NU7026抑制DNA-PKcs对辐射旁效应中L-02细胞增殖、凋亡、抗氧化的影响

目的探讨NU7026抑制DNA-PKcs对辐射旁效应中L-02细胞增殖、凋亡、抗氧化的影响。方法构建辐射旁效应模型。实验分为空白组(阴性对照)、旁效应组(辐射条件培养液处理)、联合组(辐射条件培养液+NU7026)、辐照组(直接辐照)。采用MTT法、克隆形成实验、微核实验、活性氧(ROS)试剂盒、抗氧化活性试剂盒、荧光分光光度法、流式细胞术、Western blotting分别检测细胞存活率、克隆形成率、微核率、活性氧水平、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、线粒体膜电位、细胞凋亡和周期阻滞及相关蛋白的表达。结果与空白组比较,其他3组的细胞存活率、克隆形成率、SOD和GSH活力、线粒体膜电位降低(P<0.05);微核率、MDA、ROS含量、凋亡率及G2/M期阻滞升高(P<0.05)。与旁效应组比较,联合组、辐照组的细胞存活率、克隆形成率、SOD和GSH活力、线粒体膜电位降低(P<0.05);微核率、MDA、ROS含量、凋亡率及G2/M期阻滞升高(P<0.05)。结论NU7026抑制DNA-PKcs能降低辐射旁效应中L-02细胞增殖、抗氧化和抗凋亡的能力。

茯砖茶及其配方对脂肪变性L-02肝细胞中TG含量的影响

利用1 mL/L的20%医用脂肪乳剂处理L-02肝细胞48 h复制非酒精性脂肪变性肝细胞,然后加入不同浓度的提取物及配方分别处理24 h和48 h,全自动生化分析仪检测肝细胞内的甘油三酯(TG)水平,探讨茯砖茶提取物和两个配方对脂肪变性L-02肝细胞内TG的影响。结果显示,茯砖茶提取物和配方1与自然恢复组比较均可显著降低脂肪变性肝细胞内TG的水平(P<0.05),而与血脂康组比较无显著差异(P>0.05),显示出茯砖茶和配方1具有广阔的开发应用前景。

石榴皮多酚对脂变L-02肝细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响

研究了石榴皮多酚纯化物、安石榴苷和石榴鞣花酸对脂变L-02肝细胞胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;采用MTT法筛选石榴皮多酚适宜浓度;体积分数50%胎牛血清的RPMI-1640培养基与L-02肝细胞孵育48 h建立脂肪变性肝细胞模型;实验分为正常组、模型组和治疗组,治疗组加入不同浓度的受施物,继续培养48 h,采用RT-PCR法检测不同受施物对脂变L-02肝细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;结果显示:石榴皮多酚均能呈剂量依赖性地减弱脂变L-02肝细胞mRNA表达,且以100μg/mL的安石榴苷标品抑制作用最强;表明石榴皮多酚降肝细胞总胆固醇作用是通过降低HMG-CoA还原酶mRNA表达实现的,安石榴苷是石榴皮多酚中降血脂的主要活性形式。

石榴皮多酚对脂变L-02肝细胞胆固醇合成的影响及机制探究

研究了石榴皮多酚纯化物、安石榴苷和石榴鞣花酸对脂变肝细胞胆固醇合成的影响及机制;采用MTT法筛选石榴皮多酚适宜浓度,体积分数50%胎牛血清的RPMI-1640培养基与L-02肝细胞孵育48 h建立脂肪变性肝细胞模型;实验分为正常组、模型组和治疗组,治疗组加入不同浓度的受试物,继续培养48 h,油红O染色定性观察细胞形态和脂滴堆积,高效液相色谱法定量检测细胞内胆固醇含量;紫外分光-速率法检测HMG-CoA还原酶活性变化;结果显示石榴皮多酚均能成剂量依赖性地减少细胞内脂滴的积累、减少细胞内总胆固醇的含量,同时抑制HMG-CoA还原酶的活性,其中以100μg/mL的安石榴苷标品效果最佳。表明石榴皮多酚具有降低肝细胞内总胆固醇的作用,可能是通过抑制HMG-CoA还原酶活性实现的,安石榴苷是石榴皮多酚中降血脂的主要活性形式。

原花青素对MSG诱导的肥胖小鼠及脂肪变性L-02肝细胞的降脂作用

研究原花青素对谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖小鼠和脂肪乳诱导的脂肪变性L-02肝细胞的降脂作用。谷氨酸钠诱导的雄性肥胖小鼠模型建立后,分为正常对照组、模型组、阳性药非诺贝特组和原花青素100 mg/kg、250 mg/kg剂量组,连续灌胃10周,测量小鼠体质量、体长、腹围,并计算李氏指数,测定血清中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平。建立脂肪变性L-02肝细胞模型,以非诺贝特为阳性对照,给予原花青素刺激液培养24 h后,测定细胞内TG含量。结果表明,与模型组相比,原花青素100 mg/kg、250 mg/kg剂量组均能显著降低肥胖小鼠血清TC和TG水平(P<0.05),原花青素25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL剂量组均能极显著降低脂肪变性L-02肝细胞内TG水平(P<0.01)。

三价铬与六价铬化合物对L-02肝细胞毒性的比较

目的 评价三价铬 (Cr(III) )和六价铬 (Cr(VI) )对L -0 2肝细胞的细胞毒效应差异。 方法 以L -0 2肝细胞为研究对象 ,用MTT法检测L -0 2肝细胞死亡指数 ,比色法检测细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶 (AST)的渗出程度。 结果 细胞处理 12h ,Cr(VI)处理组的细胞死亡指数明显高于Cr(III)细胞处理组 ,在 4～ 2 5 6μmol/L浓度范围具有明显的浓度 -效应关系 (相关系数r =0 .945 ,P <0 .0 5 )。细胞处理 5h后 ,Cr(VI)低剂量和高剂量组 (16μmol/L和 12 8μmol/L)LDH的漏出比均明显高于相应剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 ) ;在Cr(VI)高剂量组 (12 8μmol/L)ALT与AST的漏出比显著高于相同剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 )。 结论 Cr(VI)对L -0 2肝细胞的细胞毒效应明显大于Cr(III)。

建立L-02肝细胞脂肪变模型方法比较及脂肪乳诱导脂变条件的优化

目的:比较二甲基亚砜(DMSO)溶解油酸、乙醇溶解油酸、无水乙醇、50%胎牛血清和医用脂肪乳对L-02肝细胞的影响,优化L-02肝细胞脂肪变性模型的良好条件与方法。方法:用含10%胎牛血清PRMI-1640培养液培养细胞,细胞均匀分布进入对数生长期后随机分为正常对照组、DMSO组、DMSO+油酸组、乙醇+油酸组、乙醇组、50%胎牛血清组和医用脂肪乳组,分别用DMSO+油酸、乙醇+油酸、0.4%乙醇、50%胎牛血清(FBS)和20%医用脂肪乳培养48 h,用MTT法检测细胞活力,油红O染色观察细胞数、细胞内脂滴,用试剂盒检测细胞内甘油三酯及蛋白质。用医用脂肪乳培养L-02肝细胞,研究医用脂肪乳诱导L-02肝细胞脂肪变性的浓度和时间。结果:DMSO组和乙醇组细胞生长呈下降趋势,DMSO+油酸组和乙醇+油酸组细胞生长均呈现先升高后降低趋势。甘油三酯和蛋白质测定表明,医用脂肪乳能很好地诱导L-02肝细胞脂肪变性,医用脂肪乳含量10%,造模培养49 h,细胞脂变效果最好。结论:医用脂肪乳诱导L-02肝细胞,脂变率高、脂变细胞形态好,适合L-02肝细胞脂变模型的建立。

六价铬诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤的关系研究

目的 研究六价铬[Cr（Ⅵ）]对L-02肝细胞凋亡率和线粒体功能的影响。初步探讨二者之间的关系。方法 选取0、2、4、8、16、32和64μmol／L Cr（Ⅵ）溶液处理L-02肝细胞6h，采用流式细胞分析检测细胞凋亡率；荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔（PTP）的开放程度和线粒体膜电位（△ψm）的变化。结果 2～64μmol／LCr（Ⅵ）对L-02肝细胞具有细胞毒性，随着Cr（Ⅵ）浓度的增加L-02肝细胞凋亡率升高；线粒体PTP开放程度增加；线粒体膜电位（△ψm）降低，且与对照组比较差异均有显著性（P〈0．05）。结论 Cr（Ⅵ）诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤有关。

人肝细胞系L-02细胞单纯肝脂肪变性细胞模型的建立与应用

目的：探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞，分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%，正常组换用新鲜1640培养液，而模型组改为含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混合物的1640培养基诱导培养24 h。以油红O染色定性观察细胞内脂滴并通过显色比较各组间总脂质差别，模型鉴定采用观察细胞内脂滴形态，检测细胞内甘油三酯和细胞培养上清丙二醛含量，并检测细胞凋亡情况；同时利用此模型观察护肝清脂片对脂肪变性肝细胞内脂滴的影响。结果模型组L-02细胞内脂滴大量形成，且甘油三酯明显升高，而培养液中肝酶释放量及丙二醛较正常组没有明显升高，且凋亡率没有明显增加；护肝清脂片含药血清两次给药，可以使细胞内脂滴和甘油三酯明显减少。结论采用油酸和棕榈酸混合物（油酸∶棕榈酸=2∶1）可以成功诱导L-02细胞脂肪变性，该模型适用于治疗脂肪肝药物的研究。

吡咯里西啶生物碱Jacoline对人正常肝L-02细胞内谷胱甘肽含量及还原酶活性的影响

目的:探讨吡咯里西啶生物碱Jacoline对人正常肝L-02细胞内谷胱甘肽含量及谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase,GR)活性的影响。方法:①采用DTNB法检测100μmol/L Jacoline与L-02细胞孵育24、48、72h后以及不同浓度Jacoline与L-02细胞孵育72h后对L-02细胞内谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量及其GSH/GSSG的影响。②采用NADPH法检测100μmol/LJacoline作用24、48、72h后对L-02细胞内GR活性的影响。结果:①DTNB比色法显示,100μmol/LJacoline与L-02细胞孵育不同时间,谷胱甘肽和GSH含量随着时间的增加而减少,GSH/GSSG的比例也随时间的延长而减少;不同浓度的Jacoline与L-02细胞作用72h后,谷胱甘肽和GSH含量以及GSH/GSSG随浓度的增加而减少;②100μmol/L Jacoline与L-02孵育不同时间,GR的活性随着时间的增加而升高。结论:Jacoline对L-02细胞内谷胱甘肽和GSH含量、GSH/GSSG以及GR还原酶的活性有明显影响。

异槲皮苷对叔丁基过氧化氢诱导的L-02细胞氧化损伤的保护作用

研究异槲皮苷对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的L-02细胞氧化损伤的保护作用。体外培养L-02细胞,采用t-BHP(100μmol/L)作用24 h,建立L-02细胞氧化损伤模型,分为正常对照组、模型组(100μmol/L tBHP)、阳性对照(10μmol/L维生素E)组和不同浓度异槲皮苷(1、10、100μmol/L)预处理组。采用MTT法检测细胞活力,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测丙二醛(MDA)含量,活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物岐化酶(SOD)的活性。与模型组比较,异槲皮苷显著提高细胞存活率(P<0.05),降低ROS和MDA含量及LDH的外漏(P<0.05),明显增加GSH-Px和SOD活性(P<0.05)。异槲皮苷能够上调Sirt6表达,降低NF-κBp65含量。异槲皮苷能够保护t-BHP诱导的L-02细胞氧化损伤,其作用可能与提高清除ROS能力,调控Sirt6和NF-κBp65水平相关。

槲皮素抑制异烟肼诱导的L-02细胞线粒体氧化应激性DNA损伤

目的:探讨活性氧(ROS)介导的线粒体氧化损伤在异烟肼(INH)诱导L-02细胞DNA损伤中的作用及槲皮素对细胞的保护作用。方法:建立体外培养INH致肝细胞L-02损伤的模型,将细胞分为对照(control)组、INH组、槲皮素低剂量(Que low)及高剂量(Que high)组。利用彗星试验评价细胞DNA损伤;制备L-02细胞线粒体,应用荧光探针DCFH-DA和rhodamine 123检测细胞线粒体ROS水平及线粒体膜电位(ΔΨm);采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量;应用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用Western blotting法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bax/Bcl-2值。结果:INH可诱导L-02细胞DNA损伤,使细胞线粒体ROS水平、细胞MDA含量及Bax/Bcl-2值明显增高,并使细胞ΔΨm值和SOD活性明显下降。而槲皮素能减轻细胞DNA损伤,减少细胞ROS水平,增加细胞ΔΨm值,降低细胞MDA含量,增加SOD活性,减少Bax/Bcl-2值。结论:INH可通过诱导细胞线粒体氧化应激导致L-02细胞DNA损伤。槲皮素能减轻INH诱导L-02细胞的DNA损伤,对L-02细胞具有保护作用,可能与其抑制ROS介导的线粒体氧化损伤有关。

富勒烯对人胚肝细胞L-02的损伤作用

目的探讨富勒烯(C_(60))对人胚肝细胞(L-02)的毒性作用及其可能的作用机制。方法将L-02细胞液分别暴露于0、1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml的C_(60)悬浊液中染毒24 h后,检测细胞内LDH、GSH含量和SOD活力,并比较不加和加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)条件下的细胞存活率。结果与空白对照组相比,1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml C_(60)单独染毒组细胞存活率较低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);且呈现明显的剂量-效应关系。加入抗氧化剂NAC后,1.25、2.5、5、10μg/rnl联合染毒组细胞存活率有所上升,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组相比, 1.25、5、10、20、40μg/ml C_(60)染毒组LDH活力较高,5、20、40μg/ml C_(60)染毒组SOD活力和10、20、40μg/ml C_(60)染毒组GSH含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论氧化损伤可能是C_(60)对L02细胞毒性作用的机制之一。

双酚A及纳米二氧化钛对人胚肝L-02细胞内活性氧含量及DNA损伤的联合作用

[目的]观察双酚A(BPA)、纳米二氧化钛(nano-TiO_2)单独及联合作用对人胚肝L-02细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及DNA损伤的影响。[方法]生长良好的L-02细胞,分别单独加入0.1、1、10μmol/L的BPA,1、5、10 mg/L的nano-TiO_2,以及上述各浓度的BPA和nano-TiO_2混合染毒24 h;采用流式细胞仪检测各组L-02细胞内ROS含量,采用彗星试验观察各组DNA断裂损伤程度。[结果]10μmol/L BPA单独染毒组,1mg/L nano-TiO_2与1、10μmol/L BPA,以及5、10 mg/L的nano-TiO_2分别与0.1、1、10μmol/L BPA联合作用于L-02细胞后,均可引起ROS含量升高,DNA断裂损伤加重,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.001);而nano-TiO_2单独染毒组对于L-02细胞ROS的升高、DNA损伤作用与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。析因分析结果显示两种受试物混合染毒存在协同作用。[结论]BPA和nano-TiO_2联合作用可增加各自对L-02细胞内ROS水平和DNA损伤断裂水平的影响,对细胞的损伤作用增大。

雷公藤甲素对人肝细胞L-02氧化损伤的初步研究

目的研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡和活性氧生成的影响。方法体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞中ROS生成量,并测定细胞SOD活性、MDA含量及LDH释放量的变化。结果雷公藤甲素诱导L-02细胞中ROS生成,且随时间的延长而增多,至12h时达峰值(P<0.01);同时,雷公藤甲素也能诱导细胞中MDA含量及LDH释放量的增加,诱导SOD活性的降低。结论雷公藤甲素体外诱导人正常肝细胞L-02细胞凋亡可能与其促进活性氧生成有关。

体外胆红素对L-02细胞生长与凋亡的影响

目的探讨胆红素对正常人肝细胞系L-02生长及凋亡的影响。方法将不同浓度的胆红素(终浓度分别为0、100、150、200、250、300 mg/L)作用于体外培养的正常人肝细胞L-02,分别通过光镜、Hoechst 33258荧光染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪Annexin-V和PI双标等技术观察不同浓度胆红素对L-02细胞的相对存活率的影响、细胞的凋亡梯度和凋亡率。结果经不同浓度胆红素溶液作用后,L-02细胞的增殖能力明显下降,其作用呈剂量依赖性;光镜观察显示凋亡细胞变圆,体积缩小;Hoechst 33258荧光强染;MTT法发现细胞生长受到抑制;经琼脂糖凝胶电泳发现200、250、300 mg/L胆红素溶液组可见到DNA梯形条带;流式细胞仪检测示各实验组细胞凋亡率为(1.24±0.72)%、(5.88±1.66)%、(19.69±3.52)%、(31.11±6.94)%、(57.3±8.71)%;均明显高于对照组细胞凋亡率(1.16±0.58)%(P<0.01)。结论胆红素可抑制L-02细胞生长并诱导其凋亡。

胡黄连苷Ⅱ对H_2O_2损伤L-02细胞的保护作用

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ(picroside Ⅱ)对氧化应激损伤L-02细胞的保护作用.方法:H2O2损伤的L-02细胞作为氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖状况,膜联蛋白(Annexin-V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial potential membrane,△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量.结果:0.6mmol/LH2O2可诱导L-02细胞凋亡,细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降.预先经过0.05,0.5,5mmol/L浓度的胡黄连苷Ⅱ处理后,H2O2诱导的L-02细胞凋亡明显减少(30.8%±9.09%,10.2%±9.82%,8.2%±7.10%vs42.8%±8.28%,均P<0.01),同时明显减弱H2O2对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响.结论:胡黄连苷Ⅱ对氧化应激损伤L-02细胞具有保护作用,其机制可能与降低细胞内ROS含量,进而抑制△Ψm的降低有关.

细脚拟青霉多糖对乙醇诱导L-02细胞损伤的保护作用研究

目的探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)对乙醇诱导肝细胞损伤的体外保护作用。方法采用RT-PCR分别检测乙醇诱导损伤的乙醇组、PtPs处理组(PtPs+乙醇)及正常对照组L-02细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和热休克蛋白90(HSP90)mRNA的表达;检测细胞培养上清液中黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量;检测细胞匀浆中三磷酸腺苷酶(ATPase)活性,并对各组细胞进行Annexin-FITC标记染色观察凋亡细胞情况。结果与乙醇组比较,乙醇+PtPs组细胞内TNF-α mRNA表达下降(P<0.01),HSP90 mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01);细胞培养上清液中SOD活性升高、XOD及LDH活性下降、MDA含量下降(P<0.05或P<0.01);细胞匀浆中ATPase活性上升(P<0.05或P<0.01);PtPs处理后可见乙醇诱导的L-02细胞凋亡和坏死被明显抑制。结论PtPs对乙醇诱导肝细胞的损伤具有保护作用。

急性砷染毒的L-02细胞的基因芯片分析

目的 用基因芯片分析急性砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化。方法 亚砷酸钠染毒L 0 2细胞 2、15、2 4h与未染毒的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交。结果 L 0 2细胞用砷剂染毒后不同时间基因表达谱不同。hCYR6 1基因在细胞染毒 2h后就表达增加 ,而在 15h和 2 4h后均不再升高 ;在细胞染毒后的不同时段 ,细胞金属硫蛋白Ⅳ及金属硫蛋白Ⅲ同源基因的表达均显著增加 ;热休克蛋白 86基因在细胞染毒 2h未增加 ,在 15h和2 4h表达均增加。结论 细胞接触砷毒后进入应激状态 ,合成最必需的与解毒功能相关的蛋白 。

纳米二氧化钛对氯化镉所致人胚肝L-02细胞毒性作用的影响

[目的]研究纳米二氧化钛(nano-TiO_2)对氯化镉(CdCl_2)所致人胚肝细胞毒性作用的影响。[方法]不同浓度的CdCl_2(0.001、0.01、0.1μmol/L)单独或与0.01 mg/L nano-TiO_2混合后,分别作用于人胚肝L-02细胞24h,观察各组L-02细胞的DNA损伤水平,以及hMsh2基因(hMsh2)、O^6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖蛋白激酶复合物催化亚基(DNA-PKcs)的mRNA表达水平。[结果]与相应剂量的CdCl_2单独染毒组比较,nano-TiO_2与各浓度的CdCl_2混合染毒组L-02细胞的DNA损伤加重(P<0.05),hMsh2表达水平明显上升(P<0.05),MGMT表达水平无显著性变化,nano-TiO_2与0.01、0.1μmol/L的CdCl_2混合染毒组DNA-PKcs的基因表达水平明显上升(P<0.05)。[结论]0.01mg/L的nano-TiO_2可以加重各浓度CdCl_2对L-02细胞的DNA单链损伤,从而使CdCl_2对L-02细胞毒性作用增强。