儿童哮喘IgE高亲和力受体β链基因多态性分析

目的研究儿童哮喘IgE高亲和力受体β链(FcεRI-β)基因多态性.方法采用扩增阻滞突变系统-聚合酶链式反应(ARMS-PCR)技术对151例哮喘儿童和105例健康对照儿童进行Fc ε RI-β基因第6外显子区I181L、V183L和第7外显子区E237G位点的多态性检测,分析其与儿童哮喘易感性的关系,并用酶免法检测血清总IgE水平及过敏原表型,研究上述3个编码区的基因型与表型的关系.结果 I181L突变与儿童哮喘有显著相关性(OR=2.00,95%CI=1.10～3.11),哮喘儿童及健康对照儿童均不存在V183L突变或突变率极低,E237G突变与儿童哮喘无显著相关性;I181L及E237G突变均与过敏原或血清总IgE水平增高无关.结论 FcεRI-β I181L基因突变是我国长春地区儿童哮喘的易感基因,但无足够证据证明FcεRI-β基因是儿童哮喘特应性的决定性基因.

高亲和力IgE受体α链cDNA的克隆及序列测定

目的 :为获得编码高亲和力IgE受体(FcεR1)α链的cDNA序列。方法 :从正常人外周血中富集嗜碱性粒细胞 ,提总RNA进行RT PCR ,分子克隆 ,用自动测序及放射自显影测序。结果 :分离并鉴定了该cDNA重组子 ,在159密码子及185密码子分别发现了CAC→CGC与TAT→CAT置换。结论 :建立了一个编码FcεR1膜外区α链的cDNA重组子克隆 ,它不含引导肽序列 ,可能是一个来自中国人的该基因的变异体。

IgE及其可溶性高亲和力受体α链与慢性荨麻疹的相关性分析

目的测定慢性荨麻疹(CU)患者血清IgE及其可溶性高亲和力受体α链(sFcεRIα)的水平,了解CU与IgE及其受体的相关性。方法分别采用酶联免疫吸附试验、免疫散射比浊法和免疫印迹法测定99例门诊CU患者(CU组)和88名无过敏史的健康者(对照组)的血清sFcεRIα和IgE水平、过敏原、皮肤划痕试验结果,比较两组间的差异,分析CU患者血清sFcεRIα水平与临床资料之间的相关性。结果 CU组的血清sFcεRIα和IgE水平均显著高于对照组(P值分别<0.01、0.05)。CU患者的血清sFcεRIα与IgE水平呈负相关(r=-0.29,P=0.03)。过敏原与血清sFcεRIα和IgE水平均相关(r=0.624、0.332,P=3.74×10-8、0.043)。CU患者的血清sFcεRIα和IgE水平与皮肤瘙痒、风团数量和大小的评分总和,以及与病程、年龄和性别均不相关(P值均>0.05)。高水平sFcεRIα(>4.974μg/mL)患者皮肤划痕试验的阳性率达95.2%(20/21)。结论血清sFcεRIα和IgE水平与CU相关,CU患者的血清sFcεRIα与IgE水平呈负相关。

高亲和力IgE受体介导的信号传导及其相关的抑制性受体

作者介绍了高亲和力IgE受体介导I型超敏反应,其活化后的信号传导通路,及其相关的抑制性受体方面的研究进展,包括FcγRIIβ、PIR B、SIRPα、CD81及MAFA。对高亲和力IgE受体介导的信号通路和其相关的抑制性受体的研究将有可能发现对抗Ⅰ型超敏反应的新靶点,从而有助于过敏相关疾病的治疗。

哮喘儿童IgE高亲合力受体β链基因多态性的初步研究

目的探讨IgE高亲合力受体β链基因的I181L,V183L和E237G位点基因多态性与儿童哮喘及血浆总IgE的关系。方法采用扩增阻滞突变系统聚合酶链式反应(ARMS-PCR)检测技术对50例四川地区哮喘儿童和40例健康对照儿童进行181,183,237三个位点的多态性进行检测,并用双抗体夹心ELISA法检测血清总IgE水平,分析其与儿童哮喘易感性的关系。结果在哮喘儿童中检测到I181L突变5例、V183L突变2例、E237G突变7例,在对照组中未发现突变子;有突变的哮喘儿童的血清IgE明显高于无突变和正常对照儿童。I181L和E237G突变与儿童哮喘和血清IgE升高有显著相关性。结论FcεR1β基因I181L和E237G基因多态性是儿童哮喘发病的重要候选基因,与血清总IgE水平升高密切相关。

高亲和度IgE受体β链基因多态性与过敏性哮喘相关性的研究

目的 :检测FcepsilonRI-beta三个突变位点I181L ,V183L和E2 37G在中国南方汉族人群中的存在和频率分布 ;判断这些突变与哮喘及特应症的相关性。方法 :利用扩增阻滞突变系统聚合酶链技术 (ARMS -PCR)对 6 0例哮喘患者FcepsilonRI -beta基因编码 181,183和 2 37的三个氨基酸位点进行分析和检测 ,并与 6 5例正常人进行对照。结果 :在哮喘组中检测到 1例I181L杂合子 ,被检人群中没有发现V183L突变。Glu2 37/Cly2 37在哮喘人群中的频率是 18.3% ,E2 37G突变基因频率为 9.2 % ;Glu2 37/Cly2 37在特应性哮喘人群中的频率是 2 2 .6 %E2 37G突变的基因频率为 11.3% ,Glu2 37/Gly2 37在正常对照人群中的频率是 6 .2 %E2 37G突变的基因频率为 3.1%。结论 :在中国南方汉族人群中存在E2 37G突变。不存在V183L突变或突变率很低。E2 37G突变与哮喘有相关性 (P <0 .0 5OR =3.18) ;E2 37G突变与特应症有相关性 (P <0 .0 2 5OR=4 .0 0 ) ,I181L突变的存在不确定。

人高亲和力IgE受体α链基因克隆及表达

目的:克隆人高亲和力IgE受体α链基因,并进行原核表达,制备出可溶性FcεRIα蛋白。方法:应用RT-PCR技术,从皮肤组织的总RNA中扩增人高亲和力IgE受体α链基因,连接至PUCm-T载体,重组克隆进行DNA测序。将测序证实的目的片段与高效表达载体pET30a连接,构建重组质粒并转入表达宿主菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化。结果:RT-PCR扩增出一个约950bp的DNA片段,测序结果显示该片段与GenBank上登录的FcεRIα基因序列完全一致;经原核表达后,获得相对分子质量37000的FcεRIα融合蛋白。结论:本实验成功克隆、表达了人FcεRIα基因,制备出可溶性FcεRIα蛋白,为抗FcεRIα抗体的检测及自身免疫性慢性荨麻疹发病机制的研究提供了条件。

龙牡汤对特应性皮炎小鼠树突状细胞IgE高亲和力受体γ亚基启动子甲基化水平及Th分化的影响

目的探讨自拟方龙牡汤对特应性皮炎(AD)小鼠树突状细胞(BMDC)IgE高亲和力受体(high affinity IgE receptor,FcERI)γ亚基启动子甲基化水平以及对Th2型免疫反应的影响。方法将30只BALB/c小鼠分成模型组、中药组、空白组,各10只。将模型组、中药组共20只小鼠制作AD模型,中药组给予龙牡汤灌胃,模型组、空白组给予浓度0.9%生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃3周。将各组小鼠常规脱颈椎处死,取股骨和胫骨,分离并培养BMDC;中药组、模型组小鼠处死后,立刻经腹主动脉采血,分离血清,分别配成10%含龙牡汤血清和10%非含药血清。将BMDC随机分为对照组与给药组,对照组加入10%非含药血清,给药组加入10%含龙牡汤血清继续培养48 h。用流式细胞术检测BMDC的CD11c阳性率,用Western blotting法检测BMDC细胞FCER1γ蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测,ELISA法检测BMDC细胞培养液上清中MCP-1、IL-12水平;流式细胞术检测BMDC细胞培养液CD4、IL-4双阳性率。结果与对照组比较,中药组BMDC细胞FCER1γ蛋白表达低(P<0.05);含药血清组FCER1γ亚基启动子甲基化水平高于对照组(P<0.05);中药组比对照组MPC-1水平低,IL-12水平高(P<0.05);与空白组比较,中药组的CD4和IL-4双阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论龙牡汤能够提高AD小鼠突状细胞FcERⅠγ亚基基因调节序列甲基化水平,进而抑制FcERⅠγ亚基与FcERⅠ在细胞表面过度表达,促进了Th1分化,抑制了Th2型免疫反应。

中国人群IgE高亲和力受体β链(FcεRIβ)基因-6843G/A多态性位点与哮喘易感性关系的Meta分析

目的探讨中国人群IgE高亲和力受体β链（FcεRIβ）基因-6843G/A多态性与哮喘易感性的关系。方法检索PubMed、Embase、中国学术期刊网全文数据库（CNKI）、万方数据检索系统及维普数据库,收集研究中国人群FcεRIβ基因-6843G/A多态性与哮喘易感性关系的文献进行Meta分析,末次检索时间为2009年10月1日。病例组和对照组基因型分布的比值比（OR）及95%CI为效应指标,应用RevMan 4.2.8软件对各研究原始数据进行统计学分析并检验异质性,采用STATA10.0软件检验发表偏倚。结果根据纳入排除标准,共有9篇文献研究-6843G/A多态性位点,G携带者（GG＋GA）的哮喘发病风险较AA野生型纯合子（AA）增加49%（OR=1.49,95%CI1.01~2.22）。亚组分析显示,G携带者成年发病的风险明显增高（OR=1.83,95%CI1.32~2.52）,而儿童发病风险无显著性差异（OR=1.19,95%CI0.68~2.08）。结论中国人群FcεRIβ基因-6843G/A多态性与哮喘易感性密切相关,突变子G携带者的哮喘发病风险较高。

树鼩IgE高亲和力受体α亚基单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεRIα)的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行检测。方法:采用大肠杆菌原核表达树鼩IgE FcεRIα蛋白,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;通过ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;利用Protein A纯化单克隆抗体,Western印迹检测其特异性,间接免疫荧光及免疫组化对单克隆抗体进行分析。结果:用纯化的树鼩IgE FCεRIα蛋白免疫小鼠,选取效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经过3轮亚克隆筛选,筛选出5株抗树鼩IgE FCεRIα单克隆抗体,分别命名为HC020、HC021、HC022、HC023和HC024,细胞间接免疫荧光表明5株单克隆抗体均能检测到293T细胞中表达的IgE FCεRIα,其中HC020、HC022、HC024能够通过免疫组化检测组织切片中的IgE FCεRIα。结论:制备了5株IgE FCεRIα单克隆抗体,为今后研究树鼩IgE FCεRIα奠定了基础。

树鼩IgE高亲和力受体α亚基的原核表达、抗体制备及鉴定

目的:原核表达树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεR1α)并制备抗体,为研究树鼩过敏反应动物模型奠定基础。方法:提取树鼩肝脏及脾脏组织RNA,用巢式PCR法扩增树鼩FcεR1α基因,连接至pMD-19T载体后进行DNA测序,将测序正确的目的片段与表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒,转入表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化;将纯化的蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;Western印迹检测多克隆抗体的特异性,ELISA检测多克隆抗体的效价。结果:调取了树鼩FCεRIα基因,并将该序列去信号肽的胞外结构(第26～213氨基酸)构建到pET30a(+)载体上,通过IPTG诱导表达并纯化了FCεRIα蛋白,蛋白纯度在90%以上。ELISA效价检测结果表明免疫动物制备的多克隆抗体效价为100 000,且该抗体能够检测到真核细胞表达的树鼩IgE FCεRIα蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得树鼩FcεRIα,免疫动物制备了多克隆抗体。

IgE高亲和力受体在树突状细胞和单核细胞的表达和意义

IgE高亲和力受体(high affinity IgE receptor,FcεRI)是Fc受体的一种,可在肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突状细胞(dendritic cells,DCs)、单核细胞及血小板等细胞表面表达,在变态反应的发生和发展中有重要作用。FcεRI在DCs和单核细胞的表达具有不同于其他免疫细胞的特殊性。DCs和单核细胞表面FcεRI介导的信号释放和抗原呈递可促进T细胞的发育和激活,参与多种过敏性炎性疾病的发病。同时,DCs和单核细胞表面的FcεRI还有抑制免疫作用,能促进机体免疫稳态的自身调节。本综述对DCs和单核细胞表面FcεRI的功能进行全面的归纳和总结。

肥大细胞在特应性皮炎发病中的作用及相关治疗进展

特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)发病机制复杂,多种细胞参与其发病过程。肥大细胞主要分布于皮肤和黏膜,是多种变态反应性疾病的重要效应细胞,但肥大细胞在AD发病机制中的作用尚不完全明确。研究表明,肥大细胞主要通过“IgE-FcεRI-组胺”途径和“MrgprB2/X2-类胰蛋白酶”途径在AD的发病中发挥作用,同时肥大细胞还释放多种2型炎症相关细胞因子进一步促进AD的免疫失衡。本文主要回顾近年来肥大细胞在AD发病机制中的研究及相关治疗进展,以期为AD的治疗与管理提供新思路。

甘肃地区汉族人群FcεRI基因启动子区多态性与青霉素过敏的关联性分析

目的探讨高亲和力Ig E受体（FcεRI）基因启动子区多态性（MS4A2 rs1441586和FcεRIG rs11587213）与青霉素过敏的相关性。方法以甘肃地区汉族人群200例青霉素过敏患者和210例对照为研究对象,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测MS4A2 rs1441586和FcεRIG rs11587213两位点基因型及等位基因的分布频率,并通过测序进行验证。结果过敏组MS4A2 rs1441586位点基因型频率与对照组相比差异无统计学意义（χ^2=5.497,P〉0.05）,过敏组C等位基因频率为35.8%,高于对照组的29.3%（χ^2=3.906,P〈0.05）;按性别分组后其基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义;按年龄分组后,非老年人群中过敏组基因型分布频率与对照组相比差异有统计学意义（χ^2=5.908,P〈0.05）。过敏组FcεRIG rs11587213位点基因型频率与对照组相比差异无统计学意义（χ^2=5.526,P〉0.05）,过敏组G等位基因频率为7%,高于对照组的3.6%（χ^2=4.847,P〈0.05）;按性别分组后,男性过敏组与对照组基因型及等位基因频率分布差异仍有统计学意义（χ^2分别为8.649、4.294,P均〈0.05）;按年龄分组后,老年人群中两组间差异有统计学意义（χ^2分别为7.637、5.550,P均〈0.05）。结论 FcεRI基因启动子区多态性可能与甘肃地区汉族人群青霉素过敏反应相关,MS4A2 rs1441586与非老年人青霉素过敏高度关联,FcεRIG rs11587213与男性以及老年青霉素过敏患者高度关联。

FcεRⅠ β基因多态性与湖北地区儿童变应性哮喘的关系

目的 探讨IgE高亲和力受体 β链基因 (FcεRⅠβ)启动子 - 10 9位和编码区Glu2 37Gly基因多态性与湖北儿童变应性哮喘及血浆总IgE的关系。方法 采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术检测 110例儿童变应性哮喘患者和 92例相匹配对照者FcεRⅠ β基因启动子区 - 10 9位和编码区Glu2 37Gly两位点多态性。结果 ①儿童变应性哮喘患者FcεRⅠ β基因启动子区 - 10 9位T/T、T/C和C/C基因型频率是 0 391、 0 4 91和 0 118;与对照相比差异无显著性意义 (χ2 =0 0 2 34,P >0 0 5 ) ,但儿童变应性哮喘组T/T基因型患者血浆总IgE对数值为 2 4 78± 0 94 4 ,与T/C基因型的 2 2 87± 1 114和C/C基因型的 2 315± 0 86 6相比差异具有显著性意义 (F =4 336 ,P <0 0 1)。②FcεRⅠ βGlu2 37Gly位点Glu/Glu、Glu/Gly和Gly/Gly型频率为 0 5 91、 0 36 4和 0 0 4 5 ,与正常对照相比差异具有显著性意义 (χ2=6 5 86 ,P <0 0 5 ) ,Gly/Gly型血浆总IgE对数值为 2 6 2 3± 0 96 2 ,与Glu/Glu的 2 30 6± 0 915和Glu/Gly的 2 4 18±0 894相比差异具有显著性意义 (F =6 6 5 4 ,P <0 0 1)。结论 IgE高亲和力受体 β链启动区 - 10 9位T/T型与血浆总IgE相关 ,编码区 2 37位Gly/Gly型与儿童变应性?

人外周血单核细胞源性朗格汉斯细胞和表皮炎症样树突状细胞的诱导及表型分析

目的利用人外周血单核细胞体外诱导培养朗格罕氏细胞(Mo-LC)和炎症性树突状表皮细胞(Mo-IDEC)并观察其表型特点。方法联合应用LymphoPrepTM梯度离心试剂和CD14+磁珠分离和筛选外周血CD14+单核细胞;在重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和重组人白介素4(IL-4)的基础上分别于第0、2、4天加入人天然TGF-β1或β-巯基乙醇(β-ME)。培养第6天时收集细胞,通过相差显微镜观察其形态,并利用单克隆抗体和流式细胞术对诱导细胞亚群检测细胞表面分子的表达水平。结果 CD14+单核细胞体外诱导培养6 d后可形成具有树突状外观的Mo-LC和Mo-IDEC,2种细胞均不同程度表达CD1a、FcεRI、FcεRII、TLR1、TLR2;Mo-LC表达CD207,Mo-IDEC表达CD206。特应性皮炎患者来源的Mo-IDEC表面CD1a表达高于Mo-LC,且CD23、TLR2、FcεRI的表达水平显著高于健康对照组。结论利用外周血单核细胞可在体外成功诱导Mo-LC和Mo-IDEC,这2种细胞表型特点与体内分离的细胞在形态和表型上类似,为体外进一步研究这2类细胞的功能打下基础。

基因多态性与药物过敏反应相关性研究进展

药物过敏反应是由免疫介导的药物不良反应,多为突发和偶发且不可预测,其发生受环境和遗传等多种因素的影响。基因多态性研究可用于筛选过敏反应易感个体,在药物过敏反应预防和个体化治疗中发挥重要作用,因此成为近年来研究热点。该文阐述了药物过敏反应发生机制,并对近年来人类白细胞抗原(HLA)、白细胞介素(IL)和高亲和力IgE受体(FcεRI)基因多态性与药物过敏反应相关性研究进展进行综述,以期为进一步研究药物过敏易感基因提供理论基础。

慢性自发性荨麻疹发病机制的研究进展

慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)是一种常见肥大细胞驱动的皮肤病,具有病程迁延、复发率高等特征。CSU发病机制极为复杂,目前在研究其自身免疫机制方面已取得了很大进展。本文回顾了CSU与自身免疫和非自身免疫(凝血级联反应和补体、细胞因子失衡以及微生物感染等)之间的关系,并重点阐述了CSU自身免疫发病机制的证据,这些证据表明该疾病的发生发展离不开自身抗体参与。深入解析CSU发病机制,将有助于我们挖掘新的研究理念和治疗靶点,为CSU患者带来福音。

食物致敏性评价表达人IgE高亲和力受体αβγ的大鼠嗜碱性白血病粒细胞2H3细胞株的建立及鉴定

目的建立稳定表达人IgE高亲和力受体alpha、beta和gamma链(human high affinity receptor containing alpha, beta and gamma chain,hFcεRIαβγ)的大鼠嗜碱性白血病粒细胞(rat basophil leukemia,RBL)-2H3细胞株。方法将包装好的载有hFcεRIαβγ慢病毒感染目的细胞RBL-2H3细胞,实时PCR检测细胞hFcεRIαβγ的表达水平,流式细胞仪分选hFcεRIα表达阳性细胞,并检测分选后细胞hFcεRIα的表达水平。结果成功构建重组慢病毒表达载体GV348-hFcεRIαβγ和慢病毒颗粒;慢病毒能够有效感染RBL-2H3细胞,hFcεRIαβγ在RBL-2H3细胞中成功表达,hFcεRIα在RBL-2H3细胞蛋白水平成功表达。结论初步构建了hFcεRIαβγ/RBL-2H3细胞,相较于RBL-2H3细胞,该细胞表达hFcεRIα,可与人血清IgE特异性结合,能够更好地应用于食品致敏性评价体系中。

IgE高亲和力受体蛋白的制备及其生物功能的鉴定

目的通过基因工程技术制备人IgE抗体结合其高亲和力受体α段(FcεRIα)蛋白并对其生物学功能进行鉴定,为探讨FcεRIα在过敏性疾病中的作用奠定研究基础。方法应用基于PCR的精确合成法(PAS)方法获得人FcεRIα基因,构建原核表达载体pET-FcεRIα,低温诱导表达FcεRIα并采用His标签纯化重组蛋白;通过ELISA法鉴定重组人FcεRIα蛋白的生物功能。结果扩增出大小约为560bp的人FcεRIα基因;pET-FcεRIα质粒经双酶切及测序鉴定正确;诱导表达并纯化出相对分子质量大小约为22 000的人FcεRIα;重组人FcεRIα能有效检测人血清中的抗FcεRIα自身抗体水平,并且能够与人血清中IgE抗体高效结合。结论成功制备人FcεRIα蛋白,并初步具备检测人血清中抗FcεRIα自身抗体及IgE抗体的能力,为后续研究提供了有利的实践基础。