利用28S rDNA Ⅰ型内含子研究琅琊山球孢白僵菌菌株的遗传多样性

通过四对引物对89株采自琅琊山的球孢白僵菌菌株进行PCR扩增,得到17类不同的单倍型,其中以BBBA型最多,占39.33%,而BABB型等其他9种单倍型较少,各占1.12%。该地区单倍型种类占已发现类型的57.7%,这说明在固定时间内同一地区的菌株也有较为丰富菌株类型,种群遗传结构是多样化的。具有较广寄主谱的BBBA型菌株是该地区的优势菌株,可作为生防菌株的重点筛选对象。

灰葡萄孢菌nit突变体的诱导及其在营养体亲和性测定中的应用初探

从山西运城、临汾、长治、晋中、大同等地保护地黄瓜灰霉病病株上采集、分离的分属于 3个不同菌丝融合群的 8个灰葡萄孢菌单孢菌株 ,经氯酸盐诱导处理 ,共获得了抗氯酸盐的硝酸盐利用缺陷突变体 (nit突变体 ) 5 9株 ,其中nit1型 38株 ,nit3型 10株 ,nitM型 11株。所有nit突变株分别在PDA斜面转管培养 3次 (2 1d)后 ,除 6株恢复成野生菌株外 ,其余多数nit突变菌株表现稳定。来源于同一野生菌株的不同类型nit突变体间或同一菌丝融合群不同野生菌株的nit突变体间可产生互补反应而形成异核体 ,其中以nitM型突变株互补性最好 ,在利用nit突变体测定灰葡萄孢菌营养体亲和性时应作为标准菌株。来源于不同菌丝融合群的nit突变体间不能产生互补反应。

球孢白僵菌种群野生菌株异核现象的分子验证

球孢白僵菌28S rRNA基因D11域由于一内含子的存在与否,引起这一区域的扩增产物有两种片段类型(约520bp及120bp),将此作为分子标记分析了球孢白僵菌的117个菌株,发现17%菌株的扩增产物为双片段类型,即为异核体。异核体在不同种群中的分布频率因地理生态条件而异。单孢分离分析表明,异核体的分离频率约为35%。RAPD检测结果说明异核体在准性循环中发生了不同程度的遗传交换及遗传重组。球孢白僵菌异核体在继代培养中极不稳定。

草菇PGAM基因克隆、结构及其在同核、异核菌株中的表达量分析

以福建农林大学菌物研究中心保存的草菇单孢菌株PYd21、PYd15及二者的杂交配对异核菌株H15-21为研究材料,利用本中心草菇的基因组、转录组及表达谱测序数据,对草菇磷酸甘油酸变位酶(PGAM)基因进行基因克隆,并对其结构与表达量进行研究。克隆测序了PYd21与PYd15中PGAM基因并进行比对,比对结果表明2个菌株的PGAM基因序列一致。利用转录组数据对PGAM基因结构进行分析,分析结果显示:该基因全长2 118bp,含有10个外显子、9个内含子,其中6个内含子存在内含子保留的可变剪切类型;开放阅读框(ORF)全长1 611bp、编码536个氨基酸。数字基因表达谱分析结果表明,PGAM基因在PYd21、PYd15及H15-21中的标准表达量分别为35.29、127.91、302.89TPM(Transcript Per Million Clean Tags),表达量依次升高,与菌丝生长速度显著正相关,且异核菌株H15-21中的表达量显著高于2个单孢菌株,暗示了异核体H15-21中两种不同的细胞核存在相互作用,影响了PGAM基因的表达。采用实时荧光定量PCR技术对基因表达量进行验证,与表达谱数据相符合。

尖孢镰刀菌异核体及其不同核型分离子的孢子萌发时期同工酶分析

在获得尖孢镰刀菌棉花萎蔫专化型异核体菌株及其 3个稳定的不同核型分离子的基础上 ,选择孢子萌发时期的幼嫩菌丝制备粗酶提取液 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行了 7种同工酶分析。结果表明 ,酯酶和乳酸脱氢酶电泳图谱在 4个样品中完全一致 ;没有致病能力的菌株在葡萄糖 - 6-磷酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的表达量高于致病力强的菌株 ;致病力强的菌株没有乙醇脱氢酶的表达。在

香菇正反双单杂交后代的遗传分析

选用香菇的杂交菌株农１与野生株Ｑ进行正反双单杂交，得到６个杂交后代。结果表 明：３个正交菌株与３个反交菌株在酯酶同工酶与ＤＮＡ水平上具有极高的相似性，而对杀菌 剂和温度的敏感性显示了明显的遗传差异，且农艺性状遗传差异也十分显著。正反杂交菌株在 核基因相同情况下的遗传差异应主要归于细胞质差异。本研究表明，香菇双单杂交后代是同质 异核体。

米曲霉原生质体融合及杂合二倍体的形成

采用混合酶液处理纤维素酶高产苗株３０４２＿（Ｎ－２）（天冬酰胺缺陷型“Ａｓｎ￣－”）及蛋白酶高产菌株３０４２＿（Ｎ－１９）（蛋氨酸缺陷型“Ｍｅｔ￣－”）的营养菌丝，获得原生质体，以ＰＥＧ为助融剂进行融合处理，成功地获得了米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）原生质体的营养互补融合。将异核体菌落的菌丝转接到合有０．１％樟脑的新鲜ＭＭ上，２５℃诱导培养７─１５天，挑取绿色角变菌落的孢子，将其转接到ＭＭ上能迅速生长，经孢子大小及ＤＮＡ含量测定确定为杂合二倍体，并进行酶活测定比较。

天水地区高山、半山和川区小麦条锈菌夏孢子多核率研究

为了明确天水地区不同海拔高度对小麦条锈菌变异的影响,对采自天水地区高山、半山、川区的感病品种上的条锈菌夏孢子进行了染核观察。结果表明,小麦条锈菌夏孢子的多核率以高山区最多(0.55%),半山区次之(0.50%),川区最少(0.42%)。选取8个夏孢子多核率高于1%的菌系,在高感品种铭贤169上分别进行继代培养,测定供试菌系每代夏孢子的多核率。有些夏孢子多核率下降较快,如97-33等3个菌系,有些夏孢子多核率下降较慢,如97-44等5个菌系。

双孢蘑菇原生质体同核体及杂交异核体的RAPD分析

本研究以双孢蘑菇原生质体同核体及杂交异核体为材料,用5对随机双引物进行RAPD分析。结果表明,RAPD反应扩增出的特异DNA谱带能够将原生质体同核体与异核体出发菌株以及杂交异核体与同核体亲本明显区别开来。因此,RAPD分析是一种快速有效的手段,能够在双孢蘑菇的遗传研究和菌种改良中发挥重要作用。

真菌营养不亲和研究进展

阐述了真菌营养不亲和的研究技术、遗传基础及其应用现状,认为营养不亲和是由异核体不亲和(het)位点控制的,并对真菌营养不亲和用于鉴定菌株的准确性做了探讨。

棉枯萎病菌异核体及其不同表型分离子在基因转录水平上的差异

采用银染mRNA差异显示技术 ,研究了棉花枯萎病菌异核体菌株 (Ag14 9)及其两个不同表型分离子(Ag14 9 Ⅰ和Ag14 9 Ⅲ )之间差异表达的基因 ,观察到在 3 0 0～ 70 0bp之间出现了 19个差异条带 ,经反向RNA印迹 ,证实其中 2条差异带为阳性 :编号为C6的差异条带在Ag14 9和Ag14 9 Ⅰ菌株中呈高表达 ,而编号为G5的差异条带在菌株Ag14 9和Ag14 9 Ⅲ中呈高表达。这两条差异片段经测序后在GenBank中分别进行同源比较 ,发现由C6片段编码的氨基酸序列与多种生物 (包括动物、植物和微生物 )NADH脱氢酶的第 6个亚基有不同程度的同源性 (3 0 %～70 % ) ;而编码G5片段的氨基酸序列与龟裂链霉菌 (Streptomycesrimosus)的OtrB(tetracyclineeffluxprotein)蛋白有 3 5%的同源性。首次证明在异核体菌株及其不同表型分离子之间存在基因转录水平差异 。

棉花枯萎病菌异核体不同核型分离子表观特性及其核DNA的RAPD分析

切割野生型棉花枯萎病菌Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum菌落的菌丝尖端，得到菌株Ag149，该菌株是一个异核体，其菌落出现明显角变，自角变处经单孢分离和继代培养，得到三种表观性状稳定的分离子：Ag149-I、Ag149-II和Ag149-III。它们在色素产生、菌落质地、孢子产量以及致病性上存在明显差异，但对这三种核型分离子核DNA进行RAPD分析，未发现明显差异。

大丽轮枝菌微菌核形成能力的遗传

带有硝酸盐利用缺陷型遗传标记的大丽轮技菌Verticilliumdahliae黑色菌核型和白色菌丝型菌株在25℃下配对培养,形成野生型融合菌落带,对融合带的分生孢子后代进行遗传分析的结果表明,融合带中的异核体表现不稳定,分布不均匀。微菌核遗传因子可随亲本细胞质在异核体中的运动和交换而发生迁移。

真菌异核体不亲和性机理研究进展

异核体不亲和性是普遍存在于真菌中的一种生物学现象,由特定的不亲和性位点所控制。从真菌异核体不亲和性分子机理的研究进展以及不亲和融合细胞死亡过程和相关蛋白的关系展开论述。对真菌异核体不亲和性机理的深入研究,将有助于揭示生物中非己识别系统的演化规律,并为解决原生质体融合子的不稳定性探索出有效的方法和途径。

草菇测序菌株杂交子H1521菌丝对非生物胁迫的耐受性

采用生长速度测定法,对草菇异核体菌丝H1521进行非生物胁迫耐受能力的测定.结果表明,H1521菌丝在p H=4、p H=11、0.3 mol·L-1Na Cl、10 mmol·L-1H2O2等胁迫条件下生长受到明显抑制但不致死,适合作为草菇应答非生物胁迫机制研究的胁迫条件;将菌丝置于4℃低温短时间处理后放回35℃进行培养还可正常生长,但在处理1 h后与空白对照出现显著性差异,4℃胁迫1 h适合作为后期低温胁迫机制研究的备选条件.

蛹虫草(Cordycepsmilitaris)无性型的多型现象

在萨氏琼脂和PDA上，蛹虫草Cordycepsmilitaris（Vuill）Fr.无性型，蛹草拟青霉Paecilomycesmilitaris(Kob）Br.＆Sm．的一些单孢子株可自发产生突变，基于多型现象及其它形态特征可分三种类型：（1）具野生型菌株特征；产孢结构拟青霉型（Paecilomyces－type），稳定，菌落通常不自发产生角变，大多数单孢子株属此类群。（2）属此类群的单孢子株，在PDA上可形成亮褐色至橙黄色的角变，它们典型的产孢结构为瓶梗轮生，分生孢子常聚集成头状的轮枝孢型（Verticillium－type）。在查氏培养基上则相反，拟青霉型的产孢结构占优势。单孢子株Cm-71是这一类群的代表。（3）单孢子株Cm－42是在所观察单孢子株中形态特征独特的菌株。在PDA上菌丝生长纤细，蛛网状，产孢结构轮枝孢型。蛹草拟青霉对氯酸钾（KClO3）不敏感，在浓度为6％（W／V）的KMM培养基上，23～24℃14天菌落的直径仅1～2cm，无气生菌丝生长。各单孢子株形成的不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的途径和形态特征，也可分成类似于粉被虫草CordycepspruinosaPeteh不利用硝酸盐突变株（nit突变株）的三种类型。

蝉拟青霉菌株间营养亲和性的初步研究

从云南、贵州两地采集的7个蝉拟青霉Paecilomyces cicadae(M iquel)Sam son菌株上分离出32个单孢子菌株,在含质量浓度20g.L-1氯酸盐的培养基上25℃左右培养5d,结果表明,菌落的多个角度出现不同形态特征的角变,可以分成3种类型。从这3种类型中选取了110个角变转接到MM培养基上观察其营养利用情况,最后共获得了抗氯酸盐的不利用硝酸盐突变菌株(n it突变体)60株,没有角变类型的专一对应关系。然后把这60株n it突变体在MM培养基上,25℃左右经配对组合培养21d进行营养亲和分析,结果显示,只有来自北回归线站云南墨江哈尼族自治县的7个n it菌株有营养亲和现象,其他菌株内或菌株间皆不亲和。菌落融合区菌丝经荧光染色观察,大量存在双核和多核细胞菌丝以及“H”型菌丝接合现象,未发现存在双核或多核分生孢子。

蝉拟青霉异核体菌株和亲本菌株对蚜虫致病力的研究

从蝉拟青霉T-1上分离获得的6个单孢子菌株,经过诱发、分离、鉴定,保存了7个nit突变株,并通过营养亲和试验筛选出蝉拟青霉异核体菌株55-57、56-57、58-57,以及稳定性好的亲本菌株55、56、57、58,比较分析各菌株对蚜虫的致病力以及胞外多糖的含量,数据显示55-57、56-57、58-57菌株的LT50、LT90较低,而且它们的胞外多糖含量稳定且高于55、56、57、58各亲本菌株。说明胞外多糖与高致病性有相关性,是影响致病力的因素。