甲磺酸阿帕替尼联合经导管动脉化疗栓塞治疗肝细胞肝癌的Ⅱ期临床试验

目的:评价甲磺酸阿帕替尼(简称阿帕替尼)联合经导管动脉化疗栓塞(TACE)治疗进展期肝细胞肝癌(HCC)的安全性与疗效。方法:无手术指征的HCC患者进入此项前瞻性单中心Ⅱ期临床试验,患者口服阿帕替尼500 mg,每日1次;同时联合TACE治疗;进而评价阿帕替尼+TACE联合治疗的安全性与疗效。结果:成功完成联合治疗的患者共有30例。平均年龄:66岁;肝功能Child-Pugh A级患者:80.6%;ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group,美国东部肿瘤协作组)体力评分0级:51.6%,1级:48.4%;肿瘤平均直径:6.5 cm。所有患者共进行60轮次联合治疗。每位患者平均2轮次治疗(1次~5次)。在第一轮次治疗中常见的毒性反应为乏力(97.5%)、血压升高(75.2%)、总胆红素升高(65.3%)和皮肤反应(39.6%)。虽然有患者经历有一个3~4级的药物毒性反应,但大多数的毒性反应是轻微的(1~2级毒性反应85%,3~4级毒性反应15%)。在第二轮次治疗中药物毒性反应减轻。在整个临床试验中,患者因阿帕替尼药物毒性反应有21例次药物治疗中断,18例次药物减量。阿帕替尼+TACE联合治疗的疾病控制率为87.5%(根据实体肿瘤疗效评价标准),客观缓解率为10%。结论:阿帕替尼联合TACE对无手术指征的HCC患者的联合治疗是安全有效的,对阿帕替尼的药物毒性反应可以通过调整药物剂量来控制。初步的临床研究结果令人满意。

转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白Annexin1的功能解析

解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白Annexin1的生物学功能,证实其是否在肝癌转移复发中发挥作用.分别以RT-PCR、蛋白质印迹及细胞免疫化学对差异蛋白Annexin1在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证,然后构建Annexin1反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过对MHCC97H细胞的运动、侵袭、凋亡、生长周期、MMPs分泌、克隆形成等系列检测,观察目的蛋白表达降低对其生物学行为的影响,特别是转移特性的影响.验证结果均证实Annexin1在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达.转染Annexin1反义重组表达质粒后,MHCC97H细胞中Annexin1的表达被成功抑制.依据MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASAnnexin1,MHCC97H/pcDNA3.1(+),MHCC97H的检测排序,转染反义重组质粒后的MHCC97H细胞穿过上室底膜的细胞数(运动实验)分别为:11.13±3.31,18.88±2.03,21.86±3.38;穿过人工基底膜细胞数(侵袭实验)分别是:16.43±2.23,16.40±1.57,16.86±1.52;细胞平均集落形成率(克隆形成实验)分别为:(14.33±0.46)%,(19.35±0.49)%,(20.25±0.35)%;MHCC97H细胞凋亡比例(FCM分析)依次为22.2%,6.44%,6.97%;细胞周期各时相的比例依次为:G0-G1期79.5%/76.34%/80.5%,S期13.26%/14.4%/9.69%,G2-M期7.25%/9.26%/9.81%;细胞培养上清MMP9的定量结果依次为:26.37!g/L,28.00"g/L,31.90#g/L;MMP2定量结果依次为29.46$g/L,26.37%g/L,26.53&g/L.明胶酶谱分析细胞培养上清显示,转染Annexin1反义重组表达质粒的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性与对照比变化不明显.综合上述结果发现,转染Annexin1反义表达质粒MHCC97H细胞运动能力及集落形成率明显降低,凋亡细胞的比例增加,而侵袭潜能,细胞周期时相,细胞分泌MMP2、MMP9的量均变化不明显.提示,差异蛋白Annexin1可能通过影响细胞凋亡和细胞运动在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.

肝细胞癌患者血浆骨桥蛋白表达水平与术后复发及预后的关系

目的:分析肝细胞癌(HCC)患者血浆骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平和术后转移复发及生存预后之间的关系,评价OPN在预测肝癌术后复发及预后中的作用。方法:应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定101例HCC患者的血浆OPN表达水平,统计分析血浆OPN表达水平和临床病理指标以及生存预后的关系。结果:101例HCC患者外周血中均有OPN表达,中位水平为176．90μg·L^(-1)(13．73μg·L^(-1)～780．00μg·L^(-1)),平均水平为(218．94±149．18)μg·L^(-1),血浆OPN水平和肿瘤数目(P=0．002)、分化(Edmondson分级)(P=0．015)以及TNM分期(P=0．016)有关。有术后复发的患者比无复发患者血浆OPN表达明显增高(213．55μg·L^(-1)和153．70μg·L^(-1),P=0．0013)。OPN低表达组患者(≤200μg·L^(-1))的总生存(OS)时间和无瘤生存(DFS)时间均明显高于OPN高表达组(＞200μg·L^(-1))(P=0．0001),OPN低表达组患者的OS和DFS时间分别为774d和571d;而OPN高表达组患者的OS和DFS时间分别为635d和398d。应用COX回归模型进行单因素和多因素分析均表明血浆OPN浓度是影响肝癌患者生存预后的一个独立危险因素。结论:血浆OPN表达水平与肝细胞癌患者术后复发和生存预后密切相关,有望成为临床有用的一个预测指标。

蛋白质组学在肝癌标志物研究中的应用

近年来蛋白质组学被广泛地应用于各种疾病研究,已由原来单一的比较蛋白质组学研究拓展到如今涉及功能蛋白质、蛋白质间相互作用等多方面的研究;有关蛋白质组学在肝癌标志物研究中的应用对于肝癌的诊断有重要的意义。

超声靶向微泡介导PEDF质粒转染小鼠肝癌的实验研究

目的探讨超声靶向微泡介导色素上皮源性因子(PEDF)质粒转染HepG2荷瘤裸鼠的治疗价值。方法建立裸鼠HepG2肝细胞肝癌模型,随机分为5组。Ⅰ组:对照组;Ⅱ:PEDF质粒组;Ⅲ组:PEDF质粒+微泡组;Ⅳ组:微泡+超声辐照组;Ⅴ组:PEDF质粒-微泡+超声辐照组。疗程结束后观察瘤结节的超声造影特征,计算抑瘤率,并检测瘤组织PEDF蛋白表达。应用SPSS软件分析各组间各参数的差异。结果疗程结束后,Ⅴ组瘤结节超声造影增强明显弱于Ⅰ组;Ⅳ组及Ⅴ组抑瘤率明显高于Ⅱ、Ⅲ组;Ⅴ组瘤组织PEDF蛋白表达高于其他各组。结论超声靶向微泡介导PEDF质粒有助于提高质粒转染率,抑制肿瘤血管生成及肿瘤生长,为肝细胞肝癌的治疗提供了一个新的途径。

hsa-miR-106b-5p调控ESR1表达对肝细胞癌患者生存预后的意义

目的利用生物信息学方法,分析hsa-miR-106b-5p调控ESR1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其生存预后意义。方法利用BART和StarBase数据库筛选GSE108724芯片的差异miRNAs及其与HCC患者生存预后的关系;利用TargetScan和MetaScape数据库分析miRNAs的靶基因及其GO和KEGG富集分析,并利用String数据库和Cytoscape软件筛选靶基因中的HUB基因;对HUB基因进行生存预后分析及其与miRNAs的结合位点分析;通过临床数据构建HUB基因在HCC中的风险预测模型,并利用C-index、校准曲线(CC)、决策曲线分析(DCA)以及ROC曲线对预测模型进行评价。结果共得到5个差异miRNAs,仅hsa-miR-106b-5p对HCC患者生存预后有显著意义;hsa-miR-106b-5p的靶基因有644个,其KEGG主要富集在Rap1信号通路、MAPK信号通路和癌症信号通路上;GO功能主要富集在跨膜受体蛋白酪氨酸激酶、Ras GTPase结合和分解代谢调控等上;HUB基因中仅ESR1在HCC中低表达,并对HCC患者的生存预后有显著意义,且ESR1 mRNA 3’UTR直接与hsa-miR-106b-5p结合;Logistic回归分析发现低表达的ESR1是HCC患者生存预后的独立危险因素;且所构建的风险预测模型具有较好的准确性和有效性。结论hsa-miR-106b-5p调控ESR1使其在HCC中低表达,且不利于HCC患者的生存预后,可作为HCC的潜在治疗靶点。

肝细胞癌患者血浆MMP-2表达水平与术后复发及预后的关系

目的回顾性分析肝细胞癌(HCC)患者血浆基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平和术后转移复发及生存预后之间的关系,评价血浆MMP-2在预测肝癌术后复发及预后中的作用。方法应用ELISA法测定HCC病人的血浆MPP-2表达水平,统计分析血浆MMP-2表达水平和术后复发以及生存预后的关系。结果72例HCC患者外周血浆中MMP-2平均水平为(260.18±87.18)ng/ml,MMP-2高表达组患者的1年及2年复发率明显高于低表达组患者(P=0.063,P=0.037),有术后复发的患者比无复发患者血浆MMP-2表达明显增高(P=0.042)。MMP-2低表达组患者(≤260 ng/ml)的总生存(OS)时间和无瘤生存(DFS)时间均明显高于MMP-2高表达组(>260 ng/ml)(P=0.003,P=0.014),MMP-2低表达组病人的OS和DFS时间分别为(754.62±138.08)天和(627.69±230.37)天;而MMP-2高表达组病人的OS和DFS时间分别为(619.69±240.17)天和(465.86±299.48)天。应用COX回归模型进行多因素分析表明,血浆MMP-2浓度是影响肝癌患者生存和无瘤生存的一个独立危险因素(P=0.001,P=0.004)。结论血浆MMP-2表达水平与肝细胞癌患者术后复发和生存预后密切有关,有望成为一个临床有用的预测指标。

实时三维超声造影技术对肝癌术前T分期的诊断效能

目的分析实时三维超声造影技术(RT-3D-CEUS)对肝癌术前T分期的诊断效能。方法回顾性分析在我院实施手术治疗的66例肝癌患者的临床资料,患者均于术前实施超声造影(CEUS)及RT-3D-CEUS检查。以手术病理结果为金标准,分析实施RT-3D-CEUS对肝癌术前T分期的诊断效能。结果 RT-3D-CEUS中血流分级Ⅱ~Ⅲ级患者占比高于CEUS,强化特征为快进快出患者占比高于CEUS(P<0.05)。RT-3D-CEUS对术前肝癌T分期的诊断总符合率高于CEUS(P<0.05)。结论 RT-3D-CEUS能为肝癌术前病理分期的判断提供更丰富的信息,与CEUS比较,其对肝癌术前T分期的诊断符合率。

肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测及其与肝癌组织中凋亡分子、免疫分子的关系

目的:研究肝癌患者血清中肿瘤标志物含量检测及其与肝癌组织中凋亡分子、免疫分子的关系。方法:将本院收治的原发性肝癌患者纳入研究的观察组,同期体检健康者纳入对照组,检测两组血清中的肿瘤标志物含量以及肝癌患者肝脏组织凋亡分子、免疫分子的表达。结果:观察组血清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、高尔基体蛋白73(GP73)、胸苷激酶(TK1)的mRNA含量和蛋白含量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织中Polo样激酶1(Plk1)、Livin、Xiap的mRNA含量和蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肝癌组织中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)以及髓样分化因子88(MyD88)的mRNA含量和蛋白含量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清HMGB1、TK1、DDK1含量与肿瘤组织中Plk1、Livin、Xiap呈负相关,与肿瘤组织中TLR2、TLR4、MyD88呈正相关。结论:肝癌患者血清中HMGB1、TK1、DDK1含量升高,且与肝癌组织中抗凋亡分子低表达、免疫分子高表达存在相关性。

川芎嗪注射液联合化疗对晚期肝癌患者IL-1、IL-4及TGF-β的影响

目的观察研究川芎嗪注射液联合化疗对晚期肝癌患者常见免疫指标的影响。方法选取2013年1月~2015年1月舟山医院肝胆科收诊疗的肝癌晚期患者80例,按随机数字表法分为观察组及对照组各40例,对照组患者仅给予化疗常规治疗,观察组在对照组常规治疗基础上加用川芎嗪注射液治疗,记录并分析治疗前后2组患者白细胞介素-1（interleukin-1,IL-1）、IL-4及转化生长因子-β（transforming growth factor beta,TGF-β）变化。结果治疗前2组患者IL-1、IL-4、TGF-β水平差异无统计学意义,治疗后观察组患者IL-1、IL-4、TGF-β水平显著低于对照组[分别为（41.4±11.8）vs（76.0±12.2）ng/L、（118.5±39.9）vs（223.0±47.3）ng/L、（6.7±3.2）vs（11.7±2.6）ng/m L,均P〈0.05]。结论川芎嗪注射液联合化疗在改善晚期肝癌相关免疫学指标上效果肯定、确切,未明显增加患者副作用。

NEDD8抑制剂MLN4924抑制肝细胞癌恶性表型的研究

目的研究NEDD8抑制剂MLN4924对肝细胞癌增殖、迁移侵袭等恶性表型的影响及其分子机制。方法以人肝癌细胞株Hep3B为研究对象,将细胞分为3组,分别为MLN4924组(使用NEDD8抑制剂MLN4924处理)、阴性对照组(等体积DMSO处理)和空白对照组(不作任何处理)。Western blot方法检测NEDD8蛋白及其介导的neddylation的水平及E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。CCK-8实验检测细胞增殖。Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移侵袭能力。结果与阴性对照组相比,MLN4924组NEDD8蛋白表达量增加,而NEDD8介导的neddylation减少,并且细胞的增殖、迁移侵袭能力均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。与阴性对照组或空白对照组相比,MLN4924组细胞伪足消失,缩小变圆,呈上皮细胞形态,同时E-cadherin蛋白表达明显升高,N-cadherin蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论MLN4924通过抑制NEDD8介导的neddylation从而抑制肝癌细胞增殖、迁移侵袭等恶性表型,同时抑制EMT发生。

残癌危险因素对肝癌切除术后肝动脉栓塞化疗效果的影响

目的 探讨术后辅助性肝动脉栓塞化疗对残癌低危和残癌高危患者预后的不同影响。方法 进入研究的病例分为干预组 (辅助性动脉栓塞化疗组 )和对照组 (未行辅助性动脉栓塞化疗 ) ,根据残癌的高危因素将肝癌切除术的患者分为残癌高危者和残癌低危者 ,采用病例对照实验设计 ,以单因素统计方法和Cox模型 ,分析研究术后辅助性肝动脉栓塞化疗对肝癌切除术患者预后的影响 ,以及残癌高危因素对辅助性动脉栓塞化疗作用的影响。结果 对于残癌低危患者 ,干预组和对照组术后 1,2 ,3,4年生存率分别为 97.2 %、78.0 %、6 6 .5 %、6 6 .5 %和 91.2 %、81.4 %、70 .3%、5 4 .4 % ,生存率差异无显著性 (P =0 .76 6 7) ;而对于残癌高危患者 ,干预组和对照组术后 1,2 ,3,4年生存率分别为89 .5 %、73.4 %、5 9.2 %、5 3.8%和 70 .5 %、6 1.9%、4 6 .8%、4 6 .8% ,生存率差异有显著性 (P =0 .0 0 2 9)。Cox比例风险模型分析结果显示 ,辅助性动脉栓塞化疗对切除术后肝癌患者预后的影响 ,决定于患者有无残癌的危险因素 ,辅助性动脉栓塞化疗不是影响患者预后的独立因素。结论 术后给予辅助性肝动脉栓塞化疗 ,可延长有残癌高危因素患者的生存期 ,而对于无残癌危险因素的患者 ,术后辅助性肝动脉栓塞化疗不能延长生存期。

转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析

目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用。方法用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响。结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达。转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],16.4±1.6[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],16.9±1.5(MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4],18.9±2.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、28.0[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、31.9ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H/pcDNA3.1(+)ASS100A4]、26.4[MHCC97H/pcDNA3.1(+)]、26.5ng/ml(MHCC97H)。明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组。结论pcDNA3.1(+)ASS100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低。细胞MMP9分泌量也显著降低。而细胞分泌MMP2的量则变化不明显。提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程。

碘油为载体对原发性肝癌的导向综合治疗

以碘油（LPD）为载体对原发性肝癌实施导向综合治疗的实验和临床研究的初步结果．125I－LPD经肝动脉灌注后长期高选择性滞留在肝癌组织，其在大鼠肝癌的有效半衰期可达8．73±3．54天，125I－LPD与ADM和MMC的混合乳剂．对肝癌患者的导向综合治疗（内辐射，选择性化疗及栓塞）明显优于LPD的栓塞化疗．经患者肝动脉留量导管，反复多次治疗，可使肝癌组织的内辐射吸收剂量由单次给药的34±7．58rad，提高到94±12．30rad，患者的1年和2年生存率，分别提高至72％和42％．本组的研究结果初步表明，125I－LPD为主的导向综合治疗，是一种安全，有效的治疗肝癌的新方法．