生长抑素对人肝癌HepG2细胞增殖及cyclinD1、cyclinE蛋白表达的影响

目的探讨生长抑素治疗肝癌的作用机制。方法取对数生长期HepG2细胞以不含血清的培养液使其周期同步化，以含血清培养液继续培养24h后随机分为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组，前三组分别加入质量浓度为100、200、400μg／（kg·d）的生长抑素，对照组加入等体积RPMll640培养液24—72h。MTT比色法观察各组细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组化法检测周期素D1（cyclinD1）、周期素E（cyclinE）蛋白表达。结果观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同时间点细胞增殖抑制率均显著高于对照组，且同一时间点观察Ⅲ组〉观察Ⅱ组〉观察I组，同组中72h〉48h〉24h（P〈0．05、0．01）；观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G，期细胞比例均显著高于对照组，观察Ⅱ、Ⅲ组S期细胞比例均显著低于对照组（P〈0．05、0．01）；观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组cyclinD1、cyclinE蛋白水平均显著低于对照组，且观察Ⅲ组〈观察Ⅱ组〈观察Ⅰ组（P〈0．05、0．01）。结论生长抑素可通过下调cyclinD1、cyclinE表达抑制HepG2细胞增殖，此可能为其治疗肝癌的作用机制之一。

和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响

目的探讨和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响,揭示可能的分子机制。方法使用和枢消积方作用于人肝癌细胞系HepG2,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、平板克隆实验检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、丙型肝炎病毒(HCV)非结构5A蛋白(NS5A)反式激活基因13(NS5ATP13)及蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶(GSK)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)相关通路蛋白的表达水平。结果和对照组相比,和枢消积方各组可使HepG2细胞活性、增殖率显著降低(P<0.05);同时可上调BAX的蛋白表达,下调BCL-2及磷酸(p)-AKT、p-GSK、p-MTOR及NS5ATP13的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论和枢消积方可以抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,这可能与和枢消积方抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/MTOR信号转导通路的活化有关。

黄芪多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡相关基因表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)联合斑蝥酸钠(SCA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法实验分为对照组、SCA处理组、APS处理组、APS联合SCA处理组,采用免疫组化染色法(IH)观察APS联合斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用Western印迹法检测各组细胞Bcl-2基因表达的变化。结果与对照组相比,各处理组HepG2细胞中Bcl-2基因表达均明显减少,APS联合SCA处理组减少最为明显。结论 APS联合SCA可明显抑制HepG2细胞Bcl-2基因的表达。

葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡

目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blotting检测细胞自噬发生。结果:原花青素作用HepG2细胞后,不同质量浓度的原花青素对肝癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),原花青素作用于人肝癌HepG2细胞48 h的IC50为1.304×10-1g/L;与对照组相比随着原花青素作用于HepG2细胞的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;随着原花青素浓度的增加,人肝癌HepG2细胞出现明显G1期阻滞,且高浓度原花青素组出现明显的亚二倍体峰,当原花青质量素浓度达到1.6×10-1g/L时,亚二倍体百分率为81%;不同质量浓度原花青素作用后,出现明显的凋亡细胞及坏死细胞、自噬性死亡和非特异性死亡细胞群;经原花青素处理转染GFP-LC3质粒的HepG2细胞胞浆内,LC3呈现明显的点状聚集;细胞自噬标志蛋白LC3-II的蛋白表达水平随着原花青素浓度增加逐渐增多。结论:原花青素通过诱导细胞凋亡及自噬性死亡的方式抑制人肝癌细胞的生长。

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoi-somerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100μg/ml和500μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。

基于人肝癌细胞HepG2的仙鹤草挥发性成分体外抗肝肿瘤活性评价研究

目的研究仙鹤草挥发性成分物质组成及其体外抗肝肿瘤活性,为其作为天然抗肝肿瘤药物的开发利用奠定实验基础。方法采用GC-MS法对仙鹤草挥发性成分进行化学成分分析,采用MTT比色法对仙鹤草挥发性成分及其主要单体成分棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸作用于人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制率进行研究;采用AnnexinV-FITC/PI双染法对仙鹤草挥发性成分作用HepG2细胞后凋亡率的变化进行研究。结果仙鹤草挥发性成分中共鉴定出23种化合物,其中主要包括醇类成分(26.54%)、脂肪酸类成分(15.70%)、甾醇类成分(13.96%)、烃类成分(7.49%)和酯类成分(13.82%);仙鹤草挥发性成分能显著抑制HepG2细胞的增殖、促进HepG2细胞凋亡,其主要单体成分棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸均表现出显著体外抗HepG2细胞增殖活性。结论仙鹤草挥发性成分通过抑制癌细胞增殖、促进其凋亡发挥抗肝肿瘤作用,其发挥药效的单体成分有棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸,该研究为仙鹤草挥发性成分作为天然抗肝肿瘤药物的开发利用及进一步的抗肿瘤单体研究等提供理论依据。

红树林共生真菌Paecilomyces sp. Tree 1-7代谢产物对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用

目的:测定红树林共生真菌Paecilomycessp.Tree 1-7代谢产物对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用。方法:实验分为3组:空白对照组、阳性对照组和代谢产物组,采用MTT法检测不同浓度的代谢产物对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用。结果:代谢产物中化合物secalonic acid A对人肝癌细胞HepG2的IC50为2.0μg/ml,tenellic acid A对HepG2的IC50为62.1μg/ml,alternin对HepG2的IC50为7.0μg/ml。结论:红树林共生真菌Paecilomycessp.Tree 1-7代谢产物中secalonic acid A和alternin对人肝癌细胞HepG2具有较强的细胞毒性,值得进一步研究。

人肝癌细胞系HepG2在遗传毒物检测中的应用及其进展

外来化合物的体外遗传毒性实验常用于各种致癌物和致突变物的快速筛选.HepG2是一种分化好的人肝胚细胞瘤细胞系,保留了较完整的代谢酶及其活性.以HepG2细胞作为实验系统检测各种致癌及非致癌物,在多个观察终点均获得相应的阳性及阴性结果.

5-脂氧合酶抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的:研究5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-Lox)在人肝癌细胞株HepG2中的表达,以及5-Lox抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。方法:应用免疫细胞化学染色及RT-PCR分别检测5-Lox的蛋白和mRNA在人肝癌细胞株HepG2中的表达,采用MTT法及流式细胞术检测5-Lox抑制剂齐留通(Zileuton)对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡的影响。结果:5-Lox蛋白表达于肝癌细胞浆,局灶细胞核膜亦见阳性染色,RT-PCR可检测到肝癌细胞5-Lox的mRNA的表达。人肝癌细胞株HepG2给予不同浓度的齐留通处理24小时后,细胞存活率呈剂量依赖性下降;流式细胞术检测可见细胞凋亡率呈剂量依赖性升高。结论:人肝癌细胞株HepG2存在5-Lox的表达,5-Lox抑制剂齐留通可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞凋亡。

还原型谷胱甘肽对多柔比星处理HepG2细胞株效果的影响

目的研究还原型谷胱甘肽(GSH)对多柔比星(DOX)处理HepG2细胞株增殖及凋亡的影响;探索核转录因子(NF)-κB p65、Bcl-2在DOX单药及联合GSH诱导HepG2细胞凋亡后的表达及其意义。方法实验分4组,空白组:培养液,对照组:培养液+HepG2细胞+RPMl l640培养基,DOX组:培养液+HepG2细胞+DOX,DOX+GSH组:培养液+HepG2细胞+DOX+GSH。MTT法检测HepG2细胞生长,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,实时荧光定量PCR法检测NF-κB p65 mRNA的表达,Western印迹检测NF-κB p65及Bcl-2的表达。结果 (1)DOX组和DOX+GSH组作用细胞24 h、48 h、72 h均能显著抑制HepG2细胞增殖,DOX组抑制率显著高于DOX+GSH组(P<0.05),且抑制率具有时间和剂量依赖性。(2)对照组凋亡率为(0.733±0.153)%,DOX组凋亡率为(28.400±0.007)%,DOX+GSH组凋亡率为(15.500±0.006)%;DOX组、DOX+GSH组分别与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);DOX组与DOX+GSH组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)两组在处理细胞24 h后,DOX+GSH组NF-κB p65mRNA表达显著高于DOX组(P<0.05)。(4)DOX组NF-κB p65、Bcl-2表达较对照组增高,DOX+GSH组表达较DOX组表达增高。结论 GSH与DOX联合使用可导致DOX化疗效果下降,其机制可能是通过进一步上调NF-κB p65和Bcl-2的表达实现的。临床上使用DOX化疗的肿瘤患者应避免同时使用GSH。

miR-496对肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响

为探究miR-496对肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响,通过Lip2000分别转染miR-496模拟物、模拟物的阴性对照、miR-496抑制物、抑制物阴性对照于肝癌细胞株HepG2细胞中,经PCR验证转染成功后,应用流式细胞术检测miR-496对肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响.结果显示:加入miR-496模拟物的HepG2细胞检测结果与对照组相比,G0/G1期细胞数上升了10%,G2/M期细胞数下降了7%;加入miR-496模拟物阴性对照物的检测结果与对照组结果基本没变化;而加入miR-496抑制物的检测结果与对照组结果相比,G0/G1期细胞数减少,G2/M期细胞数增加;加入miR-496抑制物阴性对照组的检测结果相对于对照组变化不显著.结果表明:miR-496可以抑制细胞HepG2的分裂.

翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白的影响

目的:检测翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白表达的影响,探讨翻白草油抗肝癌的机制。方法:翻白草油作用肝癌HepG2细胞后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞增殖活性和IC50;western blot法检测CDK4蛋白的表达。结果:翻白草油能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,IC50值为2.03mg/mL,;翻白草油处理组CDK4蛋白水平低于溶剂对照组(P<0.01)。结论:翻白草油可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与降低CDK4蛋白的表达有关。

TSLC1真核表达载体的构建及在HepG2肝癌细胞中的表达

目的构建TSLC1真核表达载体,并转染到肝癌细胞HepG2中使之表达,为研究TSLC1的抗肝癌作用奠定基础。方法利用RT-PCR技术扩增TSLC1基因全长,并与真核表达载体pRe-ceiver-M29进行连接;应用双酶切、PCR以及测序鉴定此连接载体;脂质体Lipofectamine 2000介导重组载体转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR和免疫组化法检测其表达。结果RT-PCR获得了约1 329 bp大小的TSLC1基因片段;经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实TSLC1基因片段正确插入真核表达载体pReceiver-M29中;与对照组比较,RT-PCR方法可见显示转染组细胞TSLC1mRNA表达明显增多,免疫组化法可见显示转染组细胞TSLC1蛋白表达明显增高。结论成功构建了真核表达载体pReceiver-M29-TSLC1,建立了稳定转染TSLC1的HepG2细胞株。

电离辐射对人HepG2肝癌细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察电离辐射对人He-pG2肝癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响。方法:采用6MV-X射线照射人HepG2肝癌细胞,Western blotting蛋白印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:6MV-X照射后48小时,2Gy、4Gy、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达明显高于假照射对照组(0Gy)(P<0.05,P<0.01)。结论:电离辐射可诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白表达增高。

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响。方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照。采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化。结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG,细胞表现为随着照射剂量的增加,G_1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G_2/M期阻滞。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G_2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G_2/M期阻滞,4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G_2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡。

PARP-1抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用

目的:研究聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其作用机制,以及PJ34是否进一步增强γ射线对肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:细胞增殖实验观察不同浓度的PJ34,以及PJ34合并γ射线照射对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测PJ34对HepG2细胞凋亡的影响.结果:PJ34对HepG2细胞的增殖有显著的抑制作用(t=15.175,P<0.01).随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强.1Gy的γ射线照射对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,但γ射线照射联合PJ34与单用PJ34或γ射线照射对肝癌细胞的增殖抑制作用相比较无明显统计学差异(t=-1.413,P>0.05).PJ34能诱导HepG2细胞凋亡,72h时凋亡率明显高于对照组,二者有显著性差异(33.2% vs 11.4%,P<0.01).结论:PARP-1抑制剂PJ34通过诱导HepG2细胞凋亡抑制人肝癌细胞的增殖;PJ34并不显著增加γ射线对HepG2细胞增殖的抑制作用.

小黑药亲电成分干预混合游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG2脂肪变性研究

采用GSH功能化磁珠靶向敲出小黑药亲电成分并用LC-MS表征,基于游离脂肪酸(FFA)诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,评价小黑药亲电成分降低肝细胞脂质累积和氧化应激的作用和机制。结果表明:小黑药亲电成分主要集中在乙酸乙酯部位;在0.5~2.0mg/mL浓度下,小黑药石油醚部位、乙酸乙酯部位、水部位均具有降低脂肪变性细胞脂质累积和ROS生成的活性,其中乙酸乙酯部位在各浓度下效果最好;乙酸乙酯部位在各浓度下具有降低细胞内TG、TC水平和提高细胞内抗氧化酶活性的作用;经过GSH功能化磁珠靶向敲出亲电化合物后,乙酸乙酯部位在2.0μg/mL浓度下对细胞内TG水平的降低和细胞内抗氧化酶水平的提高效果显著减弱。乙酸乙酯部位萃取物上调Nrf2及下游NQO1、HO-1、GCLC基因,下调脂质合成基因SREBP1c、ACC1、FAS的表达,促进脂质分解基因PPARα、CPT1A的表达;而靶向敲出亲电成分后,乙酸乙酯部位萃取物调控脂代谢和抗氧化相关基因的作用明显下降。LC-MS表征亲电成分敲出前后乙酸乙酯部位样品,发现了7个变化的主要质谱峰,推测其为主要的亲电化合物。小黑药中亲电化合物可以改善脂肪酸诱导的脂肪变性,其机制主要与抗氧化和脂代谢相关基因的调节有关。

罗格列酮对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法设不同浓度罗格列酮组(10、25、50.0、100.0μg/ml)、2‰二甲基亚砜的RPMI1640培养基加细胞为阴性对照组。应用MTT法检测罗格列酮对肝癌HepG2细胞的增殖抑制和生长活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果罗格列酮对肝癌HepG2细胞具有较强的体外毒性,48 h IC50为41.6μg/ml。肝癌HepG2细胞活性随着用药剂量和作用时间的增加而不断下降,出现剂量-效应和时间-效应的关系。罗格列酮作用48 h后,肝癌HepG2细胞G_0/G_1期比例显著升高,S期细胞比例有所降低,到G_2/M期细胞的比例明显下降,并呈明显的剂量依赖性。罗格列酮对HepG2细胞作用48 h后可以诱导肿瘤细胞产生凋亡,并且呈剂量依赖性。结论罗格列酮能抑制肝癌HepG2细胞生长并促进其凋亡。

人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2的建立

目的体外建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。

和厚朴酚衍生物对肝癌细胞(HepG2)凋亡的影响

为探讨和厚朴酚衍生物对肝癌细胞的毒性,在合成了6个和厚朴酚衍生物的同时,并应用MTT分析和细胞流式分析等手段研究了活性较好的厚朴酚3#H对肝癌HepG2细胞凋亡的影响。采用倒置显微镜观察细胞的形态学的改变,用流式细胞分析技术测定亚二倍体峰等方法检测该药物对细胞凋亡影响,结果表明和厚朴酚3#H可明显诱导HepG2细胞凋亡。