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Human herpesvirus 7 meningitis in an adolescent with normal immune function:A case report
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作者 Yuan-Yuan Zhen Jing Yang Pei-Yuan Liao 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2024年第18期3636-3643,共8页
BACKGROUND Human herpesvirus type 7(HHV-7)is a less common herpes virus that usually causes mild,self-limiting illnesses.However,in recent years,there have been increasing reports of HHV-7 causing serious central nerv... BACKGROUND Human herpesvirus type 7(HHV-7)is a less common herpes virus that usually causes mild,self-limiting illnesses.However,in recent years,there have been increasing reports of HHV-7 causing serious central nervous system infections,especially meningitis.The pathogenesis and clinical features of HHV-7 meningitis,particularly in adolescents with normal immune function,remain incompletely studied.Therefore,the purpose of this report is to share a case of HHV-7 meningitis in an immunocompetent adolescent with a view to deepening our understanding of the disease.CASE SUMMARY A 12-year-old female was admitted with fever,headache,and vomiting.4 d before admission,the patient developed a fever without obvious induction,with a temperature up to 39.5℃,no convulsions,accompanied by chills,headaches,fatigue,and no muscle aches.The patient was treated with fever reduction,which could be reduced to 38℃;repeated high fever,accompanied by vomiting 7-8 times;and no abdominal pain or diarrhea.The patient was diagnosed with"acute suppurative tonsillitis"in a local hospital,and the blood routine was generally normal.The patient was given symptomatic support treatment such as"ceftriaxone sodium"and antiemetic rehydration for 2 d,and his condition did not improve.The patient's physical examination showed pharyngeal congestion,bilateral tonsil grade I hypertrophy,regression of purulent secretions,and cervical resistance.Ocular B-ultrasound:Opacity of the vitreous body and edema of the optic disc in both eyes.Optical coherence tomography examination showed that the macular fovea was generally normal in both eyes,with edema of the optic disc.DNA virus monitoring results:HHV-7.We gave ganciclovir antiviral therapy,dexamethasone anti-inflammatory treatment,mannitol to reduce cranial pressure,omeprazole to protect gastrointestinal mucosa,and calcium and potassium supplementation.CONCLUSION This study reports a case of HHV-7 meningitis in an adolescent with normal immune function.Through comprehensive analysis of the clinical manifestations,laboratory tests,and treatment methods of the patient,it is found that early identification and antiviral treatment are essential for the outcome of the disease.This case suggests that despite normal immune function,adolescents may still suffer from herpes virus type 7 meningitis,so clinicians should be vigilant and take effective treatment measures in time. 展开更多
关键词 Human herpesvirus 7 meningitis Immune function Immune deficiency Central system infection Case report
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KSHV/HHV8阳性嗜生发中心淋巴组织增殖性疾病的临床病理观察
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作者 谢飞来 张丽娜 +4 位作者 叶显宗 邓琳 欧阳小娟 徐宝卿 曲利娟 《诊断病理学杂志》 2023年第1期75-77,共3页
Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)也被称为人疱疹病毒8(HHV8),是一种噬淋巴病毒,与原发性渗出性淋巴瘤(PEL)、多中心Castleman病(MCD)、HHV8阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL,NOS)、嗜生发中心淋巴组织增殖性疾病(GLPD)等疾病相关。GLPD是一... Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)也被称为人疱疹病毒8(HHV8),是一种噬淋巴病毒,与原发性渗出性淋巴瘤(PEL)、多中心Castleman病(MCD)、HHV8阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL,NOS)、嗜生发中心淋巴组织增殖性疾病(GLPD)等疾病相关。GLPD是一种罕见疾病,世界卫生组织于2017年[1]收纳分类。它具有独特的临床特征,同时感染EB病毒(EBV)和HHV8以及具有噬生发中心生长的倾向是它的主要特征。 展开更多
关键词 kshv/HHV8 EBV 嗜生发中心 淋巴组织增殖性疾病
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鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增(RAA)检测方法的建立及应用
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作者 陈曦 杨金先 葛均青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期234-240,共7页
为建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)的实时荧光重组酶辅助扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法,根据AngHV的ORF 95基因序列设计引物和探针,优化反应温度,确定反应时间,并应用该方法对采集的临床样品进行... 为建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)的实时荧光重组酶辅助扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法,根据AngHV的ORF 95基因序列设计引物和探针,优化反应温度,确定反应时间,并应用该方法对采集的临床样品进行检测。结果表明:本研究中建立的实时荧光RAA检测方法的最佳反应温度为39℃,反应时间为20 min;实时荧光RAA检测方法的灵敏度、特异性及重复性评价显示,RAA检测AngHV的最低检测量为1×10^(2)copies/μL,可特异性地检测AngHV,与美洲鳗鲡腺瘤病毒(American eel adomavirus,AEAdoV)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus,RGV)、鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)和对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)均无交叉反应;实时荧光RAA检测方法的组内和组间变异系数均小于5%,表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好;应用该方法对采集的25份临床样品进行检测显示,实时荧光RAA检测方法与qPCR方法的检出率一致,均为92%,高于普通PCR的检出率(76%)。研究表明,本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增RAA检测方法快速、灵敏、可靠、准确,可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 鳗鲡疱疹病毒(AngHV) 实时荧光RAA 快速检测
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含HIV-1 Vif基因重组慢病毒表达载体的构建及其对KSHV裂解性周期复制影响的初探 被引量:4
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作者 王平 黄敏 卢春 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期286-290,355,共6页
目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen... 目的:利用慢病毒表达载体将HIV-1Vif基因导入原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞BCBL-1中使之持续表达目的蛋白Vif,并检测Vif对其中潜伏KSHV裂解性周期复制的影响。方法:自表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒载体pHAGE-Vif,利用脂质体将其与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况;收集培养上清经0.45μm滤器过滤后即获得病毒悬液。梯度稀释法测定病毒滴度,感染293T细胞,48h或72h后进行RT-PCR和Western blot检测Vif基因的转录和表达情况。以MOI为1.0的病毒量感染靶细胞BCBL-1,利用Westernblot技术检测Vif蛋白的表达,同时检测KSHVvIL-6和Rta的蛋白表达水平,初步探讨Vif对KSHV复制的影响。结果:限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带Vif基因的慢病毒表达载体,滴度为4×107efu/ml。以MOI为1.0的重组慢病毒感染靶细胞BCBL-172h后,能够检测到外源基因Vif的蛋白表达。Western blot结果初步显示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平。结论:成功构建了含Vif基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染BCBL-1细胞,并在其中大量表达目的蛋白。初步结果提示,Vif能够下调vIL-6和Rta的蛋白表达水平,对KSHV裂解性周期复制可能起到抑制作用。 展开更多
关键词 慢病毒 VIF kshv 病毒复制
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含KSHV vIL-6基因重组分泌型表达载体的构建及其分泌蛋白对内皮细胞增殖和血管生成能力影响的初探 被引量:5
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作者 朱小飞 秦娣 卢春 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期283-288,共6页
目的:构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-assoliated herpesvirus,KSHV)致瘤基因vIL-6的重组分泌型质粒,将其导入内皮细胞系EA.hy926中进行表达,并检测vIL-6对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响。方法:根据本实验室先前... 目的:构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-assoliated herpesvirus,KSHV)致瘤基因vIL-6的重组分泌型质粒,将其导入内皮细胞系EA.hy926中进行表达,并检测vIL-6对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响。方法:根据本实验室先前构建的pvIL-6 F表达载体中的核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增vIL-6基因,经双酶切纯化后将其克隆入分泌型真核表达载体pSecTag2B中。重组质粒经核酸测序鉴定后转染EA.hy926细胞,以Western blot检测vIL-6基因的表达情况;另外收集重组分泌型质粒转染293T细胞后的上清,通过细胞增殖实验和微管形成实验分别检测vIL-6通过自分泌或旁分泌方式对内皮细胞增殖和血管生成作用的影响。结果:限制性内切酶鉴定和基因测序证实成功构建了含KSHV vIL-6基因的重组分泌型质粒pSecTag2B-vIL-6,此质粒转染EA.hy926细胞后,Western blot能够在相应位置检测到目的蛋白vIL-6的条带。通过将pSecTag2B-vIL-6瞬时转染EA.hy926细胞或者收集pSecTag2B-vIL-6转染293T细胞后的上清作用于EA.hy926细胞,均观察到细胞增殖和血管生成能力的明显增强。结论:成功构建了重组分泌型质粒pSecTag2B-vIL-6;目的蛋白可在EA.hy926细胞中表达,且vIL-6能够通过自分泌和旁分泌方式促进内皮细胞的增殖和血管生成。 展开更多
关键词 kshv vIL.6 分泌型 细胞增殖 血管生成
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KSHV ORF73C基因原核表达产物的纯化与免疫原性分析 被引量:1
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作者 汤巧 卢春 +3 位作者 黄丽 钱超 曾怡 张玲 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期364-366,共3页
目的 纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒 (KSHV)潜伏相关核抗原 (LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性。方法 含重组质粒pGEX 6p 1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL2 1经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。用glutath... 目的 纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒 (KSHV)潜伏相关核抗原 (LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性。方法 含重组质粒pGEX 6p 1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL2 1经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。用glutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后 ,以重组 3C蛋白酶对融合蛋白进行解离 ,SDS PAGE对表达及纯化产物进行鉴定。以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清 ,建立ELISA检测其免疫原性。结果 SDS PAGE显示蛋白条带大小分别为 4 90 0 0和 2 30 0 0 ,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致 ;ELISA检测显示 ,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清 2倍以上。结论 成功获得了纯化的ORF73C蛋白 ,经ELISA显示其有较强免疫原性。 展开更多
关键词 C蛋白 免疫原性 纯化 原核表达产物 C基因 免疫小鼠 核抗原 IPTG 诱导表达 SDS-PAGE
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HHV6感染激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的溶解性周期复制 被引量:1
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作者 曾怡 卢春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期93-100,共8页
运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行... 运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行细胞融合形成异核体细胞。②将HHV6感染的JJhan细胞与BCBL-1细胞进行混合培养。③收集HHV6感染的JJhan细胞培养上清液作为条件培养基进行灭活处理,以灭活前后的条件培养基培养BCBL-1细胞。进一步离心纯化HHV6病毒颗粒,并感染BCBL-1细胞,分别设紫外线和热灭活的HHV6病毒颗粒感染BCBL-1细胞为对照。提取上述的实验细胞总RNA,RT-PCR和/或实时定量(Real—time)PCR检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)次要衣壳蛋白编码基因ORF26mRNA转录。结果显示:①细胞融合后15h开始出现明显细胞病变,RT-PCR检测不同时间的实验组ORF26mRNA转录水平均明显高于对照组;Real—timePCR检测各时间ORF26mRNA转录水平是对照组的2.3倍以上;②细胞混合培养72h时,实验组ORF26mRNA转录水平是对照组的1.8倍;混合培养5天时,实验组KSHV裂解周期蛋白K8.1表达水平是对照组的2.46倍;③灭活前后的HHV6感染细胞培养上清液培养BCBL-1细胞96h时,ORF26mRNA转录水平分别是对照组的2.73倍和2.22倍;④灭活前后的HHV6均可增强BCBL-1细胞中KSHVORF26mRNA转录水平。提示:HHV6感染可激活KSHV的溶解性周期复制。 展开更多
关键词 感染 对照组 细胞 卡波济肉瘤 MRNA转录 灭活 疱疹病毒 ORF2 PCR检测 性周期
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KSHV编码的趋化因子vMIPII在小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应中的作用 被引量:1
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作者 郑红 苏青和 +7 位作者 孙志成 冯文稀 曹川 曹红卫 赵静怡 钟白玉 卫国 吴军 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第8期648-649,共2页
目的 重组vMIPII在大肠杆菌中表达及其纯化。观察纯化的vMIPII蛋白对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应的抑制作用。方法 以 pET3 2a为vMIPII克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌BL2 1(DE3 ) plysS为表达菌 ,诱导表达出硫氧还蛋白 vMIPII的... 目的 重组vMIPII在大肠杆菌中表达及其纯化。观察纯化的vMIPII蛋白对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应的抑制作用。方法 以 pET3 2a为vMIPII克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌BL2 1(DE3 ) plysS为表达菌 ,诱导表达出硫氧还蛋白 vMIPII的融合蛋白 (2 6× 10 3 D)。经金属离子亲和吸附、肠激酶消化以游离vMIPII、阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白。纯化的vMIPII从尾静脉连续 14d注入异体皮肤移植小鼠 (昆明鼠 /Balb/c)。结果 从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 4mg。注射vMIPII的异体皮肤移植小鼠组移植皮存活时间较未注射对照组延长 7d。结论 纯化的重组vMIPII对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应有明显的抑制作用 。 展开更多
关键词 kshv 趋化因子 vMIPⅡ 小鼠 异体皮肤移植 免疫排斥反应
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维吾尔族Kaposi’s肉瘤患者组织中KSHV-vFLIP表达水平与患者临床特征相关性 被引量:3
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作者 王鹏 冯燕艳 +1 位作者 张泽高 马云霞 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1120-1122,1191,共4页
目的探讨维吾尔族卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)患者皮损组织内KSHV-vFLIP基因表达水平与临床特征的相关性。方法选取29例维吾尔族卡波西肉瘤患者和12例血管瘤(hemangioma)患者、11例健康对照患者皮损石蜡包埋组织,反转录-聚合酶链... 目的探讨维吾尔族卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)患者皮损组织内KSHV-vFLIP基因表达水平与临床特征的相关性。方法选取29例维吾尔族卡波西肉瘤患者和12例血管瘤(hemangioma)患者、11例健康对照患者皮损石蜡包埋组织,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析KSHV-vFLIP基因mRNA表达水平。结果 KS患者KSHV-vFLIP基因表达水平(4.436±0.508)显著高于健康对照组(1.145±0.112,P<0.05),其中斑块型组KSHV-vFLIP基因表达水平(8.104±2.225)显著高于结节型组(3.971±0.371,P<0.05)和斑片组(2.774±0.867,P<0.05)。而KS组(4.436±0.507)与血管瘤组(6.343±0.949)差异无统计学意义(P>0.05),且HIV携带组(3.739±0.816)与非HIV携带组(4.618±0.604)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在维吾尔族卡波西肉瘤患者组织中,KSHV-vFLIP基因表达水平与瘤体体积正相关。 展开更多
关键词 卡波西肉瘤 kshv-vFLIP基因 实时荧光定量 石蜡包埋 瘤体体积
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含KSHV vIL-6基因原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与鉴定 被引量:1
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作者 葛高霞 王平 卢春 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2010年第3期244-247,共4页
目的:在大肠埃希菌中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6基因,并进一步纯化和鉴定表达蛋白。方法:以本实验室已构建的重组质粒pGEX-6p-1-vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,将PCR产物克隆... 目的:在大肠埃希菌中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)vIL-6基因,并进一步纯化和鉴定表达蛋白。方法:以本实验室已构建的重组质粒pGEX-6p-1-vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,将PCR产物克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建vIL-6的重组原核表达质粒pET-32a(+)-vIL-6。将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。表达产物通过镍亲和层析柱纯化并经蛋白质印迹法鉴定。结果:限制性内切酶检测和基因测序证实,成功构建了含有vIL-6基因的原核表达载体。蛋白质印迹法结果显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中His-Tag融合蛋白得到了表达,亲和层析法纯化后获得了相对分子质量为43 000的vIL-6融合蛋白。结论:重组质粒pET-32a(+)-vIL-6能在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍亲和层析柱可纯化获得融合蛋白。 展开更多
关键词 病毒白细胞介素6基因 原核表达 融合蛋白 卡波济肉瘤相关疱疹病毒
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牡蛎疱疹病毒结构蛋白真核表达系统构建及多聚化特性
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作者 曹书华 魏茂乐 +4 位作者 李永仁 黄博闻 辛鲁生 白昌明 王崇明 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期63-72,共10页
牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡,成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t),构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统,并对... 牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡,成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t),构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统,并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行分析。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列,根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果,选择pCDNA3.1(+)构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后,利用转染试剂Lipo8000™将pCDNA3.1(+)-orf 104与pCDNA3.1(+)-orf 33分别单独或共转染至HEK293t。然后,将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示,实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体,通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明,表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染,共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体,其中,ORF33自身即可形成分子质量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达,为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作,以及病毒入侵机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 牡蛎疱疹病毒 核衣壳蛋白 真核表达系统 蛋白多聚化
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长链非编码RNA(lncRNA)-MSTRG.22610.1对BHV-1体外复制影响的研究
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作者 姜坤生 王禹淳 +2 位作者 马金柱 于立权 宋佰芬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期278-284,299,共8页
本研究室前期将牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染牛肾细胞(MDBK),通过转录组测序筛选到了转录显著差异的长链非编码RNA-MSTRG.22610.1(lncRNA-MSTRG.22610.1),为了探究其在MDBK中对BHV-1复制的影响,本研究采用CCK-8法筛选对细胞无毒性的聚凝... 本研究室前期将牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)感染牛肾细胞(MDBK),通过转录组测序筛选到了转录显著差异的长链非编码RNA-MSTRG.22610.1(lncRNA-MSTRG.22610.1),为了探究其在MDBK中对BHV-1复制的影响,本研究采用CCK-8法筛选对细胞无毒性的聚凝胺、嘌呤霉素的最佳浓度;将重组慢病毒r ZHLV-U6-Zs Green1-puro-MSTRG.22610.1和r ZHLV-U6-Zs Green1-puro(对照慢病毒)按照不同的MOI分别感染MDBK细胞,48 h后观察荧光,采用Image J软件检测并计算各慢病毒感染细胞后出现绿色荧光细胞的比率,出现绿色荧光细胞的比率达80%的细胞对应的MOI即为最佳MOI。筛选结果显示聚凝胺与嘌呤霉素的最佳工作浓度分别为5μg/mL及3μg/m L,慢病毒感染的最适MOI为80。将r ZHLV-U6-Zs Green1-puro-MSTRG.22610.1和对照慢病毒分别以最佳条件感染MDBK细胞并培养及传代,传至8~10代,每代均观察细胞形态及细胞中的绿色荧光,并通过RT-q PCR检测第6、8、10代细胞中lncRNA-MSTRG.22610.1的转录水平,以构建并鉴定稳定表达lncRNA-MSTRG.22610.1的MDBK细胞系1T及对照细胞系1NC。结果显示,每代1T细胞、1NC细胞的状态均良好并均与阴性对照MDBK细胞的形态无差别,且每代1T及1NC细胞均出现绿色荧光。RT-q PCR结果显示,与1NC及阴性对照细胞相比,1T细胞系中lncRNA-MSTRG.22610.1的转录水平极显著升高(P<0.0001)。表明获得了高水平表达lncRNA-MSTRG.22610.1却不影响细胞增殖的细胞系,且该细胞系的遗传稳定性较强。将BHV-110倍倍比稀释后分别感染传至10代的1T与1NC细胞,24 h后采用Reed-Muench法计算各组细胞中的病毒滴度。结果显示,1T、1NC及MB细胞(感染BHV-1的MDBK细胞)的病毒滴度分别为105.15 TCID50/0.1 m L、104.41TCID50/0.1 m L及104.58 TCID50/0.1 m L。与MB和1NC细胞相比,1T细胞中的病毒滴度显著升高(P<0.05),表明lnc RNA-MSTRG.22610.1表达后促进BHV-1在MDBK细胞中的复制。本研究为进一步探究lncRNA-MSTRG.22610.1促进病毒复制的分子机制及深入了解BHV-1感染的分子机制提供参考依据。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 牛肾细胞 牛疱疹病毒I型 慢病毒过表达 病毒增殖
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人类伪狂犬病毒感染性脑炎的诊断与治疗
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作者 王晓娟 蒋玙舒 +3 位作者 秦灵芝 张弥兰 王佳伟 李玮 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期203-207,共5页
自2017年至今,我国已报道28例人类伪狂犬病毒感染性脑炎病例,临床主要表现为发热、头痛、癫痫发作、局灶性神经功能缺损、意识障碍等,病残率和病死率较高。伪狂犬病毒主要通过接触感染的动物或其排泄物或者经血液传播,患者多为生猪产业... 自2017年至今,我国已报道28例人类伪狂犬病毒感染性脑炎病例,临床主要表现为发热、头痛、癫痫发作、局灶性神经功能缺损、意识障碍等,病残率和病死率较高。伪狂犬病毒主要通过接触感染的动物或其排泄物或者经血液传播,患者多为生猪产业链从业者。早期诊断、及时干预对预后至关重要。本文综述人类伪狂犬病毒感染性脑炎的诊断与治疗进展,以提高临床诊断与治疗水平。 展开更多
关键词 疱疹病毒1型 脑炎 病毒性 综述
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KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定 被引量:1
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作者 许常青 陈伟 +2 位作者 方圆 汪小五 王林定 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1417-1420,共4页
目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究。方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe I酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体p CDHCMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将... 目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究。方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe I酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体p CDHCMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒p MDL-PRRE、pRSV-Rev和p MD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Western blot法检测K15P蛋白的表达。结果经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106TU/ml滴度为慢病毒。结论成功构建了KSHV K15P慢病毒表达载体p CDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P基因 慢病毒
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kshv-mir-k12-1-5p相关基因在卡波西肉瘤中的表达 被引量:1
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作者 张静 吴秀娟 普雄明 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第10期1044-1047,共4页
目的探索kshv-mir-k12-1-5p相关基因在卡波西肉瘤(KS)组织中的表达意义。方法通过在线miRNA靶基因软件Mirbase、Miranda和Targetscan寻找kshv-mir-k12-1-5p的靶基因。通过GO和KEGG分析靶基因的信号通路及通路上的关键基因。使用免疫组... 目的探索kshv-mir-k12-1-5p相关基因在卡波西肉瘤(KS)组织中的表达意义。方法通过在线miRNA靶基因软件Mirbase、Miranda和Targetscan寻找kshv-mir-k12-1-5p的靶基因。通过GO和KEGG分析靶基因的信号通路及通路上的关键基因。使用免疫组化的方法检测靶基因、关键基因(kshv-mir-k12-1-5p相关基因)在卡波西肉瘤组织的表达。结果 kshvmir-k12-1-5p的靶基因为CDKN1A,CDKN1A信号通路为Cell cycle通路,通路下游关键基因为Cyclin D1、Cyclin E。CDKN1A、Cyclin D1、Cyclin E在肿瘤组织与瘤旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),CDKN1A在卡波西肉瘤中的阳性表达率低于瘤旁组织(P<0.05),Cyclin D1、Cyclin E在卡波西肉瘤中的阳性表达率高于瘤旁组织(P<0.05);在KS中Cyclin D1与年龄相关(P<0.05),Cyclin E与民族相关(P<0.05);在KS中CDKN1A与Cyclin D1、Cyclin E均呈负相关(P<0.05)。Cyclin D1与Cyclin E呈正相关(P<0.05)。结论 kshv-mir-k12-1-5p的相关基因:CDKN1A、Cyclin D1、Cyclin E表达异常在KS发生、发展中具有重要的作用。 展开更多
关键词 卡波西肉瘤 kshv-mir-k12-1-5p CDKN1A CYCLIND1 CYCLINE
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EBV相关肿瘤和健康人群BALF2基因序列分析
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作者 于彩霞 赵梦鹤 +2 位作者 肖华 王云 刘雯 《青岛大学学报(医学版)》 CAS 2024年第1期67-71,共5页
目的探讨BALF2基因的多态性及其分布特征与EB病毒(EBV)相关肿瘤发生发展的关系。方法采用巢式PCR结合DNA测序的方法,对349例EBV阳性标本进行DNA序列分析,利用Lasergene软件将其与EBV标准株B95-8序列进行比对,并生成系统发生树,对基因变... 目的探讨BALF2基因的多态性及其分布特征与EB病毒(EBV)相关肿瘤发生发展的关系。方法采用巢式PCR结合DNA测序的方法,对349例EBV阳性标本进行DNA序列分析,利用Lasergene软件将其与EBV标准株B95-8序列进行比对,并生成系统发生树,对基因变异型进行分类。结果根据系统发生树将BALF2分为5个基因型BALF2-A、BALF2-B、BALF2-C、BALF2-D和BALF2-E。其中,BALF2-E在鼻咽癌中的检出率高于健康人群,中国南方鼻咽癌人群BALF2-E的检出率高于北方鼻咽癌人群(χ2=10.26,P<0.01)。结论BALF2基因存在多态性,其变异类型分布与肿瘤类型、地域有关,BALF2-E亚型与鼻咽癌发生相关。 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 多态性 单核苷酸 淋巴瘤 胃肿瘤 鼻咽癌
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重组腺病毒表达载体介导艾滋病毒Vif蛋白调控KSHV潜伏感染的初探
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作者 贾雪梅 王平 +1 位作者 秦娣 卢春 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期13-20,共8页
目的:利用AdEasy腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型(艾滋病毒:HIV-1)病毒体感染性因子(Vif)的重组腺病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系BCBL-1细胞,并检测Vif蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcomaassociated... 目的:利用AdEasy腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型(艾滋病毒:HIV-1)病毒体感染性因子(Vif)的重组腺病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系BCBL-1细胞,并检测Vif蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcomaassociated herpesvirus,KSHV)潜伏感染与裂解性复制的影响。方法:从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成pAdTrack-Vif,酶切线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化感受态BJ5183细胞构建成重组腺病毒质粒。重组腺病毒在AD293细胞中得到包装和扩增。用荧光计数法测定腺病毒滴度,以感染复数(MOI)为1的病毒量感染靶细胞BCBL-1,荧光显微镜观察靶细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)技术分别检测Vif基因在靶细胞中的转录和表达情况,而且采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测KSHV裂解期基因ORF26 mRNA转录及裂解期蛋白vIL-6的表达。结果:经酶切鉴定、核酸序列测定、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功包装了携带HIV-1 Vif基因的重组腺病毒,滴度为2.5×108 TU/ml。重组腺病毒感染BCBL-1细胞48 h后,80%以上的细胞中表达GFP,RT-PCR和Western blot均能够在相应位置检测到目的基因Vif的条带。Real-time PCR和Western blot结果显示,Vif降低KSHV ORF26 mRNA转录水平及vIL-6蛋白表达。结论:成功包装了含HIV-1 Vif基因的重组腺病毒且在BCBL-1细胞中表达的HIV-1 Vif蛋白能够抑制KSHV裂解性复制、增强病毒的潜伏感染。 展开更多
关键词 腺病毒:HIV-Vif kshv 病毒复制
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KSHV K15P及其突变体的慢病毒包装与稳定细胞株的筛选及其对内皮细胞增殖迁移的影响 被引量:1
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作者 周畅 许常青 +5 位作者 许方玮 方圆 陈伟 文志 林康 王林定 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1765-1770,共6页
目的包装包含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P及其突变体K15P(YF)基因的慢病毒颗粒,并对此基因在EA.hy926细胞内稳定表达进行研究。方法通过PCR方法扩增获得KSHV K15P、K15P(YF)基因片段,使用限制性内切酶Not I与BamH I酶切和TA克隆法构... 目的包装包含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P及其突变体K15P(YF)基因的慢病毒颗粒,并对此基因在EA.hy926细胞内稳定表达进行研究。方法通过PCR方法扩增获得KSHV K15P、K15P(YF)基因片段,使用限制性内切酶Not I与BamH I酶切和TA克隆法构建T载体与慢病毒表达载体pHAGE-CMV-MCS-K15P-Puro、pHAGE-CMV-MCS-K15P(YF)-Puro,通过lip2000将构建好的慢病毒表达载体与两种辅助包装质粒PSPAX2和pMD2.g共转染HEK 293T细胞,48 h后收集慢病毒。慢病毒感染EA.hy926细胞并通过嘌呤霉素筛选稳定表达株,Western blot检测K15P与K15P(YF)蛋白的表达。Transwell与CCK8实验检测K15P对内皮细胞的增殖迁移影响。结果成功构建慢病毒表达载体,筛选出稳定表达K15P、K15P(YF)蛋白的EA.hy926细胞。在EA.hy926细胞Transwell迁移实验中,与空载体组和K15P突变体组(0.98±0.23)比较,K15P组(2.25±0.15)的EA.hy926细胞的迁移能力明显增强(P<0.01),三组细胞迁移量差异有统计学意义(F=113.5,P<0.01);CCK8增殖活性实验中,与空载体组和K15P(YF)组(109.23±12.58)比较,K15P组(138.69±7.47)的EA.hy926细胞的增殖能力明显增强(P<0.01),三组细胞增殖活性差异有统计学意义(F=40.78,P<0.01)。结论K15P蛋白增强了内皮细胞的增殖与迁移,而K15P(YF)突变体的促进细胞增殖迁移能力减弱,提示K15P蛋白可能在KS的发生发展中参与重要作用。 展开更多
关键词 卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P K15P(YF) 慢病毒 EA.hy926
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KSHV包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A和gL的克隆及真核表达 被引量:1
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作者 徐华国 卢春 +4 位作者 程林 曾怡 秦娣 吕志刚 陈秀英 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期502-506,共5页
目的:克隆并在293T细胞中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A与gL。方法:以BCBL-1细胞总DNA为模板,用PCR方法扩增出K8.1和gL基因;以BCBL-1细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出K8.1A基因。将PCR产物... 目的:克隆并在293T细胞中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A与gL。方法:以BCBL-1细胞总DNA为模板,用PCR方法扩增出K8.1和gL基因;以BCBL-1细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出K8.1A基因。将PCR产物克隆进真核载体pcDNA3.1(+)内,分别构建含K8.1、K8.1A和gL基因的重组真核表达质粒。重组质粒转染293T细胞,用Westernblot的方法检测K8.1和K8.1A在293T细胞中的表达;RT-PCR方法检测gL基因在293T细胞中的转录。结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的K8.1、K8.1A和gL基因与GenBank中已登记的KSHVK8.1、K8.1A和gL基因序列100%同源。Westernblot结果显示,在约35ku位置有目的条带,与预期的重组K8.1和K8.1A蛋白大小一致。RT-PCR结果显示约在500bp位置检测到特异性条带。结论:KSHVK8.1、K8.1A和gL编码基因在293T细胞中获得正确表达。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 包膜糖蛋白编码基因 真核表达
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疱疹病毒利用宿主蛋白高效复制机理及其抑制剂研究进展
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作者 田文骏 游婧铃 王晓佳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期90-96,共7页
疱疹病毒的入侵、转录和蛋白合成等多个生命活动,都需要利用宿主细胞蛋白和微环境进行。该过程一般会导致细胞蛋白的合成和降解、修饰、细胞定位改变,以及与其他蛋白相互作用等一系列变化。本文从病毒感染引起的细胞凋亡和自噬体系、泛... 疱疹病毒的入侵、转录和蛋白合成等多个生命活动,都需要利用宿主细胞蛋白和微环境进行。该过程一般会导致细胞蛋白的合成和降解、修饰、细胞定位改变,以及与其他蛋白相互作用等一系列变化。本文从病毒感染引起的细胞凋亡和自噬体系、泛素-蛋白酶体系、核-质转运体系、生物合成体系和病毒诱导的先天免疫反应几个层面,综述病毒劫持或干扰细胞正常生命活动的研究进展,探讨病毒与宿主细胞的相互作用关系,并对目前抗疱疹病毒药物靶点和机制进行总结,以期为设计新型抗病毒制剂提供资料。 展开更多
关键词 疱疹病毒 细胞凋亡 细胞自噬 核质转运 蛋白翻译 抗病毒药物
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