短链脂肪酸乙酸钠减轻低氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞系HK2损伤

目的研究短链脂肪酸乙酸钠对低氧/复氧(H/R)导致人肾小管上皮细胞系(HK2)的保护作用及作用机制。方法体外建立H/R细胞模型,经乙酸钠(SA)提前预处理HK2细胞2 h,CCK8试剂盒检测细胞存活率,试剂盒检测炎性因子、细胞活性氧和ATP产量;流式细胞术测定线粒体膜电位(MMP)和线粒体氧化应激产物(mitoSOX)浓度;电镜观察线粒体超微结构;Western blot检测炎性信号通路IκB-α/NF-κB和线粒体能量障碍信号通路AMPK/PGC-1α的表达;结果与对照组相比,H/R组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞内ROS、mitoSOX、炎性因子表达显著升高(P<0.05),线粒体超微结构严重受损,ATP含量和MMP显著降低(P<0.05),p-IκB-α,NF-κB-p-P65蛋白表达显著升高,p-AMPK和PGC-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与H/R组相比,乙酸钠显著增加HK2细胞的存活率(P<0.05),抑制细胞内ROS、mitoSOX和炎性因子的释放,抑制线粒体超微结构损伤,ATP和MMP的下降(P<0.05),同时促进p-AMPK和PGC-1α蛋白表达,抑制p-IκB-α和NF-κB-p-P65蛋白表达(P<0.05)。结论乙酸钠通过抑制IκB-α/NF-κB、激活AMPK/PGC-1α信号通路对H/R诱导的HK2细胞发挥抗炎、抗氧化应激、线粒体结构和功能的保护作用。

子痫前期孕妇血清LAIR2、HK2水平及其诊断、妊娠结局预测价值

目的 探究子痫前期孕妇血清白细胞相关免疫球蛋白样受体-2(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-2,LAIR2)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)水平对子痫前期的诊断价值和对产妇妊娠结局的预测价值。方法 按照巢式病例对照研究的方法选择2020年5月至2022年3月在延安市人民医院产检并分娩的800例孕妇作为观察队列,其中有88例孕妇最终确诊为子痫前期,纳入研究组,根据妊娠结局分为不良组和正常组;并筛选与之年龄、孕周相匹配的60例未发生子痫前期的健康孕妇作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测前期留存的各组孕妇血清LAIR2、HK2水平,同时收集各组孕妇的基线资料,比较组间差异;Pearson法分析LAIR2与HK2表达的相关性;绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清中LAIR2、HK2水平对子痫前期的诊断价值以及对妊娠结局的预测价值。结果 研究组孕妇血清LAIR2、HK2水平显著低于对照组(P<0.05);子痫前期妊娠结局不良组血清LAIR2、HK2水平显著低于正常组(P<0.05);子痫前期孕妇血清LAIR2、HK2水平呈正相关(r=0.248,P<0.05)。血清LAIR2、HK2诊断子痫前期的ROC曲线下面积分别为0.738、0.822,敏感性分别为65.91%、80.68%,特异性均为75.00%,截断值分别为5.22μg/L、24.57 ng/L;血清LAIR2、HK2预测子痫前期孕妇妊娠结局的ROC曲线下面积分别为0.738、0.768,敏感性分别为87.50%、65.62%,特异性分别为55.36%、80.36%,截断值分别为5.00μg/L、20.09 ng/L。结论 子痫前期孕妇血清LAIR2、HK2表达水平均下调,两者表达呈正相关,对子痫前期具有一定的诊断价值,且对子痫前期孕妇的妊娠结局具有一定的预测价值。

HK2在初治急性髓系白血病患者骨髓中的表达及对预后的影响

目的:检测HK2基因在初治急性髓系白血病(AML)骨髓中的表达水平并探讨其对患者临床特征及预后的影响。方法:采用RT-q PCR法检测90例初治AML患者骨髓中HK2基因的表达情况,并与18例异基因造血干细胞移植供者进行对比,进一步分析HK2基因的表达水平与临床特征及预后的关系。结果:相较于正常对照组,初治AML组的HK2基因表达量显著增高(P<0.01);相较于2个疗程诱导化疗达到总反应(OR,完全缓解+完全缓解伴血细胞不完全恢复)的患者,未达到OR的患者HK2基因的表达量显著增高(P<0.05);2个疗程诱导治疗是否达到OR的患者HK2基因相对表达量比较存在显著差异(P<0.001);HK2高表达患者中位生存时间显著短于HK2低表达患者(P<0.05);Cox多因素分析结果显示,预后分层、HK2基因表达量、2个疗程诱导治疗是否达到OR均是AML患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论:初治AML患者骨髓中HK2基因的表达水平相较于异基因造血干细胞移植供者显著升高,高表达HK2基因患者预后较差,HK2基因表达量是AML患者预后的独立影响因素。

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides,Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性,筛选最佳高糖干预浓度;检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol,Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril,Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性,筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)和Ly294002(PI3K抑制剂)组(50 mmol/L葡萄糖+50μmol/L Ly294002)分别干预48 h。荧光染色法和流式细胞术检测各组HK2细胞凋亡情况,Western blot法检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR的表达。结果 与对照组相比,50 mmol/L葡萄糖组HK2细胞活性最差(P<0.000 1);相比于高糖组,100μmol/L Act组细胞活性最强(P<0.000 1)。与对照组和甘露醇组相比,高糖组TUNEL阳性表达增加,凋亡细胞数量增加(P<0.05),Bcl-2表达降低,Bax,cleaved Caspase-3,p-mTOR,p-AKT表达均升高(P<0.05);相比于高糖组,Act组和Cap组TUNEL阳性表达减少,凋亡细胞数量减少(P<0.05),Bcl-2表达升高,Bax、cleaved Caspase-3、p-mTOR和p-AKT表达均降低(P<0.05);相比于高糖组,Act组和Ly294002组Bcl-2表达增加,Bax、Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论 Act可以通过抑制AKT/mTOR信号通路的激活减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡。

非小细胞肺癌组织HK2、PKM2蛋白表达与术后复发的临床关系分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)蛋白表达情况及其与术后复发的临床关系。方法回顾性分析在本院行手术治疗的165例NSCLC患者的临床资料。采用免疫组化法检测NSCLC组织与癌旁组织标本HK2、PKM2蛋白表达情况。术后均随访24个月,比较NSCLC组织HK2、PKM2蛋白阳性表达患者与阴性表达患者术后复发情况,并采用Cox回归模型分析法分析NSCLC组织中HK2、PKM2蛋白表达与NSCLC患者术后复发的关系。结果NSCLC组织中HK2、PKM2蛋白阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。术后随访24个月,患者复发率为41.21%(68/165);NSCLC组织HK2、PKM2蛋白阳性表达患者术后复发率高于阴性表达患者(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,中/低分化、临床分期Ⅲ期、淋巴结转移、术后化疗周期≤4个周期、NSCLC组织中HK2及PKM2蛋白阳性表达均是NSCLC患者术后复发的独立危险因素(HR=3.615、4.909、6.443、4.166、3.904、3.773,P<0.05)。结论HK2、PKM2蛋白在NSCLC组织中均呈阳性表达,且与患者术后短期复发有一定的相关性,其阳性表达可能会增加NSCLC患者术后复发的风险。

LncRNA MALAT1调控miR-200b-3p/HK2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及糖酵解的影响

目的:长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)参与多种癌症进展,但lncRNAs肺腺癌转移相关转录子1(metastasis associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的生物学作用尚不清楚。本研究探讨lncRNA MALAT1调控微RNA(microRNA,miR)-200b-3p/己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)对NPC细胞增殖、侵袭、迁移及糖酵解的影响。方法:将NPC细胞系CNE-2分为对照组、小干扰(si)-阴性对照(negative control,NC)组、si-MALAT1组、si-MALAT1+抑制剂(inhibitor)-NC组、si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组,real-time PCR检测各组细胞MALAT1、miR-200b-3p表达;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印迹法和分光光度法分别检测细胞增殖、凋亡、HK2蛋白表达及糖代谢水平;双荧光素酶实验验证MALAT1、miR-200b-3p和HK2的关系。结果:与对照组、si-NC组比较,si-MALAT1组CNE-2细胞中miR-200b-3p表达升高、MALAT1、HK2表达降低,细胞增殖能力降低,细胞凋亡升高,葡萄糖消耗、乳酸生成均降低(均P<0.05);与si-MALAT1组、si-MALAT1+inhibitor-NC组比较,si-MALAT1+miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p表达降低,MALAT1、HK2表达升高,细胞增殖能力升高、细胞凋亡降低,葡萄糖消耗、乳酸生成均升高(均P<0.05)。MALAT1与miR-200b-3p、miR-200b-3p与HK2之间存在靶向调控关系。结论:沉默表达MALAT1可能通过上调miR-200b-3p来下调HK2表达,从而抑制CNE-2细胞增殖、迁移与侵袭及其糖酵解水平,其有望成为NPC治疗的潜在靶点。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

山奈黄酮醇抑制HK2/LDHA依赖的糖酵解通路减轻大鼠肝缺血-再灌注损伤

目的 探讨山奈黄酮醇(KM)对大鼠肝缺血-再灌注损伤(HIRI)的影响和与己糖激酶2(HK2)依赖的糖代谢重编程的关系。方法 采用随机数表法将60只SPF级雄性SD大鼠分为五组:假手术组(Sham组)、肝缺血-再灌注损伤组(HIRI组)、HIRI+山奈黄酮醇预处理组(KM组)、HIRI+山奈黄酮醇+己糖激酶激活剂Hexokinase预处理组(KM+Hex组)和HIRI+Hexokinase预处理组(Hex组)。通过选择性肝门阻断法制备大鼠HIRI模型,KM组、KM+Hex和Hex组于HIRI建模前3 d每日分别腹腔注射KM 50 mg/kg、Hexokinase 20 mg/kg。HIRI模型建立6 h后麻醉处死大鼠,并采集肝脏和下腔静脉血液样本,ELISA法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、白细胞介素-6(IL-6)和肝组织核因子p65亚基(p65)活性,化学比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和丙酮酸含量,蛋白质凝胶电泳实验检测HK2、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α(p-AMPKα)蛋白表达量,HE染色观察肝脏组织病理改变,免疫组织化学染色后评估肝脏凋亡蛋白裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达水平。结果 与Sham组比较,HIRI组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、活性升高[ALT(μg/L):46.3±7.2 vs.106.4±18.3;AST(μg/L):61.8±9.7 vs.190.8±26.1;TBil(μg/L):4.62±0.68 vs.21.23±2.85;IL-6(ng/L):39.8±6.9 vs.209.3±30.1;MDA(U/gprot):10.61±2.12 vs.28.40±4.21;乳酸/丙酮酸比值:11.5±3.1 vs.61.7±8.9;p65(%):0.97±0.11 vs.3.85±0.54],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.161.8±20.4;p-AMPKα:0.56±0.09 vs.1.14±0.15],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显升高(HK2:0.61±0.09 vs.0.16±0.03;LDHA:0.85±0.11 vs.0.38±0.05;cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs.1.09±0.13)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻;与HIRI组比较,KM组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性降低[ALT(μg/L):106.4±18.3 vs.71.6±10.4;AST(μg/L):190.8±26.1 vs.111.7±17.9;TBil(μg/L):21.23±2.85 vs.12.34±1.91;IL-6(ng/L):209.3±30.1 vs.96.5±14.8;MDA(U/gprot):28.40±4.21 vs.18.26±2.70;乳酸/丙酮酸比值:61.7±8.9 vs.27.8±5.3;p65(%):3.85±0.54 vs.2.20±0.31],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达升高[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.115.4±16.8;p-AMPKα:0.56±0.09 vs.0.83±0.12],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显降低(HK2:0.61±0.09 vs.0.40±0.07;LDHA:0.85±0.11 vs.0.51±0.09;cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs.2.66±0.39)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻;与HIRI组比较,KM+Hex组和Hex组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性升高,肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低,HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达升高(P<0.05),肝细胞损伤变性进一步加重。结论 山奈黄酮醇预处理可抑制HK2/LDHA通路减轻HIRI诱导的糖酵解增强,抑制NF-κB介导的炎性反应和氧化应激,改善肝细胞损伤、凋亡。

miRNA-30b-3p靶向ZNRF1调控草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激的研究

目的探索miRNA-30b-3p靶向ZNRF1调控草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激的研究并探讨其作用机制。方法将0.2、0.6μmol/L的草酸钠处理HK-2细胞,miR-30b-3p mimic和miR-30b-3p inhibitor及其相对应的对照物转染到HK-2细胞,CCK-8、Transwell和划痕实验分别检测HK-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;流式细胞术测量细胞内ROS,ELISA法检测LDH、MDA、GSH活性,蛋白质印迹分析Bax、Bcl-2的表达情况;荧光素酶报告基因检测验证miRNA-30b-3p及ZNRF1之间的靶向关系;RNA免疫沉淀分析miRNA-30b-3p及ZNRF1之间的作用关系。结果草酸钠处理HK-2显著增加ROS,LDH和MDA水平,GSH含量明显降低(P<0.01),抑制HK-2细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,与草酸钠的浓度呈现剂量依赖关系,miR-30b-3p促进草酸钠诱导对HK-2细胞的影响;靶标预测和荧光素酶测定表明ZNRF1是HK-2细胞中miR-30b-3p的直接靶标,且沉默ZNRF1逆转miR-30b-3p对草酸钠诱导的HK-2细胞损伤的影响。结论miRNA-30b-3p靶向ZNRF1促进草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激,抑制其增殖、侵袭和迁移。

铁皮石斛通过GLUT4和HK2对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制

目的 研究铁皮石斛通过葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和己糖激酶2(HK2)对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制。方法 采用MTT法检测铁皮石斛提取物对人肺癌细胞A549活力的影响,并分析A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量;建立LLC肺癌细胞荷瘤小鼠模型,设立对照组、灌胃铁皮石斛提取物低剂量组及高剂量组,观察各组小鼠体重变化和肿瘤生长,通过免疫印迹法(Western blot)检测铁皮石斛提取物对A549细胞、肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4、HK2和PKM2蛋白表达水平的影响。结果 与空白对照组相比,25.0~800.0 mg/L铁皮石斛提取物作用于A549细胞的活力呈剂量依赖性降低(P<0.05),且能够明显降低A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量(P<0.05);肺癌荷瘤小鼠体内实验结果表明,200.0 mg/kg和400.0 mg/kg铁皮石斛提取物能够抑制肺癌荷瘤小鼠体内肿瘤生长,并且不引起小鼠体重变化,表现出良好的药物安全性;铁皮石斛提取物能够下调A549细胞和肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4和HK2蛋白表达,对PKM2表达影响不明显。结论 铁皮石斛提取物治疗肿瘤的作用,可能与下调GLUT4和HK2、抑制肿瘤组织糖酵解有关。

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨高良姜总黄酮对铅诱导HK-2细胞损伤的保护作用

目的 探讨高良姜总黄酮对铅(Pb)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤的保护作用。方法 体外培养HK-2细胞,MTT法检测不同质量浓度高良姜总黄酮和Pb对HK-2细胞活力的影响。设置对照组、高良姜总黄酮对照组、模型组和高良姜总黄酮组,除对照组和高良姜总黄酮对照组外各组均给予200μmol/L Pb诱导细胞损伤,同时高良姜总黄酮对照组和高良姜总黄酮组给予100μg/mL高良姜总黄酮干预24 h。通过Hoechst 33258荧光染色法联合annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光显微镜法观察Pb诱导及高良姜总黄酮干预对细胞内ROS水平的影响,试剂盒法检测细胞内氧化应激指标ROS、MDA、GSH水平和GSH-Px、CAT、SOD活性,ELISA法检测细胞培养上清液IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western bolt法检测细胞Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,高良姜总黄酮(12.5~200μg/mL)对HK-2细胞活力没有显著影响。与模型组比较,高良姜总黄酮可减少Pb诱导HK-2细胞的凋亡(P<0.05),减轻细胞皱缩等细胞凋亡形态学变化,上调细胞内SOD、CAT、GSH-Px活性及GSH水平(P<0.05),降低细胞内MDA、ROS水平(P<0.05),上调Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论 高良姜总黄酮可能通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关蛋白表达,对Pb诱导HK-2细胞损伤起保护作用。

己糖激酶2在胶质瘤中的表达及与预后的关系

目的 探讨己糖激酶2(HK2)在胶质瘤中的表达及与预后的关系。方法 分别从癌症基因组图谱(TCGA)数据库和中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库下载胶质瘤HK2 mRNA表达数据集及相对应患者的临床资料进行分析,比较不同世界卫生组织(WHO)分级、性别、巢蛋白(NES)mRNA表达量、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变状态、染色体1p/19q共缺失情况、ATRX突变状态胶质瘤患者的HK2 mRNA表达情况。利用UCSC Xena等在线工具网站,采用Kaplan-Meier法绘制HK2 mRNA高表达组和低表达组患者的生存曲线。将HK2mRNA表达水平与已知的生物标志物表达水平或突变情况联合分析,根据其表达水平/突变情况分别分为4个亚组,比较患者的生存情况。结果 相较于正常组织,HK2 mRNA在胶质瘤组织中高表达;相较于低级别脑胶质瘤(LGG),胶质母细胞瘤(GBM)中HK2 m RNA表达量更高。在TCGA和CGGA数据库中,WHO分级为Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的胶质瘤患者HK2 mRNA的表达水平不同,随着胶质瘤WHO分级升高,HK2 mRNA表达增加(P﹤0.05)。IDH野生型和IDH突变型、染色体1p/19q共缺失和非共缺失胶质瘤患者HK2 mRNA表达水平比较,差异均有统计学意(P﹤0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,在CGGA数据库中,HK2 mRNA高表达组胶质瘤、LGG、GBM患者的生存率均低于HK2 mRNA低表达组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。HK2 mRNA高表达与NES mRNA高表达、IDH1未突变、ATRX未突变提示更差预后。结论 HK2 mRNA的表达与胶质瘤的恶性程度有关,HK2 mRNA高表达患者生存率较低,HK2 mRNA可作为胶质瘤患者预后的预测指标。

人参养荣汤对Lewis肺癌糖酵解途径相关酶LDH-A、HK2基因表达的影响

目的探究人参养荣汤对Lewis肺癌细胞糖酵解途径中乳酸脱氢酶-A (lactate dehydrogenase-A,LDH-A)和己糖激酶2 (hexokinase-2,HK2)基因表达的影响。方法 SPF级雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为空白组10只,实验组50只。于实验组小鼠右侧前肢腋下接种Lewis肺癌细胞(LLC)悬液建立Lewis肺癌模型,模型建立后将实验组小鼠随机分为模型组、CTX组(环磷酰胺组)、人参养荣汤低剂量组、人参养荣汤中剂量组、人参养荣汤高剂量组,每组10只。造模次日计为第1天,空白组和模型组用生理盐水灌胃,CTX组腹腔注射环磷酰胺,人参养荣汤各剂量组使用相应浓度中药灌胃,持续干预21 d。小鼠于第22天采用脱颈椎法处死,完整剥离小鼠的肿瘤、胸腺和脾脏,测定各组小鼠体质量、瘤质量、抑瘤率、胸腺指数、脾指数,采用qRT-PCR检测LDH-A和HK2 mRNA的表达水平。结果与模型组相比,CTX组小鼠体质量明显降低(P<0.01);与CTX组相比,人参养荣汤高、中、低剂量组小鼠体质量显著上升(P<0.01)。与模型组相比,人参养荣汤高剂量组小鼠的瘤质量、胸腺指数、脾指数显著下降(P<0.01);人参养荣汤高剂量组和CTX组LDH-A mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);人参养荣汤高、中、低剂量组HK2 mRNA表达差异无统计意义。与CTX组相比,人参养荣汤中剂量组LDH-A mRNA表达水平升高(P<0.05),人参养荣汤中剂量组HK2 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论人参养荣汤能够通过下调糖酵解途径LDH-A的基因表达,从而减缓肺癌细胞的糖酵解进程。

HK2基因表达与泌尿系肿瘤的发生、免疫细胞浸润及预后的相关性分析

目的:利用数据库和生物信息学的方法分析己糖激酶2(HK2)在泌尿系肿瘤中表达水平、预后及与肿瘤免疫细胞浸润的相关性.方法:研究HK2在癌组织和癌旁组织mRNA表达水平,其表达水平与肿瘤预后的相关性,分析HK2表达水平与肿瘤免疫细胞浸润、免疫细胞标志物表达水平、肿瘤微环境免疫细胞和基质细胞浸润的相关性.结果:HK2表达在泌尿系肿瘤组织中均显著性升高,在膀胱癌(BLCA)中随肿瘤分级增加而降低,在高级别肾乳头状细胞癌(KIRP)和前列腺癌(PRAD)中HK2表达水平显著高于低级别表达水平;BLCA和肾透明细胞癌(KIRC)中HK2低表达的患者总体生存率显著低于高表达患者,而KIRP中则相反.HK2表达水平与BLCA和KIRP中多数免疫细胞浸润水平无明显相关性,与KIRC和PRAD中多数免疫细胞浸润水平呈显著正相关.与免疫细胞标志物表达相关性分析发现,HK2在BLCA中表达与免疫细胞标志物表达呈显著负相关,而在KIRC、KIRP和PRAD中大多呈显著正相关.HK2在BLCA和KIRC中表达水平与肿瘤微环境呈显著正相关,在PRAD和KIRP中则无显著相关性.结论:HK2表达水平与BLCA、KIRC和KIRP患者的预后相关;HK2表达水平与免疫细胞浸润性、免疫细胞标志物表达、肿瘤微环境免疫细胞和基质细胞浸润等相关.

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

目的探讨白藜芦醇苷(polydatin,PD)对缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法在缺氧仓中充入95%N2、5%CO2混合气体模拟缺氧环境,将人近曲肾小管上皮细胞(human kidney proxi-mal tubular epithelial cell,HK2)根据不同处理分为4组:正常对照组、H/R组、PDTC组和PD处理组,除对照组外每组均予以先缺氧24h后复氧6h处理;MTT法检测细胞成活数,免疫组化法检测NF-κBp65蛋白表达情况,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA转录,ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H/R组,统计学差异显著(P<0.05)。PD处理组NF-κBp65蛋白阳性表达,ICAM-1 mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组,有统计学差异(P<0.05)。PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异(P>0.05)。结论PD对H/R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用。

血清hK2 ELISA方法的建立及在前列腺癌诊断中的应用

目的通过建立血清hK2 ELISA检测方法,探讨血清hK2水平对前列腺癌的诊断意义,为临床鉴别前列腺癌与前列腺增生提供一种特异、敏感、实用的方法.方法利用hK2单克隆抗体建立检测血清hK2水平的ELISA方法,并利用本实验建立的方法对30例前列腺癌患者,26例前列腺增生患者,30例正常对照的血清进行hK2水平的检测.结果 1)血清hK2水平测定值(A450nm)分别为:a.前列腺癌组(0.701±0.113);b.前列腺增生组(0.212±0.145);c.正常对照组(0.198±0.015).前列腺癌组血清hK2水平与前列腺增生、正常对照组相比较有显著差异(P<0.01).2)本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法的敏感度为83.3%,特异度为94.6%,准确度为87.2%.结论 1)前列腺癌患者血清hK2水平与前列腺增生患者及正常人血清hK2水平差异显著,不存在重叠.血清hK2水平能够对前列腺癌、前列腺增生进行鉴别诊断.2)在鉴别前列腺癌和前列腺增生方面,本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法,与临床上应用的病理学诊断方法符合率高,具有临床实用价值.

重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭新西兰兔左心功能的影响

目的观察重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭(CCHF)新西兰白兔左心功能的影响。方法采用腹主动脉缩窄术建立新西兰兔CCHF模型,利用超声心动图评价静脉注射hk2a前后不同时段兔左心功能的变化情况,并设立对照组进行比较。结果hk2a能够在给药后即刻明显增加实验兔的左室射血分数(P<0.05),作用时间持续60 min以上(P<0.05)。与西地兰治疗相比具有起效快、作用强等特点。结论新型海葵肽类毒素hk2a能够明显改善CCHF新西兰兔的左心功能。

HK2在肝癌中的差异表达及其对肝癌细胞的影响

目的探究己糖激酶2(HK2)在肝癌组织中的差异表达及其对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法收集48例肝癌组织及对应的癌旁组织,免疫组化检测HK2表达量;Western blot法检测人肝癌细胞Hep G2及正常肝细胞L-02中HK2表达量。统计并分析HK2表达与肝癌临床病理特征关系。构建4个HK2小发卡RNA(shRNA)载体,Western blot法检测干扰效率,选择沉默最优的建立稳定转染的细胞株。针对空白组(正常培养、未转染质粒)、control shRNA组(转染control shRNA)、HK2 shRNA组(转染shRNA_3) Hep G2细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡。结果 HK2在肝癌组织中表达显著升高,其表达与肿瘤直径、TNM分期、组织病理分级存在相关性。HK2表达的降低可显著降低Hep G2细胞增殖活性,使得细胞周期发生明显转变,更少停滞在S期;显著升高Hep G2细胞凋亡率。结论HK2表现出了较强的抗肿瘤潜能,具有一定的临床意义,为将来基于HK2进行肝癌临床诊断、预后判断及分子靶向治疗提供新的思路和理论依据。

补阳还五汤对高盐致HK2细胞凋亡保护作用机制研究

目的 探究补阳还五汤水提物冻干粉对高盐诱导的人肾小管上皮细胞(HK2)损伤的保护作用。方法 采用高盐(150 mmol/L)干预HK2细胞,诱导细胞损伤,通过加入不同剂量的补阳还五汤(0.5%、1%、2%)作用后,分别采用细胞增殖毒性检测法(CCK-8法)检测补阳还五汤对细胞的保护作用,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧表达,ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果 与空白组相比,高盐组细胞数目明显减少,形态出现异常改变,同时培养液中漂浮细胞明显增多,细胞活性显著降低(P<0.05);细胞凋亡结果显示,高盐组细胞凋亡比例显著提高(P<0.05);ROS检测结果表明,高盐组细胞ROS表达显著增高(P<0.05);ELISA检测结果表明,高盐组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量显著降低。与高盐组相比,补阳还五汤可以显著促进细胞增殖,抑制ROS表达及高盐诱导的细胞凋亡反应,减少IL-1β、IL-18等反应(P<0.05),治疗作用呈现一定的剂量依赖性。结论 补阳还五汤能够抑制高盐诱导的HK2细胞凋亡而发挥细胞保护作用。

HK2通过Akt1/p-Akt1上调Cdc42表达促进宫颈癌细胞迁移和侵袭

目的:探究己糖激酶2(HK2)通过Akt1/p-Akt1/Cdc42促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:G418压力筛选并获取稳定表达HK2蛋白的HeLa和SiHa细胞系;Western blot和细胞免疫化学鉴定HK2蛋白在HeLa和SiHa细胞系中的表达水平;细胞划痕实验检测HK2对HeLa和SiHa体外划痕愈合能力的影响;Transwell迁移、侵袭实验检测HK2对HeLa和SiHa细胞体外迁移和侵袭能力的影响;GEPIA数据库分别分析宫颈癌中HK2的表达与Akt1、Cdc42表达的相关性;Western blot检测Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HK2过表达的HeLa细胞和SiHa细胞中的表达情况;在HK2过表达的HeLa、SiHa细胞中应用Akt1/p-Akt1抑制剂MK2206观察Cdc42的表达及细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:成功构建HK2稳定表达的HeLa、SiHa细胞系;过表达HK2促进了HeLa、SiHa细胞的划痕愈合能力,促进了HeLa、SiHa细胞的体外迁移和侵袭;GEPIA在线数据库结果显示在宫颈癌中HK2表达与Akt1、Cdc42表达均呈正相关;过表达HK2上调了Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HeLa、SiHa细胞中的表达;在HK2过表达HeLa、SiHa细胞中,MK2206的使用抑制了HK2对Cdc42表达上调及细胞迁移和侵袭的促进作用。结论:HK2可能通过Akt1/p-Akt1途径上调Cdc42蛋白的表达促进HeLa和SiHa细胞的迁移和侵袭。