放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响。方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达。结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1．733,P=0．042;F=1．700,P=0．048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷。结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡。

Effect of Calmodulin and Voltage-dependent Ca^(2+) Channel on the Proliferation of Heptoma Cells Induced by Epidermal Growth Factor

The effect of thyrosine kinase, calmodulin and voltage-dependent Ca 2+ channel on the proliferation of hepatoma cells induced by EGF was studied. Hepatoma cell line SMMC7721 was cultured in RPMI1640 serum-free medium. DNA synthesis rate of hepatoma cells was measured by 3H-TdR incorporation. 10 -9 mol/L EGF could significantly stimulate the proliferation of hepatoma cells (P<0.05), and this effect might be significantly inhibited by tyrosine kinase inhibitor (P<0.001). Calmodulin inhibitor W-7 had no effect on the basic phase of cultured hepatoma cells (P> 0.05), but it had very significantly inhibitory effect on the proliferation of hepatoma cells induced by EGF (P<0.001). Voltage-dependent Ca 2+ channel inhibitor Varapamil had no inhibition on the proliferation of hepatoma cells induced by EGF (P>0.05). It had no effect on the basic phase of cultured hepatoma cells (P>0.05). It is suggested that tyrosine kinase and Ca 2+-calmodulin-dependent pathway may play a critical role on the proliferation of heptoma cells induced by EGF, and voltage-dependent Ca 2+ channel is independent of the effect of EGF.

银耳多糖对肝癌细胞株HepG-2增殖的影响

目的:研究银耳多糖对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法:采用高温浸提的方法提取银耳多糖,并进行提取定量;将银耳多糖作用于肝癌HepG-2细胞,采用台盼蓝排斥试验测定细胞活力和生长曲线。结果:在分别培养1 d、2d和3 d后,银耳多糖干预各组的活细胞率都低于对照组(P<0.001)。生长曲线法显示,银耳多糖干预各组的细胞倍增时间延长,银耳多糖对增殖细胞的杀伤率最高达89.29%(>80%),且存在剂量依赖关系。结论:银耳多糖对肝癌HepG-2细胞具有直接抑制作用。

SMMC-7721肝癌细胞膜上β_2糖蛋白Ⅰ受体的表达

目的:研究β2糖蛋白I(β22GPI)与 SMMC-7721肝细胞膜的相互作用过程,探讨乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性的发生机制．方法:采用荧光显微镜及流式细胞仪分析的方法．检测SMMC-7721、HL-60及SGC-7901 三种细胞膜与FITC-β2GP I相结合的情况以及二者的结合特性．结果:仅SMMC-7721细胞膜表面附有大量荧光,其余2种细胞无此现象．加FITC-β2GP I 20 μL时,SMMC-772 1与FITC-β2GP I 的结合率为19％,明显高于FITC-β2GP I与 HL-60的结合率(1．7％)及与SGC-7901的结合率(1．9％)(P<0．01)．加FITC-β2GP I 50μL 时,SMMC-7721与FITC-β2GP I的结合率为 20．8％,与20 μL的结合率无差异(P>0．05),说明SMMC-7721与FITC-β2GP I的结合率不随 FITC-β2GP I量的增加而增高．结论:在SMMC-7721肝细胞膜表面存在能与人β2GP I特异结合的蛋白．

SMMC-7721肝癌细胞膜上β_2糖蛋白I可能的受体

研究β2糖蛋白I(β2GPI)与肝细胞相互作用的过程,以进一步探讨β2GPI在乙型肝炎病毒感染肝细胞过程中所发挥的作用。采用L igand b lot技术,从SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三个细胞株中,筛选出具有与人β2GPI特异结合蛋白成分的细胞。SMMC-7721细胞在40kD处出现一特异染色带,而HL-60及SGC-7901二种细胞则无此反应。在SMMC-7721细胞中存在有与人β2GPI特异结合的蛋白,这种蛋白可能参与了HBV感染肝细胞的过程。

氧化吲哚类化合物Z24的体内抑瘤活性及其血管生成抑制作用(英文)

目的 从抗血管生成活性的角度 ,寻找新的抗肿瘤药物 ,研究Z2 4的体内抑瘤活性及其对血管内皮细胞的选择性抑制作用。方法 MTT法检测不同浓度的Z2 4作用 72h时对人肝癌细胞系BEL 74 0 2及正常人胚肺二倍体细胞 2BS的生长抑制作用 ,并从浓度 抑制率曲线求出IC50 ;台盼蓝拒染计数法检测不同浓度的Z2 4作用 72h时对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的生长抑制作用 ,从浓度 抑制率曲线求出IC50 ;小鼠S180 ,H2 2和裸小鼠皮下移植性人肝癌BEL 74 0 2模型研究Z2 4的体内抑瘤作用。鸡胚尿囊膜 (CAM )血管生成模型检测Z2 4的血管生成抑制活性。结果 MTT法测得Z2 4对BEL 74 0 2生长抑制作用的IC50 为 10 6 μmol·L- 1,对 2BS生长抑制作用的IC50 为 116 μmol·L- 1。台盼蓝拒染计数法测得Z2 4对HUVEC生长抑制作用的IC50 为 6 .4 4μmol·L- 1。Z2 4可明显抑制鸡CAM新生血管的形成Z2 4 10 0mg·kg- 1可使S180 ,H2 2和裸小鼠人肝癌BEL 74 0 2模型的肿瘤重量较对照组分别下降 5 2 .5 %(n =10 ,P <0 .0 1) ,4 1.5 % (n =10 ,P <0 .0 1)和5 3.4 % (n =6 ,P <0 .0 1)。Z2 4可显著抑制CAM的血管生成。结论 Z2 4对多种肿瘤动物模型均具有显著的体内抑瘤活性 ,对血管内皮细胞有选择性抑制作用 ,并明显抑制CAM新生血管的生成?

PARP-1抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用

目的:研究聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其作用机制,以及PJ34是否进一步增强γ射线对肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:细胞增殖实验观察不同浓度的PJ34,以及PJ34合并γ射线照射对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测PJ34对HepG2细胞凋亡的影响.结果:PJ34对HepG2细胞的增殖有显著的抑制作用(t=15.175,P<0.01).随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强.1Gy的γ射线照射对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,但γ射线照射联合PJ34与单用PJ34或γ射线照射对肝癌细胞的增殖抑制作用相比较无明显统计学差异(t=-1.413,P>0.05).PJ34能诱导HepG2细胞凋亡,72h时凋亡率明显高于对照组,二者有显著性差异(33.2% vs 11.4%,P<0.01).结论:PARP-1抑制剂PJ34通过诱导HepG2细胞凋亡抑制人肝癌细胞的增殖;PJ34并不显著增加γ射线对HepG2细胞增殖的抑制作用.

呫吨酮衍生物XP-15对BEL-7402细胞线粒体膜电位的影响

目的 :探讨呫吨酮并吡啶衍生物9-(2-吗啡啉乙酰胺基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-15)对BEL-7402细胞线粒体膜电位的影响。方法:通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-15对BEL-7402细胞增殖的影响;用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的影响。结果:高剂量的XP-15能明显抑制BEL-7402细胞增殖(P<0.05);对BEL-7402细胞克隆的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。XP-15作用后,BEL-7402细胞的线粒体膜电位降低(P<0.05)。结论:XP-15诱导BEL-7402细胞凋亡的作用,可能与其降低线粒体膜电位有关。

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制。方法在3个时间点(24、48、72 h)采用MTT比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50)。根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6mol/L 3个浓度进行下述实验。通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片,Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况。结果 (1)MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;(2)流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;(3)经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;(4)Western blot结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调。结论橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用。其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡。HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物。

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。

三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的初步研究

目的 :研究三氧化二砷（ As2O3）对肝癌细胞株 Bel-7402的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法 :采用 MTT法检测药物对细胞的抑制作用、相差显微镜和电镜观察细胞形态变化、琼脂糖凝胶电泳测定 DNA Ladder、流式细胞术检测细胞周期变化。结果 :各浓度 As2O3组（ 0.25～ 16μ mol/L）均可抑制肝癌细胞增殖，且抑制率具有浓度和时间依赖性，同作用时间呈直线相关，其中浓度组为 10μ mol/L抑制率最大， 96 h时达 83. 89％， 2μ mol/L As2O3以抑制肝癌细胞的增殖为主，但在形态及生化方面未见凋亡改变 ;10μ mol/L As2O3作用 10 h可见形态学变化， 48 h可见 DNA Ladder出现。流式细胞检查见明显的凋亡峰出现（ 8.66％），并使细胞周期阻滞在 S＋ G2 M期。结论：低浓度 As2O3（ 0.25～ 2.0μ mol/L）可以在体外抑制肝癌细胞的增殖，但未进入实质凋亡；高浓度 10μ mol/L组可诱导肝癌细胞凋亡。

三氧化二砷对人肝癌细胞的体外作用及其机制

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞BEL7402的体外作用及其机制。方法:采用MTT法观察As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期、凋亡相关蛋白bcl-2阳性细胞百分率、增殖细胞核抗原(PCNA)变化。结果:As2O3可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著(r=0.965 0,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)为4.93μmol.L-1;As2O3能显著下调PCNA蛋白表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期,但对bcl-2表达无影响(P>0.05)。结论:As2O3可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长,其机制可能与下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。

调节糖脂代谢紊乱中药多靶点筛选的研究

[目的]观察几种中药成分对人肝癌细胞株Hep-G2糖脂代谢相关基因,包括细胞血管生成素相关生长因子(AGF)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和胰岛素受体底物2(IRS-2)mRNA的影响。[方法]培养人肝癌细胞株Hep-G2,以实时定量逆转录聚合酶链反应(Real Time RT-PCR)法检测中药成分对AGF、G-6-Pase、LDLR和IRS-2 mRNA的影响。[结果]小檗碱可以显著提高Hep-G2细胞AGF和LDLR mRNA的表达,姜黄素可以降低G-6-Pase mRNA的表达。[结论]小檗碱和姜黄素可能通过对糖脂代谢相关基因的调节而对糖尿病有一定的治疗作用。

钙通道和Na^+/H^+交换在表皮生长因子促肝癌细胞生长中的作用

目的 许多生长因子如表皮生长因子 (EGF) ,与肿瘤的发生密切相关。EGF与表皮生长因子受体 (EGFR)结合 ,通过一系列的信息传导 ,导致肝癌细胞的增生。但受体后的信息传导机制尚不清楚。本实验探讨酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细胞生长中的作用。方法 本研究于无血清RPMI164 0中培养肝癌细胞SMMC772 1,采用3 H Thymidine(3 H TdR)掺入的方法 ,检测肝癌细胞DNA合成速率 ,研究酪氨酸激酶、蛋白激酶C、Na+/H+交换、钙调蛋白和电压依赖性钙通道在EGF促肝癌细脆生长中的作用。结果 EGF 10 -9M对肝癌细脆的生长有极显著促进作用 ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,酪氮酸激酶阻滞剂Genistein对EGF的促肝癌细胞生长作用具有极显著抑制作用 (P <0 0 0 1)。钙调蛋白阻滞剂W 7、蛋白激酶C阻滞剂H 7和Na+/H+交换阻滞剂amiloride对EGF的促肝癌细胞生长作用具有显著抑制作用 (P <0 0 0 1,P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,而对基础状态细胞的3 H TdR掺入值无显著影响 (P >0 0 5 )。电压依赖性钙通道阻滞剂Varapamil对BGF的促肝癌细胞生长作用无显著抑制作用 (P >0 0 5 ) ,对基础状态细胞的3 H TdR掺入值亦无显著影响 (P >0 0 5 )。结论 结果显示 ,酪氨酸激酶、?

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。

Fe_2O_3纳米颗粒对人肝癌细胞游离钙的影响

[目的]探讨三氧化二铁(Fe2O3)纳米颗粒对人肝癌细胞(HepG2细胞)形态学和游离钙([Ca2+]i)的影响,为研究Fe2O3纳米颗粒诱导细胞凋亡的机制提供依据。[方法]以不同浓度(0.173、0.347、0.694g/L)的Fe2O3纳米颗粒对HepG2细胞染毒1、12、24h,用激光扫描共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i荧光强度的变化。[结果]与对照组相比,染毒不同时间各染毒组细胞内[Ca2+]i含量差异均有统计学意义(P<0.05);染毒不同浓度时,Fe2O3纳米颗粒均能不同程度地引起HepG2细胞的形态学改变及其细胞内[Ca2+]i的升高。0.347、0.694g/L组染毒不同时间点的平均荧光强度分别为127.33±20.13、108.88±19.15、144.00±13.86和119.67±1.15、122.35±11.47、186.40±17.34,均明显高于对照组54.33±6.43,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]HepG2细胞凋亡可能与Fe2O3纳米颗粒引起的细胞[Ca2+]i升高有关。

红花注射液对HepG-2细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的:研究红花注射液在体外对HepG-2细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Survivin基因转录和蛋白表达的影响,探讨红花注射液诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。方法:采用不同剂量的红花注射液(0,50,100,150,200,250 g·L-1)体外作用于HepG-2细胞,利用MTT法观察红花注射液对HepG-2细胞增殖的抑制作用;以流式细胞术观察细胞凋亡率的变化;通过实时荧光定量PCR技术(real time-PCR)以及蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Survivin mRNA和蛋白的表达情况。结果:红花注射液对体外培养的人肝癌HepG-2细胞的增殖具有抑制作用(P<0.01),且具有剂量、时间相关性;细胞凋亡率随着红花注射液浓度的增加而逐步增高,细胞凋亡相关因子Bcl-2,Survivin的mRNA和蛋白表达均下调。结论:红花注射液能够抑制HepG-2人肝癌细胞增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2,Survivin的表达,这可能是红花注射液诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。

八角中莽草酸对人肝癌HepG-2细胞增殖及NF-κB蛋白表达的影响

目的:探讨八角中莽草酸对人肝癌细胞HepG-2细胞增殖及其核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达的影响。方法:用不同浓度的莽草酸处理HepG-2细胞,MTT法测定莽草酸对HepG-2细胞的生长抑制率;倒置显微镜下观察莽草酸作用HepG-2细胞后的形态学变化;采用hoechest33342荧光染色观察莽草酸作用于人肝癌HepG-2细胞48 h后细胞凋亡形态变化。Western blot试验观察莽草酸对人肝癌HepG-2细胞NF-κB(p65)蛋白表达的影响。结果:MTT实验结果表明,莽草酸对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用呈现时间依赖性和剂量依赖性;倒置显微镜下观察细胞形态可以发现,经莽草酸处理48 h后的各组细胞中,可观察到随着药物浓度的增加,细胞凋亡形态变化越来越明显,细胞数量逐渐变少。荧光染色观察随着药物浓度增加,凋亡细胞增多且明显,当莽草酸质量浓度达1 g·L-1时,出现较多的凋亡小体。NF-κB(p65)蛋白的表达随莽草酸浓度升高而显著下降。结论:莽草酸对人肝癌细胞HepG-2有较显著的生长抑制作用,莽草酸对人肝癌HepG-2细胞表达NF-κB(p65)明显减弱,其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用机制可能下调NF-κB表达水平有关。

健脾理气方对HepG2人肝癌细胞株p53和bcl-2基因表达的影响

[目的]观察健脾理气方对HepG2人肝癌细胞株p53和bcl-2基因表达的影响。[方法]30只雄性SD大鼠随机分为健脾理气方(中药)组、0.85%氯化钠(对照)组和顺铂(化疗)组,每组10只。利用血清药理学方法制备药物血清,3组分别加入PRMI 1640血清培养的HepG2人肝癌细胞株中,作用48 h。应用免疫细胞化学方法和图像分析方法观察健脾理气方对HepG2人肝癌细胞株p53、bcl-2基因表达影响。[结果]①免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核,癌基因bcl-2主要定位在细胞质内。药物血清作用后,p53表达明显增强;bcl-2表达明显降低。随着作用时间延长,2种基因表达改变更明显。②中药组与对照组p53和bcl-2光度(AOD)值差异有统计学意义(P<0.01)。③化疗组作用结果与中药组相似。[结论]健脾理气方药物血清上调p53、下调bcl-2,达到抑制HepG2人肝癌细胞株的作用。为应用健脾理气方治疗肝癌提供实验依据。

抑制IGF2基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用

目的:研究抑制人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因的siRNA表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用。方法:将重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA表达载体pGL3-h AFP-hTERT-siRNA3(简称siRNA3)转染Huh-7细胞和正常肝L-02细胞,另设阴性对照(载体p GL3-hAFP-hTERT)组和空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞转染48 h后IGF2 mRNA表达;酶标仪检测转染0、24、48、72 h后的细胞活性;流式细胞仪检测转染48h后细胞周期、细胞凋亡;Western blot法检测细胞IGF2、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)E2、Cyclin D2、Cdc2、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与阴性对照组和空白对照组比较,转染siRNA3的Huh-7细胞中IGF2 mRNA表达明显减弱,转染48、72 h后Huh-7细胞活性明显降低,G1期Huh-7细胞明显增加,S期Huh-7细胞明显减少;Huh-7细胞早期、晚期及总凋亡百分比均明显增加,IGF2、PCNA、Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2和Bcl-2蛋白表达均明显减弱,以上差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。转染siRNA3表达载体的L-02细胞上述指标均无明显变化(P>0.05)。结论:重组hAFP和hTERT双启动子调控针对IGF2基因的siRNA可特异性抑制Huh-7细胞IGF2表达及细胞增殖,其可能与下调IGF2 mRNA及蛋白表达,进而引起细胞增殖相关基因PCNA、细胞周期调控相关基因Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2及细胞凋亡调控相关基因Bcl-2蛋白表达下调有关。