EFFECTS OF MUTATIONS IN THE POLYMERASE GENE OF HEPATITIS B VIRUS GENOME ON LAMIVUDINETHERAPY

Objective To explore the offects of mutations in tyrosine-methionine-aspartic acid-aspartic acid (YMDD) motif of the polymerase in the hepatitis B virus (HBV) genome on lamivudine antiviral therapy. Methods Partial HBV DNA segment containing the YMDD motif in the P gene wes obtained through amplifi- cation by polymerase chain reaction (PCR )from 19 chronic hepatitis B patients with serum HBV DNA positive at the 48th week treatment with lamivudine and subjected to automatic sequencing. Influences of vartants with YMDD mutations on lamivudine therapy were seen by observing the dynamic changes of serum HBV DNA and ALT levels. Results Serum HBV DNA breakthrough was found in 3 out of 10 individuals with detection of the YMDD mutations at the 48th week and in 5 at the 52th week, 2 of the 5 patients accompanied by serum ALT re-elevation, whereas of 9 subjects without YMDD mutations, 2 experenced an HBV DNA breakthrough at the 48th week and 1 of them had a conversion from HBV DNA positive DNA positive to negative at the 52th week. Patients with detectable HBV DNA level had a fluctuating level of serum ALT all time during the treatment. Conclusion Detection of mutations in the YMDD motif of polymerase gene in HBV genome during the lamivudine therapy will be helpful to monitoring its therapeutic outcomes.

YMDD自然变异毒株流行病学调查

目的了解YMDD自然变异的发生情况及影响YMDD自然变异的因素。方法依托国家食品药品监督管理局注册药物临床试验“阿德福韦酯片治疗成人慢性乙型肝炎的多中心、随机、双盲、对照临床研究(Ⅲ期)”开展。采用乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药荧光PCR检测试剂盒及实时荧光PCR基因型分型试剂盒,对该临床研究筛选期183例半年内未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清标本进行检测,并通过Logistic逐步回归对影响YMDD自然变异检出率的可能因素进行多因素分析。结果183例CHB患者中,检出YMDD自然变异毒株者40例(21.86%),其中YVDD阳性36例,YIDD阳性3例,YVDD和YIDD同时阳性者1例;变异毒株占总病毒量50%以上者6例,占25%～50%者9例,占9%～25%者25例。B基因型CHB患者中YMDD自然变异检测阳性的比例高于C基因型(31.67%对17.65%,P=0.0382),患者性别、年龄、HBeAg状态、血清HBVDNA载量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平对YMDD自然变异检出率无显著影响(P>0.05)。结论在CHB患者中存在YMDD自然变异毒株;YMDD自然变异的发生率与患者性别、年龄、HBeAg状态、HBVDNA水平、ALT水平无关。B基因型较C基因型更易出现YMDD自然变异。

拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒YMDD野毒株和变异株的变化

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎 (CHB)患者应用拉米夫定治疗前后 ,YMDD野毒株及变异株的动态变化 ,并分析其临床意义。方法 取 5例CHB患者治疗前与治疗 48周的 10份血清标本 ,先用PCR法扩增包括YMDD基序的乙型肝炎病毒 (HBV )部分核苷酸序列 ,然后进行DNA序列测定 ,同时分别进行克隆 ,每份标本随机挑选 2 0～ 2 4株单克隆 ,用实时荧光PCR法检测YMDD野毒株及其变异株。结果 5例CHB患者治疗前PCR产物直接测序结果未检出YMDD变异 ,治疗 48周时有 4例检出YMDD变异 ,但对每株克隆的分别检测显示 :治疗前YMDD变异株 (YIDD/YVDD)所占比率分别为 0 %、9.5 %、0 %、4.5 %、5 .6%;治疗 48周时所占比率分别为 10 0 %、10 0 %、65 %、10 0 %、0 %。其中 1例患者治疗前检出YIDD变异株 ,而治疗 48周时YVDD变异株则变成优势株。治疗 5 2周时 ,4例YMDD变异患者中 2例HBVDNA和血清丙氨酸转氨酶 (ALT)突破 ,1例患者ALT突破 ,但HBVDNA为阴性。结论 YMDD变异株在拉米夫定治疗前的血清中已存在 ,在服用拉米夫定后 ,由于选择性抑制了野毒株 ,使YMDD变异株由弱势株变成优势株 ,部分患者可导致拉米夫定临床耐药。

拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎疗效及对YMDD变异的影响

目的:观察拉米夫定和苦参素联合治疗慢性乙型肝炎的疗效及对慢性乙型肝炎病毒P基因(YMDD)变异的影响。方法:将60例慢性乙型肝炎病例分为苦参素组、拉米夫定组和联合治疗组3组,每组20例。苦参素组口服苦参素胶囊,拉米夫定组口服拉米夫定,联合治疗组口服苦参素胶囊和拉米夫定,疗程为12个月。治疗结束后,分别检测血清HBeAg、抗-HBe、HBV DNA和基因YMDD变异。结果:在治疗12个月时,联合治疗组HBeAg、抗-HBe转换率及HBV DNA转阴率优于苦参素组和拉米夫定组,YMDD变异率较苦参组和拉米夫定组低,但差异比较无统计学意义(P>0.05)。上述各指标苦参组和拉米夫定组组间比较均无统计学意义(P>0.05)。结论:拉米夫定联合苦参素能在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的疗效并可减少YMDD变异。

乙型肝炎病毒检测YMDD基序变异情况分析

目的调查乙肝患者HBVDNAYMDD基序突变情况，为医院肝病临床治疗前评估、优化治疗方案提供依据。方法收集2012年1月～7月间乙肝患者580份血清标本，进行HBVDNA检测和YMDD基序变异检测，并进行统计学分析。结果580份标本有351份血清中HBVDNA〉1×103 copies／ml，发生YMDD基序突变的血清为43份；不同病毒载量区间YMDD基序变异患者比例之间差异有统计学意义，YMDD基序变异患者分布与病毒载量高低存在负相关关系（卡方检验和Pearson相关性检验P均〈0．05）；高变异病毒载量的患者之一在接受ETV和ADV优化治疗3个月后，病毒栽量降至105copies／ml。结论YMDD基序变异会导致患者对NA类药物的敏感性降低，及时的基因突变检测能够对耐药进行预测，预防耐药发生，为肝病治疗方案的优化提供依据。

实时定量PCR检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变及其与临床指标的相关性

目的采用实时定量PCR检测接受与未接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清中乙肝病毒(HBV)突变情况,并将检测结果与临床指标进行相关性分析。方法采用touch-down PCR反应程序,并结合SYBR Green Ⅰ染料进行实时定量PCR,检测115份乙肝患者血清标本(其中50名患者未服用过拉米夫定,65名患者服用过拉米夫定)。随机选择115份标本中的30份用同样的方法提取血清DNA,进行PCR扩增及测序,并与实时定量PCR检测结果进行比较。将乙肝病毒YMDD突变实时定量PCR检测结果与临床各指标之间进行相关性分析。结果115份血清标本中,75份含有野生型HBV(其中49份来自未接受过拉米夫定治疗的患者),40份含有YMDD突变的HBV(其中1份来自未接受过拉米夫定治疗的患者);180位点的突变检测中,98份标本含有野生型HBV,17份标本含有突变型HBV。随机选取的30份标本测序结果与实时定量PCR检测结果完全一致。乙肝病毒拉米夫定耐药突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间无相关性,而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性,用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180和204位点突变具有相关性。结论实时定量PCR可以高效、准确地检测拉米夫定治疗后乙肝病毒的耐药突变。