高速逆流色谱与硅胶柱色谱结合分离制备高纯度芦荟素异构体

芦荟素是芦荟叶中主要的蒽醌类成分,通常以芦荟素A和B两种非对映异构体形式并存,目前已成为许多芦荟产品质量控制指标之一。采用高速逆流色谱和硅胶柱色谱结合的方法,从老芦荟干粉中分离制备了高纯度的芦荟素A(纯度为98%)和芦荟素B(纯度为96%)样品,并采用快原子轰击质谱(FAB-M S)和核磁共振氢谱(1H NMR)以及GOE SY(grad ien t-enhanced nuc lear O verhau ser e ffec t spec tro scopy)等方法对所得的两个芦荟素异构体的立体构象进行了确认。该法具有制备量大和分离效率高的特点。

儿茶素和表儿茶素异构体的高效逆流色谱分离制备

应用高效逆流色谱法(HPCCC)对茶叶中的儿茶素和表儿茶素两种同分异构体的分离制备方法进行研究。结果表明:以正己烷-乙酸乙酯-水(体积比1:20:20)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,可以实现儿茶素和表儿茶素的完全分离。采用138mL的分离柱、1g儿茶素粗提物,在120min内一次制备即可得到纯度在95%以上的表儿茶素约35mg,纯度在99%以上的儿茶素325mg,纯度90%～99%的儿茶素100mg。

制备色谱技术进展

综述了四种典型的制备色谱 :高效液相色谱、超临界流体色谱、模拟移动床、高速逆流色谱技术进展及其优缺点 。

高速逆流色谱法分离花椒生物碱

采用高速逆流色谱法分离花椒中的生物碱。逆流色谱条件:正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶7∶5)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,流速2mL/min,仪器转速800r/min,检测波长254nm,上样量800mg。在此条件下,一次分离得到组分A(130mg)和组分B(15mg),经薄层色谱定性分析为生物碱,HPLC测定组分A和B的纯度分别为92.8%、85.4%。

高速逆流色谱分离纯化EGCG3″Me的研究

首次采用高速逆流色谱法对经自制聚酰胺初步分离的表没食子儿茶素-3-(3″-O-甲基)没食子酸酯(EGCG3″Me)样品中的EGCG3″Me单体进行分离纯化。结果表明,选择水-甲醇-乙酸乙酯-正己烷(体积比5∶2∶9∶1)为高速逆流色谱分离的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,在主机转速700 r/min、流速2.0 mL/min、检测波长254 nm的条件下,可对EGCG3″Me实现良好分离。经高效液相色谱检测,分离纯化后的EGCG3″Me纯度可达90%以上,产物的收率为76.53%。

高速逆流色谱法(HSCCC)分离制备香水莲花中的柚皮素

采用高速逆流色谱法对香水莲花中的黄酮类化合物进行了分离,溶剂系统为正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(体积比1∶1.2∶2∶1),上层为固定相,下层为流动相,流速2.0 mL/min,转速830 r/min,检测波长280 nm,进样量300 mg,分离出80 mg化合物C,经HPLC测定纯度>98.6%,根据UV光谱、MS分析及1H-NMR、13C-NMR图谱分析结果,化合物C鉴定为柚皮素,该化合物为首次从该植物中分离得到,为香水莲花的开发应用提供了理论依据。

紫甘薯花色苷与大肠杆菌在体外的相互作用

以紫甘薯花色苷提取物为原料,研究其对分离的大肠杆菌的抑菌作用。结果表明,紫甘薯花色苷对大肠杆菌生长具有一定的抑制作用,与其浓度呈正相关。采用高速逆流色谱法制备紫甘薯单体花色苷,研究大肠杆菌对芍药素-3-咖啡酰-阿魏酰槐糖苷-5-葡糖苷的作用,大肠杆菌对其具有显著的降解能力。通过高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)(520 nm和280 nm)法比较分析,初步探讨大肠杆菌对花色苷的降解机理。推测在该研究的时间范围内,大肠杆菌的作用没有使花色苷发生水解或者裂解等反应,即其没有被降解成更小的分子。分子中呈现紫外吸收的芳香环结构并没有被整体破坏,只是花色苷呈色基团发生了改变,形成没有颜色的降解产物。

高速逆流色谱法制备罗汉果根中葫芦素类化合物

葫芦素作为四环三萜类化合物广泛存在于葫芦科植物中,但其含量较低、结构相似,采用常规的柱层析分离法较难得到大量、高纯度的单体化合物,导致其活性的研究与应用受到限制。研究采用高速逆流色谱法(HSCCC),建立了一种从罗汉果根提取物中制备葫芦素类化合物的方法。罗汉果根乙醇提取物经HPD-100大孔树脂、MCI、RP-C18柱层析分离后获得葫芦素粗品。通过基于薄层色谱的溶剂选择法(GUESS)对液-液萃取与高速逆流色谱的溶剂体系进行快速筛选,确定采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶7∶3∶7,v/v/v/v)萃取葫芦素粗品,有机层萃取物再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4∶6∶5∶5,v/v/v/v)进行HSCCC分离,以上相作为固定相,下相作为流动相,流速2.0 mL/min,主机转速860 r/min,进样量280 mg,一次分离即可获得5种葫芦素类化合物,经高效液相色谱检测其纯度分别为97.0%、95.4%、96.3%、91.6%和95.3%,并通过核磁共振技术、高分辨质谱技术及文献资料对比对各化合物的结构进行鉴定。经鉴定,5种化合物分别为葫芦素Q1、23,24-二氢葫芦素F-25-乙酸酯、葫芦素B、23,24-二氢葫芦素B和二氢异葫芦素B-25乙酸酯。该方法操作简单、快速,分离效果好,可作为规模化制备葫芦素类化合物的一种新方法。

超高分辨质谱-高速逆流色谱-半制备液相色谱联用快速测定分析红三叶草中环氧合酶-2抑制剂

利用超高效液相-质谱联用技术(UPLC-MS)对红三叶草乙醇提取物中化学成分进行分析鉴定,以环氧合酶-2作为生物靶分子,运用超滤质谱技术以"受体-配体"亲和及超滤法作为分析方法筛选具有酶抑制,共鉴定出7个活性化学成分,分别为大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、印度黄檀苷、芒柄花素、德鸢尾素、鹰嘴豆芽素A。利用半制备型高效液相色谱(Semi-preparative HPLC)和高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography,HSCCC)技术对环氧合酶-2抑制剂进行分离和纯化,7种成分纯化至>80%,其中6种成分>92%。结果表明采用超滤质谱-半制备液相色谱-高速逆流色谱联用技术可以快速鉴定、筛选和纯化红三叶草中环氧合酶-2抑制剂。为天然药物的开发提供了理论基础和技术平台,可推广应用于其他酶抑制剂的鉴定和分离。

鹰嘴豆中超氧化物歧化酶抑制剂的分离与鉴定

目的以超氧化物歧化酶为作用靶点,快速筛选、分离纯化和鉴定超氧化物歧化酶抑制剂。方法首先,利用超滤-质谱技术(UF-MS)对鹰嘴豆中具有超氧化物歧化酶抑制作用的活性成分进行筛选。然后,在活性指导下,应用半制备型液相色谱(Semi-preparative HPLC)结合高速逆流色谱(HSCCC)技术从鹰嘴豆中分离超氧化物歧化酶抑制剂,最后,运用质谱和核磁共振波谱数据对分离所得化学成分进行结构解析和鉴定。结果从鹰嘴豆中成功分离纯化并鉴定出五个超氧化物歧化酶抑制剂(分别为大豆苷、大豆苷元、毛蕊异黄酮、后莫紫檀素、鹰嘴豆芽素A),其纯度均>90%。结论采用超高分辨质谱-半制备液相色谱-高速逆流色谱联用技术可以快速筛选、分离纯化和鉴定鹰嘴豆中超氧化物歧化酶抑制剂,为鹰嘴豆抗炎活性研究及天然产物的开发和利用提供一定的理论支持。

高效逆流色谱法制备苏木中的氧化巴西木素

氧化巴西木素是苏木的主要化学成分之一,具有广泛的药理活性且常作为染色剂应用于各行各业。采用传统柱色谱法进行分离,不仅会造成色谱柱材料的污染,也会造成活性成分的损失。故采用高效逆流色谱(HPCCC)对苏木中的活性化合物氧化巴西木素进行分离纯化。苏木乙醇提取物经乙酸乙酯萃取后直接进行高效逆流色谱分离。首先利用基于薄层色谱的常用溶剂体系估算法和摇瓶法结合高效逆流色谱分析模式进行溶剂体系筛选。结果表明,最佳溶剂体系为氯仿-甲醇-水(4∶3∶2,v/v/v)。高效逆流色谱以反相模式为洗脱模式,主机转速为1600 r/min,流速为10 mL/min,分离温度为25℃,检测波长为285 nm,在氯仿-甲醇-水(4∶3∶2,v/v/v)溶剂体系下,从500 mg苏木乙酸乙酯萃取物中一次性分离制备得到15.2 mg纯度为95.6%的氧化巴西木素及一微量成分caesappanin C。采用高效逆流色谱分离制备氧化巴西木素,可避免苏木中的活性成分氧化巴西木素对色谱柱中的固体填充材料染色和难以洗脱等问题,并缩短分离纯化工作时间,提高工作效率。故可将高效逆流色谱应用到苏木中其他色素化合物或其他染料植物的分离制备工艺研究中。

HSCCC分离荷叶原花青素及其抗氧化活性研究

为了从荷叶中提取并制备高纯度的原花青素,采用大孔树脂和高速逆流色谱技术(HSCCC)分离纯化荷叶中的原花青素。以正己烷∶乙酸乙酯∶水=1∶80∶80的溶剂体系,得到三种目标组分G1、G2、G3,经高效液相色谱分析其组成可知,三种组分对应四种物质分别为儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和原花青素B2,并对三种组分进行抗氧化活性研究。结果表明,G1、G2和G3对DPPH自由基的半数清除率(IC50)分别为0.12 mg/L、0.08 mg/L、0.09 mg/L;对ABTS^+自由基的半数清除率(IC50)分别为0.48 mg/mL、0.28 mg/mL、0.21 mg/mL;对羟基自由基的半数清除率(IC50)分别为0.29 mg/mL、0.35 mg/mL、0.39 mg/mL,证实了这三种组分都具有较好的抗氧化活性。

多级逆流固液提取技术提取大豆分离蛋白

采用液相色谱和生物质谱技术对豆粕中不同蛋白质在提取过程中的释放行为进行了研究,并将多级逆流固液提取技术用于大豆分离蛋白提取.结果表明,豆粕中的2S组分由于分子量低和高水溶性在提取过程中释放速率较快,提取2次总释放量超过80%,3次提取7S和11S组分总释放量约为69%,提高固相和液相间7S和11S的浓度梯度或延长提取时间有助于7S和11S组分释放.采用该提取技术可提高提取液中的总蛋白浓度,在相同蛋白质收率下可节水11%,同时较高的蛋白质浓度可增加酸沉过程中蛋白质收率.