草生欧文氏菌(E.herbicola)CSH1065质粒的重组标记及Fib基因的遗传转移

利用DNA分子克隆技术及遗传重组方法,在E.herbicola CSH1065质粒上插入了Km_R及Mob基因,利用细菌间的接合转移,使E.herbicola CSH1065质粒转移到E.coli HB101中,从而获得了E.herbicola CSH1065的Fib(fungi inhibition)基因在E.coli HB101中的表达,进一步证明E.herbicola CSH1065 Fib基因功能只涉及其细胞内的大质粒,与其染色体基因组无关,其黄色色素基因与Fib功能无关。这些结果还为DNA分子杂交方法所证实。

番茄红素的新型生产途径研究

研究利用PCR技术扩增出Erwinia herbicola的crtI基因,并连接到含强启动子Puc的表达载体pRKR5上构建表达质粒pRKR5-crtI,通过接合转移的方式将其导入光合细菌Rhodobacter sphaeroides突变株TC72中,调控氧浓度诱导工程菌累积红色色素,经HPLC和吸收光谱分析,工程菌中合成的色素为番茄红素,工程菌的生物量(干重)为2.36 g/L,番茄红素含量可达1.52 mg/g,与其他生产番茄红素的工程菌如大肠杆菌和产朊假丝酵母相比,番茄红素产量有一定程度的提高。

茶多酚对草生欧文氏杆菌抑菌功效的研究

利用紫外分光光度法和流动注射化学发光法分别测定了22种茶叶中的茶多酚含量和质量(以对超氧阴离子自由基的抑制率表示),并分析了它们的相关性,同时进行了茶多酚对草生欧文氏杆菌的抑菌试验。结果显示:茶叶的茶多酚含量和质量相关,相关系数为R2=0.934 4。其次,以茶多酚含量作为评价茶叶抗氧化性指标不够准确,应当以质量或抑菌的生物学功效作为评价茶叶的指标更为准确。第三,不经过高温以及不接触金属加工的绿茶抑菌效果最好。

欧文氏菌AEBL002菌株八氢番茄红素脱氢酶基因保守序列的克隆与同源性分析

从农田土壤中分离筛选到一株产胡萝卜素菌 AEBL0 0 2 ,提取其基因组 DNA,根据报告的八氢番茄红素脱氢酶基因设计 PCR引物 ,对 AEBL0 0 2基因组 DNA进行 RCR扩增 .扩增产物为一条大小约为 80 0 bp的 DNA片段 ,在 Genbank中对其进行同源性检索 ,发现该片段与 Erwinia uredovora八氢番茄红素脱氢酶基因在 73 2个碱基中有 96.0 3 8%的一致性 .

几种病虫害对杨木化学特征的影响

对哈尔滨及其附近地区的小青黑杨(Populus pseudo-simonii×P.nigra)在受青杨虎天牛(Xylotrechusrusticus(L))、杨树烂皮病(Cytospora chrysosperma(Pers.)Fr.)和杨树冰核细菌性溃疡病(Erwinia herbicola(Lohnis)Dye.)影响前后的化学成分进行了较系统的比较分析,结果表明:青杨虎天牛危害后除综纤维素含量明显降低外,水分、热水抽提物、1%NaOH抽提物、苯乙醇提取物和木质素等含量同健康木之间差异不显著;杨树烂皮病和杨树冰核细菌性溃疡病对小青黑杨化学成分的影响非常显著,除综纤维素含量明显下降外,水分、热水抽提物、1%NaOH抽提物、苯醇提取物和木质素等的含量均显著升高。杨树冰核细菌性溃疡病对小青黑杨化学成分的影响尤为显著。

管碟法测定苏云金杆菌上清液中增效物质含量的研究

以草生欧文氏杆菌LS0 0 5为指示菌 ,用管碟法测定苏云金杆菌KN 1 1发酵液中增效物质的相对浓度。结果表明管碟法和生物测定法在测定增效物质的代谢曲线有较好的一致性 ,均表明 ,菌株KN 1 1的增效物质在营养体时 (约 9h)开始产生 ,到芽孢初步形成时(约 2 0h)已达到最高值的 80 %以上 ,之后是一个缓慢的积累过程。

草生欧文氏菌中酪氨酸酚裂解酶的体外定向进化及结构模拟

以来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)的酪氨酸酚裂解酶(Eh-TPL)为目的基因,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,利用高通量筛选方法获得了比酶活提高的突变体S20C和E202R,再通过定点突变得到突变体S20C/E202R/N161S。经摇瓶发酵培养发现,突变体S20C/E202R/N161S比野生型Eh-TPL的比酶活提高了30.61%;酶学性质研究结果表明,突变体S20C/E202R/N161S的最适温度仍为37℃,最适pH值从8.2升至8.5,热稳定性、pH稳定性均得到明显提高;结构模拟结果表明,突变体S20C/E202R/N161S的三维结构无明显变化,突变位点附近氢键和表面电势有所变化。体外定向进化技术能有效提高Eh-TPL的催化效率,对酶法生产L-酪氨酸具有重要应用价值。

超表达草生欧文氏菌crtB基因促进转基因番茄类胡萝卜素合成的研究

利用重组PCR技术,将草生欧文细菌八氢番茄红素合成酶基因crtB与豌豆质体定位序列ts-rbcS融合,插入质粒载体PMV中,构建了植物表达载体pBI-ts-rbcS-crtB,并通过根瘤农杆菌EHA105介导转化番茄。PCR检测、Southern杂交和RT-PCR分析表明,外源基因crtB已整合到番茄基因组中,并在转基因植株中得到表达。转基因番茄果实中的类胡萝卜素总量增加1.3～2.5倍,八氢番茄红素、番茄红素、β–胡萝卜素和α–胡萝卜素分别增加了4.3、1.8、2.2和2.3倍。转化株系中内源类胡萝卜素合成基因的表达也受到广泛的影响。crtB基因过量表达有效促进了番茄果实中类胡萝卜素的合成和积累。