基于超高效液相色谱串联质谱法特征肽检测技术的阿胶鉴别与6种动物异源性成分检查

目的 建立同时检测阿胶中马、牛、猪、骆驼、羊、鹿6种动物皮异源性成分的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法。方法 阿胶粉末加1%碳酸氢铵溶液超声溶解,滤过,采用胰蛋白酶酶解15 h。采用UPLC-MS/MS法,以阿胶特征肽段质荷比(m/z)539.8→924.3和驴源特征肽m/z 570.5→698.1、马源寡肽A m/z 386.4→377.3、牛皮特征肽A m/z 641.2→726.3、猪皮特征肽m/z 774.5→1 035.7、骆驼皮特征肽m/z 603.8→281.8、羊皮特征肽m/z 553.0→450.8、鹿皮特征肽m/z 733.1→962.5作为检测离子对,电喷雾电离(ESI)离子源、正离子模式进行多反应监测(MRM),对10批药用阿胶、6批食品级阿胶样品进行质量评价。结果 所选各动物源特征肽段均只在对应动物皮胶中检出,方法专属性强;方法灵敏度符合质量控制要求;酶解重复性、进样精密度及样品稳定性均满足方法学验证要求,结果的RSD均小于9.0%(n=6)。6批食用级阿胶样品中均未检出阿胶成分,判定主要成分为牛皮源、骆驼皮源、马皮源、猪皮源成分。8批药用阿胶检出阿胶成分,其中1批阿胶成分含量偏低,1批检出马皮源成分;2批药用阿胶未检出阿胶成分,判定为假冒产品。结论 所建立的6种动物皮胶检测方法的专属性强、灵敏度高,可用于阿胶鉴别及掺假杂皮胶的检测。

高效液相色谱法同时测定阿胶糕中的多种防腐剂

目的:构建一种高效液相色谱检测方法,实现阿胶糕中水杨酸、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸4种常见防腐添加剂的同时测定。方法:食品样品经过提取、除蛋白等预处理步骤。采用Kromasil C18色谱柱对样品进行分离,选用0.025 mol·L^(-1)的磷酸二氢钠(含0.02 mmol·L^(-1)乙二胺四乙酸二钠)与甲醇作为流动相进行梯度洗脱,以优化分离效果。实验设定进样量为10μL,流速控制在1.0 mL·min-1,柱温保持在35℃,并采用二极管阵列检测器在230 nm波长下进行检测。结果:4种防腐剂在20~500 ng·mL^(-1)线性关系良好,检出限为1~3 ng·mL^(-1),相关系数均在0.9995以上,灵敏度高。加标回收率为98.8%~101.8%,方法准确。相对标准偏差(Relative Standard Deviation,RSD)为0.78%~2.36%,重复性好。结论:该方法操作便捷,具备出色的分离效能,适用于同时检测阿胶糕中的多种防腐成分。

柱前衍生化HPLC法同时测定阿胶中4种主要氨基酸的含量

目的:建立阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸4种氨基酸的含量测定方法。方法:样品以6 mol·L^(-1)盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃;流动相A为0.1 mol·L^(-1)醋酸钠-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长为254 nm。结果:羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的线性范围分别为0.016～0.239 μg(r=0.9999),0.032～0.483μg(r=0.9998),0.013～0.188μg(r=0.9998),0.018～0.271μg(r=0.9999);加样回收率(n=6)分别为96.20%(RSD=1.3%),98.46%(RSD=1.2%),99.28%(RSD=0.9%),98.65%(RSD=1.7%)。结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的检测。

阿胶中马和驴成分的实时荧光PCR检测

建立阿胶中马和驴成分高特异、高灵敏的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。选择马和驴线粒体基因tRNA-Thr及D-loop区为靶序列,设计合成特异引物,通过普通PCR和实时荧光PCR检测,结果表明,这两对引物能够准确检测阿胶或动物胶中马和驴成分。

阿胶、鹿角胶、龟甲胶圆二色谱鉴别

本文通过圆二色谱(CD)法可以将阿胶、鹿角胶、龟甲胶及其伪劣品区分开,并建立标准图谱及数据。本方法简便易行,快速准确。

反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时测定阿胶中的17种未衍生氨基酸

建立了反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC—ELSD）同时测定中药阿胶中17种未衍生氨基酸含量的方法。采用Prevail^TM C18色谱柱（250mm×4．6mmi．d．，5μm），以乙腈-0．7％三氟醋酸溶液（含5．0mmol／L七氟丁酸）为流动相进行线性梯度洗脱，流速为0．8mL／min，在漂移管温度115℃、氮气流量2．5L／min条件下，在25min内即可完成对阿胶中17种氨基酸的分离测定。氨基酸质量浓度为0．073～2．327g／L时，其峰面积的对数值与质量浓度的对数值线性关系良好；17种氨基酸的加样回收率为93.5％～104．8％；信噪比为3时，测得氨基酸的最低检测限介于18．2mg／L与54．6mg／L之间。该法快速、简便、准确，可作为阿胶中氨基酸的直接测定方法，亦为其他药物中氨基酸的分析提供了参考。

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法。方法用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4%～100.1%,RSD为1.6%～3.4%。结论建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定。

阿胶、龟甲胶中脂溶性成分的高效液相色谱指纹图谱

采用高效液相色谱法研究并建立东阿阿胶、龟甲胶脂溶性成分的指纹图谱,为药用动物胶的质量控制提供了有效的方法。采用液-液-液三相静态萃取方法制备样品,以水-乙腈为流动相进行二元梯度洗脱,检测波长为205nm,柱温25℃,分析时间为60min。采集20批样品的色谱图并对其进行相似度和聚类分析。分别标定了阿胶、龟甲胶的共有峰,其相似度分析及聚类分析结果显示两种胶间存在着明显的差异。该方法稳定可靠,可以有效地区别不同种属的药用动物胶,为动物胶剂的鉴别及质量控制提供了依据。

阿胶水溶性成分HPLC指纹图谱研究

目的采用反相高效液相色谱法对阿胶水溶性成分进行了指纹图谱研究。方法选用SHIMADZU VP-ODS(4.6mmi.d.×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-H2O为流动相进行梯度洗脱;柱温25℃;分析时间为95min;检测波长205nm。结果以28个主要共有峰为评价指标,建立了阿胶水溶性成分的HPLC指纹图谱,同时标定了5个色谱峰。结论该方法操作简单,精密度、稳定性和重现性良好,为阿胶鉴别和质量控制提供了一定的依据。

胶艾汤对虚寒失血小鼠血浆血管性假血友病因子含量的影响

采用眼眶静脉丛放血并腹腔注射龙胆草水煎液致小鼠虚寒失血证模型 ,观察给药后各组小鼠血浆血管性假血友病因子 (v WF)含量等指标。结果表明 ,胶艾汤可使致模动物血浆 v WF含量下降 ,血红蛋白含量升高 ,红细胞和血小板计数增加 ,凝血时间缩短 ,有保护血管内皮细胞和补血止血作用。

阿胶强骨口服液对骨折愈合过程VEGF和FGF-2表达的影响

目的:研究阿胶强骨口服液(DGRBOS)对SD大鼠胫骨骨折愈合过程中骨痂中血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨折的疗效机制。方法:3月龄SD大鼠90只,采用三点弯曲方法造成右胫骨中段闭合性骨折后,随机分为阿胶强骨口服液,阳性药物,及生理盐水对照组,分别在实验的第4、7、14、21、28天时,采用免疫组织化学方法检测VEGF和FGF-2表达的变化。结果:阿胶强骨口服液组和阳性对照组在骨折后14dVEGF的表达达到峰值,两者间比较无显著性差异(P<O.05),与阴性对照组比较存在显著性差异(P<O.01)。阿胶强骨口服液组在骨折后7dFGF-2的表达达到峰值,与阴性对照组比较差异显著(P<O.01),与阳性对照组比较无显著性差异(P<O.05)。结论:阿胶强骨口服液在骨愈合早期、中期可通过在分子水平上上调节VEGF和FGF-2的表达,促进前成骨细胞和成软骨细胞的有丝分裂、血管内生以及骨的合成代谢达到促骨折愈合的作用。

胶囊剂囊壳及阿胶类保健食品中铬含量的测定

目的建立石墨炉原子吸收法测定软胶囊壳、硬胶囊壳及阿胶类保健食品中铬的含量,评价铬的含量情况,为保健食品的安全评定提供参考依据。方法采用微波消解法对胶囊壳及阿胶类保健品进行消解,在波长357.9 nm下,通过石墨炉原子吸收法测定,塞曼效应作为背景校正。结果此法线性关系良好,相关系数r=0.999,方法回收率90%～101%。结论此法准确、可靠,适用于测定胶囊壳及阿胶类保健品中铬含量。所测胶囊壳中超过标准限值的样品批次达15%,阿胶类保健食品总体状况良好,铬含量较低,应继续加强对胶囊壳和阿胶类保健品中铬含量的监测。

阿胶商品药材中氨基酸种类、含量及指纹图谱分析

目的：通过比较阿胶不同商品药材中氨基酸的种类、含量及其指纹图谱,评价各阿胶药材的质量。方法：采用HPLC柱前衍生化氨基酸自动分析仪,测定13批阿胶药材中18种氨基酸含量及指纹图谱。结果：所有阿胶样品中均检出16种氨基酸,其中人体必须氨基酸7种;16种氨基酸的线性方程r值均大于0.9953,平均回收率为98.1%~105.0%,RSD均小于2.0%;通过中药色指纹图谱相似度评价系统,确定20个共有峰构成阿胶药材指纹图谱的特征峰。结论：此方法可用于阿胶商品药材的品质评价。

阿胶铁口服液改善营养性贫血的功能研究

目的:探讨阿胶铁口服液改善营养性贫血的功能。方法:将40只Wistar大鼠饲以缺铁基础饲料造成大鼠营养性贫血模型,随机分为缺铁对照组(饲低铁基础饲料,灌胃2.0ml去离子水)及阿胶铁口服液低、中、高剂量组(饲低铁基础饲料,每日灌胃分别给予阿胶铁口服液0.33、1.0、2.0ml),观察并比较实验前、后各组大鼠血红蛋白含量、红细胞压积、红细胞游离原卟啉(FEP)含量及肝、肾脏组织中的铁含量。结果:灌胃给予阿胶铁口服液4周后,阿胶铁口服液各剂量组大鼠血红蛋白含量和红细胞压积及增加值较缺铁对照组显著升高(P<0.05),FEP含量及增加值均显著低于缺铁对照组(P<0.05),补充阿胶铁口服液可明显增加大鼠的肝脏和脾脏中铁含量,并且中、高剂量组大鼠的肝脏和脾脏中铁含量显著高于缺铁对照组及低剂量组(P<0.05)。结论:阿胶铁口服液能有效地改善大鼠的营养性贫血。

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0．05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml／L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0．05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0．05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。

阿胶、鳖甲胶对高血脂症大鼠血脂水平及血液流变学的影响

目的:探讨阿胶、鳖甲胶对高脂血症大鼠血脂水平及血液流变学的影响。方法:采用酒饮复合高糖高脂多因素致大鼠实验性高脂血症模型。设空白组、模型组、辛伐他汀阳性对照组及胶类给药组共7组。其中,SD大鼠连续36周喂养造模,造模成功后给予阿胶、鳖甲胶等相应药物。阿胶两个剂量组,即低剂量(0.3 g/kg)、高剂量(0.9 g/kg);鳖甲胶两个剂量组,即低剂量(0.31 g/kg)、高剂量(1.88 g/kg),连续2周。给药期间观察大鼠一般反应,每周称量大鼠体重、摄食量;于给药后2周,眼眶取血测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c),计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c);测血液流变学中血液黏度、各切变率还原黏度及流阻、红细胞聚集性和红细胞变形性。结果:1体重、摄食量:与正常对照组比较,模型对照组大鼠体重增长较缓慢,摄食量减少,但无明显差异;与模型对照组比较,给药2周,各给药组大鼠体重和摄食量均有所增加。2血脂:与正常对照组比较,模型对照组大鼠TC、LDL-c明显升高;与模型对照组比较,给药2周,各给药组血清TC、LDLc有一定的下降趋势,其中阿胶高剂量组血清LDL-c明显降低;与给药前比较,给药2周,各给药组血清TC并没有增高,阿胶高剂量组有一定的降低趋势。3血液流变学指标:与正常对照组比较,模型对照组大鼠黏度50/S、黏度30/S、黏度3/S、全血低切流阻、全血中切流阻和卡松屈服应力明显升高;与模型对照组比较,给药2周,阿胶高、低剂量组黏度3/S、全血中切流阻、血沉方程K值和卡松屈服应力均明显降低,另外阿胶低剂量组血浆黏度、红细胞压积及变形指数明显降低;鳖甲胶高剂量组黏度50/S、30/S、3/S、血浆黏度、全血中切流阻、全血低切流阻、血沉方程K值和卡松屈服应力明显降低,鳖甲胶低剂量组血沉方程K值明显降低。结论:阿胶、鳖甲能一定程度缓减高脂血症症候,改善高脂血症大鼠厌食症状,且不会引起高脂血症大鼠血脂进一步升高;阿胶、鳖甲均能一定程度上改善高脂血症大鼠血液流变学。提示阿胶、鳖甲胶虽不能显著改善高脂血症患者血脂水平,但能在一定程度上改善血液流变学,可能适合高脂血症病人服用。

皮胶改性新工艺的研究

研究了以环氧氯丙烷接枝共聚改性皮胶的制备工艺,通过对影响该合成工艺的各种因素如水胶比、酸解温度、加酸量、共聚温度、环氧氯丙烷用量等的分析,初步探讨确定了改性皮胶的最佳工艺。比较了改性前后皮胶凝固点、分子质量分布的差别,同时通过红外表征,差示扫描量热(DSC)分析,热稳定性试验,以及初粘力测试和拉伸剪切强度试验,探讨其反应机理。所得到的改性皮胶粘合剂凝固点低,粘结强度高。

加味黄连阿胶汤对顺铂肾毒性大鼠肾组织Ⅲ型胶原表达的影响

目的:观察加味黄连阿胶汤对顺铂致肾损伤大鼠Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)表达的影响。方法:将SPF级SD雄性大鼠60只随机分为正常对照组、模型组、硫代硫酸钠治疗组、加味黄连阿胶汤低剂量组、高剂量组,每组12只。正常对照组大鼠给予0.9%氯化钠溶液尾静脉注射,其余4组大鼠给予顺铂(DDP)尾静脉注射,5 mg·kg-1,1次/周,连续3周。硫代硫酸钠治疗组同时给予10%硫代硫酸钠注射,600 mg·kg-1;加味黄连阿胶汤低、高剂量组第1次尾静脉注射DDP后根据体质量分别给予0.5、1.5 g·mL-1加味黄连阿胶汤灌胃;正常对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d。连续给药8周后剖取大鼠肾脏,固定、切片后,行免疫组织化学染色。结果:与模型组比较,加味黄连阿胶汤低、高剂量组及硫代硫酸钠治疗组ColⅢ的表达明显减弱,平均积分光密度值显著降低(P<0.05或P<0.01),且加味黄连阿胶汤低、高剂量组优于硫代硫酸钠治疗组(P<0.05),但加味黄连阿胶汤低、高剂量组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:加味黄连阿胶汤可使顺铂肾毒性大鼠肾组织ColⅢ沉积明显减少,肾损害明显减轻。

中药阿胶的开发研究进展

阿胶为我国传统的补血中药,已有几千年的应用历史,由于其独特广泛的药理功能和良好的临床疗效,受到人们广泛的关注和开发研究。文章就阿胶提取工艺、炮制、鉴定方法、药理研究及剂型等方面的开发研究作一综述。

复方阿胶浆对排卵障碍性不孕患者促排周期子宫内膜及卵泡发育的影响

目的观察复方阿胶浆联合克罗米芬(CC)、尿促性腺激素(HMG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)对排卵障碍性不孕患者促排周期子宫内膜及卵泡发育的影响。方法将65例排卵障碍性不孕患者随机分为治疗组(34例,59个周期)和对照组(31例,58个周期),治疗组予以复方阿胶浆联合CC/HMG/HCG,对照组予以CC/HMG/HCG。观察两组HCG注射日子宫内膜厚度、单卵泡排卵周期率、HMG周期用量、周期排卵率、周期妊娠率、总妊娠率、未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS)周期率等方面的效果。结果治疗组HMG周期用量、LUFS周期率明显低于对照组(P<0.05);治疗组HCG日子宫内膜厚度、单卵泡发育周期率、周期排卵率、总妊娠率明显优于对照组(P<0.05)。结论复方阿胶浆联合CC/HMG/HCG可以减少HMG周期用量,降低发生LUFS周期率,增加子宫内膜厚度,提高周期排卵率、单卵泡排卵周期率、妊娠率及总妊娠率。