离心分离血清供检。于同一Uni Cel Dx I800 Access化学发光仪进行指标测定。结果肝素锂血浆与血清的甲状腺功能测定结果经比较,T3、FT3、FT4、TSH肝素锂血浆与血清结果差异无统计学意义(P>0.05),肝素锂血浆的T4与血清结果差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析显示甲状腺功能测定结果肝素锂血浆与血清均具有高度正相关关系(r>0.700)。结论肝素锂血浆适合甲状腺功能指标测定,但肝素锂血浆的T4测定结果需建立回归方程将血浆值换算成血清值。

肝素钠、肝素锂抗凝血浆代替血清用于临床生化检验的可行性分析

目的:探讨肝素钠、肝素锂抗凝血浆代替血清用于临床生化检验的可行性。方法:随机抽取200例接受生化检验的患者及健康人,抽取受检者的静脉血,将其分别置于含肝素钠、肝素锂抗凝剂的采血管和普通采血管中。结果:肝素锂、肝素钠抗凝血浆与普通血清在各项生化指标检验结果的比较上,差异均有统计学意义(P<0.05)。抗凝血浆与普通血清各生化指标的检测结果均有良好的相关性(r>0.900,除Na^+、K^+和Ca^(2+)外)。结论:实施临床生化检验的过程中,可通过肝素钠、肝素锂抗凝血浆对常规血清进行替代并行相关指标检测,但在实践过程中应先建立一套血浆参考体系。