麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒作用靶点的研究

目的研究麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒的作用靶点。方法运用细胞培养技术、血凝试验和MTT法检测麻杏石甘汤在4种给药方式中对流感病毒血凝滴度和流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果在直接灭活病毒作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内的血凝滴度低于病毒对照组,在15.63￣31.25mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在干预病毒吸附作用中,麻杏石甘汤在1.95￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在保护宿主细胞作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组,差异均有统计学意义(P<0.01￣0.05)。在这3种给药方式中,麻杏石甘汤对流感病毒感染的MDCK细胞的治疗指数高于利巴韦林。在抑制病毒增殖的作用中,麻杏石甘汤在7.81￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度显著低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.01￣0.05)。与利巴韦林组比较,检测的麻杏石甘汤5个浓度点的作用不明显,在给药方式中,麻杏石甘汤对MDCK细胞的治疗指数也低于利巴韦林组。结论麻杏石甘汤通过直接杀伤病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞而发挥抗流感病毒作用,该方直接杀伤病毒、干预病毒吸附和保护宿主细胞的作用优于利巴韦林片,抑制病毒增殖的作用不及利巴韦林片。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘大鼠的机制

目的探讨麻黄-苦杏仁药对对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响,以及对p38MAPK/NF-κB信号通路的调控作用。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组及麻黄-苦杏仁药对A组(9 g∶6 g)、B组(12 g∶6 g)、C组(9 g∶9 g),每组8只。采用4%卵清蛋白(OVA)致敏复制哮喘大鼠模型,持续造模4周后开始给药,麻黄-苦杏仁药对组(5 g·kg^(-1))、地塞米松组(1 mg·kg^(-1))按相应剂量灌胃给药,正常组及模型组给予等剂量生理盐水,每天1次,持续14 d。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL^(-1)3和γ-干扰素(IFN-γ)水平;采用Diff-Quick染色后对BALF进行炎性细胞分类计数;采用免疫组化法检测肺组织p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白表达;Western Blot法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65蛋白表达;qRT-PCR法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著升高(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著升高(P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,麻黄-苦杏仁药对组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著降低(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著降低(P<0.01),IFN-γ水平显著升高(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论麻黄-苦杏仁药对可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,减少Th2细胞因子生成,减轻哮喘大鼠气道及周围的炎性反应和高气道反应,从而发挥控制哮喘的作用。

中药制剂中应用中药细胞级微粉碎技术分析

目的:观察中药制剂中应用中药细胞微粉碎技术的效果。方法:将静音粉碎机放置于水平台面上,采用10目筛板;将需粉碎中药饮片经进料口连续投入,当药物完全通过筛板后再停机,再使用80目筛板实施筛分,并对渣头实施重复处理一直至其完全通过80目筛板。于振动磨中放置适量80目药物粉末,然后取少量样品,并检测其表面积及粒径,此时并对细胞破壁率进行统计和计算,以确定麻黄和平贝母最佳粉碎时间。选取适量样品,并加入适量无水乙醇,使用激光粒度分布仪检测其粒径等情况。结果:麻黄细胞与超微粉的吸湿性比较,差异无统计学意义(P>0.05);然而平贝母和复方散剂细粉及甘草吸湿性比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:中药制剂中应用中药细胞微粉碎技术有利于提高药物生物利用度及质量。

麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘机制研究

目的运用网络药理学和分子对接的方法研究麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘的分子机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)查找麻黄、苦杏仁的有效成分及相关靶点,并运用Uniprot数据库对靶点进行人类基因名称标注并规范化处理。通过OMIM及GeneCards查找支气管哮喘疾病靶点。将中药的靶点与疾病靶点进行比对,找出药物与疾病的共同蛋白靶点。运用Cytoscape3.3.0构建"成分-靶点"网络,找出麻黄-苦杏仁的主要活性成分。运用String数据库对共同靶点进行蛋白相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)分析,找出关键靶点蛋白。运用Bioconductor对共同蛋白靶点进行基因本体论(gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,预测麻黄-苦杏仁药对治疗疾病的作用机制。通过iGemdock及AutoDockTools软件对筛选出的主要活性成分与关键蛋白靶点的最优结合模式进行分子对接。结果筛选出麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘疾病的36个有效成分和80个有效靶点。其中主要活性成分8个,包括quercetin、kaempferol、luteolin、Stigmasterol、beta-sitosterol、Glabridin、(+)-catechin、naringenin。治疗疾病的关键靶点蛋白7个,分别是TP53、IL6、EGFR、VEGFA、CASP3、ESR1、MAPK8。GO功能富集共得到1591个条目,其中生物过程(BP)占比最高,达89%。KEGG通路富集分析得到127条信号通路,涉及的主要通路为TNF signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、p53 signaling pathway、C-type lectin receptor signaling pathway。分子对接显示麻黄-苦杏仁药对的8个主要有效成分与7个关键靶点的最优结合模式都能完美对接。结论本研究显示了麻黄-苦杏仁药对可能通过调节TNF、PI3K-Akt、p53等信号通路来达到抗炎,降低气道高反应性以及气道上皮细胞损伤修复的功能,从而治疗支气管哮喘,也为后期实验验证提供了理论依据。

基于数据挖掘和网络药理学的咳嗽变异性哮喘用药规律及机制研究

目的 基于数据挖掘分析中医药治疗咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)的用药规律,运用网络药理学探索核心药物组合治疗CVA的分子机制。方法 以中国知网数据库、维普期刊数据库、万方数据库、中国生物医学文献服务系统收录的相关文献为数据来源,使用IBM SPSS 25.0软件提取相关资料并建立数据库。基于Apriori算法进行关联规则分析,通过网络药理学探究核心药物组合作用机制并借助分子对接加以验证。结果 最终纳入817篇文献,筛选出方剂129首,涉及中药266味。关联规则分析得到药物组合4组,其中置信度和提升度最高的核心药物组合“地龙-苦杏仁-麻黄”治疗CVA的关键成分为金合欢素、牛蒡子苷元、亚油酸等,核心靶点为SRC原癌基因(SRC proto-oncogene,SRC)、信号转导与转录活化因子3(signal transduction and transcription activation factor 3, STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinases 3,MAPK3)等,主要通路为神经活性配体-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、钙信号通路等。分子对接结果表明网络药理学所预测核心靶点能与核心药组关键活性成分稳定结合。结论 中医药治疗CVA核心药物组合可通过多个活性成分,作用于多靶点、多通路发挥疗效,可为后续治疗CVA药物的应用及开发提供理论基础。

麻黄-杏仁药对配方颗粒指纹图谱的建立与多成分含量测定

建立麻黄-杏仁药对配方颗粒的HPLC指纹图谱及指标性成分含量测定方法。采用Zorbax SB-C18(4.6 mm×150.0 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(0.1%磷酸+0.1%三乙胺)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为25℃。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”建立10批样品的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价及4个指标性成分的含量测定。结果显示,建立的指纹图谱及多指标成分含量测定方法符合方法学考察要求。指纹图谱共标定了9个色谱峰,指认了其中4种成分;10批麻黄-杏仁药对配方颗粒与对照图谱的相似度均大于0.900,其中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱和苦杏仁苷4种成分的平均含量分别为56.09μg/g、44.28μg/g、51.69μg/g及5.96μg/g。本研究建立的HPLC指纹图谱及4种成分同时测定的方法稳定可靠、重现性好,可用于麻黄-杏仁药对配方颗粒的质量控制。

从对“无大热”的理解谈麻杏甘石汤的临床运用

麻杏甘石汤出自《伤寒论》 ,功擅辛凉宣肺 ,平喘止咳。汉晋以降 ,临床家均以“汗出而喘 ,无大热”作为临床运用是方的重要指征 ,但对“无大热”之理解 ,诸家聚讼不休 ,莫衷一是。争论的焦点在于热之大小及有无 ,而这一焦点是围绕使用石膏而展开的。石膏治热重在辛散透热 ,非苦寒清热可比拟。仲景麻杏甘石汤之用石膏配麻黄 ,重在宣肺治咳喘 ,所谓“无大热、汗出而喘者”应包括表里均无大热或热象不甚明显及表里均无热之汗出而喘者 。

基于信息熵理论的哮喘方水提取工艺优选研究

目的应用信息熵理论优选哮喘方中防风、紫苏叶、辛夷、苦杏仁、炙麻黄5味药材的提取工艺。方法以升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、苦杏仁苷的提取率及浸膏得率为评价指标,采用信息熵赋权法确定各指标的权重系数,实现对正交试验提取工艺参数的优选。结果最佳提取工艺为10倍量水提取3次,每次1.5 h。结论优化后的提取工艺稳定可行,可为该处方的进一步开发提供数据支持。

浅谈经方三拗汤饮片炮制与临床辨证应用

古往今来,历代医家对经方"三拗汤"中药味——麻黄、苦杏仁、甘草同方异制的炮制方法一直存在不同认识。本文结合"三拗汤"饮片炮制的历史沿革和现代研究,对炮制方法与药性、化学成分及临床应用的关联性进行探讨,并对其临床饮片炮制品的合理选用及临证配伍加减情况展开论述,为本方同方异治的临床辨证应用提供参考,充分阐述"同方异制,同方异治"的中医学辨证论治思想。

《伤寒杂病论》杏仁析疑

文章归纳杏仁在《伤寒杂病论》中的用法。在治疗外感病时,麻黄杏仁联合使用,根据病位、病性的不同而灵活配伍剂量、比例和佐使药;在内伤杂病中,则主要利用杏仁降气且富含油质、质地滋润,通滋并用;在外邪闭表和邪食中阻导致的急性危重证的抢救时寓含"大气一转,其气乃散"的思想;在局部用药方面,杏仁具有良好的杀虫敛疮作用,可单独或配伍使用。

基于含药肠吸收液的麻黄-杏仁药对物质基础与作用机制分析

目的：探讨不同配比的麻黄-杏仁药对含药肠吸收液中化学成分含量-效应指标之间的关联性,初步阐明该药对的物质基础及作用机制。方法：选用U6（64）均匀设计表安排药对配比,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析麻黄-杏仁药对含药肠吸收液中主要差异性成分及其含量;观察含药肠吸收液对大鼠气管环舒张率及组织中白细胞介素-2（IL-2）,IL-4,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响;经多元线性回归分析效应指标与主要成分含量的相关性。结果：通过变量重要性投影值〉1.5找出该药对的显著性差异成分为去甲基麻黄碱（X1）,伪麻黄碱（X2）,甲基麻黄碱（X3）,苦杏仁苷（X4）;该药对能明显增加气管环的舒张率（Y1）,升高组织中IL-2（Y2）含量,降低IL-4（Y3）与TNF-α（Y4）含量;以差异性成分含量为自变量,效应指标为因变量,得回归方程分别为Y1=-4 810.119X1＋3 516.816X2-2 663.871X3-81.310X4＋33.562（r=0.937）,Y2=4 203.354X1-2 567.853X2＋1 445.790X3＋47.460X4＋237.192（r=0.996）,Y3=587.549X1-456.975X2＋366.365X3＋6.239X4＋27.519（r=0.951）,Y4=-21 958.981X1-35 885.568X2＋40 943.441X3＋944.167X4＋4 465.528（r=0.968）。结论：麻黄-杏仁药对平喘的主要物质基础为去甲基麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱和苦杏仁苷。其平喘机制与各效应成分双向调节气道舒张与收缩功能,以及改变IL-4,IL-2,TNF-α含量等有关。

麻黄-苦杏仁药对减轻大鼠气道损伤的物质基础及作用机制分析

目的：探究麻黄-苦杏仁药对减轻大鼠气道损伤的物质基础,初步探讨其作用机制。方法：雄性SD大鼠适应性饲养3 d,筛选合格后随机分为9组[正常组、模型组、地塞米松组、麻黄-苦杏仁药对不同配比组（N1~N6组）]。上午9：00开始灌胃相应药物,灌胃1 h后立即用2%氯化乙酰胆碱＋0.4%磷酸组胺引喘并记录引喘潜伏期,连续给药7 d。末次引喘后即刻麻醉,取出主气管,一部分气管用10%甲醛固定,苏木精-伊红（HE）染色观察各组气道病理学特征,另一部分气管匀浆处理,运用酶联免疫吸附法测定表皮生长因子（EGF）,诱导型一氧化氮合酶（i NOS）,内皮素-1（ET-1）的质量浓度。同批6只大鼠适应性饲养后分离出空肠、回肠肠段,制备含药肠吸收液,运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-QTOF-MS/MS）分析麻黄-苦杏仁药对含药肠吸收液中主要差异性成分及其含量。采用多元线性回归分析效应指标与主要差异性成分的相关性。结果：N1～N6组肠吸收液的差异性成分为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱和苦杏仁苷;效应指标分别为引喘潜伏期,ET-1,i NOS,EGF质量浓度以及气道病理学总评分。结论：麻黄-苦杏仁药对延长引喘潜伏期和修复气道损伤的主要物质基础为麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱和苦杏仁苷,其减少i NOS和ET-1含量、抑制EGF生成及维持较低水平NO/ET的主要有效成分为甲基麻黄碱,说明麻黄为主要药味,苦杏仁辅助其修复气道损伤,其中N3组治疗效果最佳。

双波长HPLC法同时测定麻杏止咳糖浆中5个成分含量

目的:建立同时测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸含量的高效液相色谱方法。方法:采用Thermo C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(含0.1%三乙胺和0.1%磷酸)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长分别为210 nm(麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷)、237 nm(甘草苷、甘草酸)。结果:盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸进样量分别在9.994×10^(-2)~9.994μg(r=0.999 2)、4.388×10^(-2)~4.388μg(r=0.999 0)、0.119 9~11.99μg(r=0.999 7)、6.794×10^(-2)~6.794μg(r=0.999 5)、4.308×10^(-2)~4.308μg(r=0.999 3)的范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.8%、101.4%、98.0%、98.3%、102.0%,RSD分别为1.2%、1.5%、1.7%、2.0%、0.99%。3批麻杏止咳糖浆样品中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸的含量测定结果分别为0.471~0.501、0.194~0.219、0.523~0.542、0.141~0.150、0.307~0.330 mg·mL^(-1)。结论:所建方法可用于测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸的含量。

平喘敷贴膏提取工艺优选

目的：优选平喘敷贴膏的提取工艺条件.方法：以黄芪甲苷、总多糖、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱提取量的综合评分为指标,在单因素试验基础上,通过L9（3）4正交试验考察加水量、提取时间和提取次数对提取工艺的影响.采用HPLC-ELSD测定黄芪甲苷含量,流动相乙腈-水（32∶68）;利用HPLC测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量,流动相乙腈-0.6％磷酸（3∶97）,检测波长208 nm;总多糖的含量测定采用苯酚-硫酸比色法.结果：黄芪甲苷、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和总多糖的线性范围分别为1 -17,0.2 -2,0.1-1 μg,3.27-7.63 mg·L-1.最佳提取工艺为加10倍量水回流提取3次,每次1.5h;黄芪甲苷、总多糖、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱提取量分别为0.204,0.900,1.063 g·g-1.结论：该提取工艺简单易行,重复性好,可作为评价平喘敷贴膏质量的有效方法.

基于数据挖掘和网络药理学分析社区获得性肺炎用药规律和机制

目的:基于数据挖掘分析中医药治疗社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)的用药规律及核心配伍药对,通过网络药理学分析其作用机制,为临床诊断和治疗提供科学依据。方法:检索中国知网、万方医学数据库、维普资讯等数据库相关文献,提取符合标准的方药进行数据整理、描述性统计分析、关联规则、系统聚类,筛选出核心药对。通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获取药物的有效化学成分及相应靶点,与OMIM、GeneCard、Grugbank数据库的疾病靶点形成交集靶点,构建疾病-药物-化学成分-交集靶点网络图和靶点间蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,获得核心化学成分、核心靶点,进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,并通过分子对接进行验证。结果:麻黄-杏仁为治疗CAP的核心药对。槲皮素(quercetin)、植物甾醇(stigmasterol)、柚皮素(naringenin)、甘草查尔酮B(licochalcone B)、β-谷甾醇(β-sitosterol)为其发挥药效的核心化学成分。白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝氨酸激酶B(AKT1)、IL-1β、基质金属蛋白酶9、CXCL8为其核心靶点,分子对接显示核心靶点与核心化学成分之间有较强的亲和力,PI3K/AKT信号通路为主要作用通路。结论:中药治疗CAP的经典配伍是麻黄-杏仁,具有降气、止咳、平喘的作用,并含有多种抗炎、抗病毒成分,可作用于IL-6、AKT1、IL-1β等关键蛋白靶点,参与PI3K/AKT信号通路,进而发挥缓解肺部炎症、参与气道重塑过程、改善CAP患者临床症状的作用。

基于网络药理学探讨麻黄-苦杏仁对COVID-19的干预机制

目的基于网络药理学方法预测麻黄-苦杏仁药对干预新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的作用靶点及信号通路,进而探讨潜在作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)及Swiss Target Prediction服务器筛选麻黄-苦杏仁药对相关活性成分及靶点;通过The Human Gene Database(GeneCards)数据库查找与COVID-19相关的靶点,并将两者靶点通过基因标准化后进行映射;运用Cytoscape3.7.1软件构建“化合物-靶点”网络图,使用蛋白质相互作用网络数据库(String11.0)数据库绘制蛋白互作(PPI)网络,利用功能注释生物信息学分析平台(David)数据库对有效作用靶点进行GO功能、KEGG通路富集分析。结果共筛选到40个活性成分,成分相关靶点529个,COVID-19靶点259个,药物-疾病的共同靶点44个。GO功能富集分析得到GO条目238个,其中生物过程(BP)条目169个,细胞组成(CC)条目31个,分子功能(MF)条目38个,主要涉及转录因子调控、蛋白质结合、激酶活性、炎症反应调控等。KEGG通路富集筛选得到109条信号通路,主要涉及PI3K-Akt、HIF-1、Ras、TNF等信号通路。结论麻黄-苦杏仁药对可能主要通过所含的黄酮类活性成分等作用于MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、EGFR、NFκB1等靶标,调节炎症反应、细胞凋亡、氧化应激等过程来降低肺损伤,从而达到干预COVID-19的目的。