基层医院对罕见意外抗体的鉴定思路与试验方法探讨

目的探讨基层医院输血科如何利用现有资源,采用常规血清学方法对罕见意外抗体进行鉴定提供思路。方法选择本院就诊的1名血型正反定型不一致、抗体初筛阳性、常规配血不合的消化道出血患者为研究对象,采用混合人源O细胞吸收法进行血型鉴定,使用常规10系谱细胞抗体鉴定、凝聚胺法抗体鉴定、2-巯基乙醇(2-ME)试验、盲配、家系调查等方法了解抗体特性。结果患者血清学试验结果:1)血型为B型、RhD阳性,直接抗人球蛋白试验呈阴性;2)抗体性质为IgM型;3)抗-s、抗-Fya、抗-k可能性小,复合抗体不能排除;4)患者血液标本与20名供者的血液标本交叉配血试验主侧不合,与同系3个姐妹的血液标本交叉配血试验主侧均相合。结论倾向推断患者血浆中含有高频抗原系列抗体,无法鉴定时,可经家系调查寻找到相合血源进行辐照、输注。

布氏杆菌表面特异性多表位抗原的串联表达与免疫磁珠的初步建立(英文)

目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E.coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,IPTG诱导后表达出30kDa的重组蛋白,亲和层析纯化后将其进行Western blot分析、间接ELISA鉴定和兔免疫试验,制备的抗血清经亲和层析纯化后,包被成免疫磁珠并用于布氏杆菌富集。结果表达的重组蛋白能与牛抗布氏杆菌血清反应,其抗血清与布氏杆菌发生良好反应,纯化抗体包被的免疫磁珠能特异性吸附布氏杆菌。结论获得的布氏杆菌特异性抗体和免疫磁珠具有良好的应用前景。

流动注射化学发光同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原

将包被有单克隆抗体的两个透明微型检测池串联在流动注射分析装置上,利用移动式微型检测池建立了一种能同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原的流动注射化学发光免疫分析方法,为提高分析效率提供了一种有效途径。样品抗原和辣根过氧化物酶标记的相应抗体分别导入微管进行孵育,形成三明治式免疫夹心结构。在注入鲁米诺和H2O2后,两微型检测池中分别形成较稳定的酶催化化学发光体系。通过切换检测池,使两个透明微型检测池中发生的酶促增强化学发光反应相继得到检测,从而实现两种待测物的同时检测。考察了一系列影响化学发光检测的参数,如免疫反应时间、鲁米诺和H2O2的浓度及反应介质的pH值。在最佳实验条件下,甲胎蛋白和癌胚抗原的检测线性范围分别为1.25～50.00μg/L和1.25～40.00μg/L,检出限分别为1.06和1.00μg/L。对人血清实际样品进行了检测,取得了满意的结果。

肝癌患者发病前血清中高尔基体糖蛋白73水平的回顾性动态观察

目的探讨肝癌发病前后高尔基体糖蛋白73（GP73）的动态水平及相关因素。方法2007至2012年对一组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性者人群开展一年两次的周期性的筛查，统一保留血标本于生物样本库，直至肝癌发生。将肝癌发病时及发病前30个月内6个时点中，至少有3次血标本并有B超临床检查结果的39例肝癌患者列为血清GP73检测分析对象，最终获得162个标本。采用双抗体夹心ELISA法检测GP73。用stata软件作时序间分析并进行不同分组间差异的统计学检验。结果肝癌发病时的39例患者GP73检测值为（126．77±73．73）μg／L，发病前5次GP73检测的平均值分别为（128．32±81．18）、（129．97±83．62）、（127．38±80．10）、（135．52±97．88）及（138．24±93．58）μg／L，差异无统计学意义（F=0．07，P=0．997）。39例肝癌发病前后的GP73水平未见明显的趋势变化。162个检测样本按B超检查结果划分为不伴有肝硬化（63例次）和伴有肝硬化（99例次）两组，GP73平均水平分别为（97．16±51．39）、（151．20±91．68）μg/L，差异有统计学意义（F=18．22，P〈0．01）。进一步以GP73均值（130．19μg／L）将调查对象分为两组，不伴有肝硬化者中只有1／14的患者GP73水平高于平均值，而伴有肝硬化者（25例）中有12例的GP73水平高于平均值，差异有统计学意义（P=0．013）。拟合回归模型也显示GP73与时间序列不相关（t=0．75，P=0．455），而与肝硬化相关（t=4．30，P〈0．01）。结论肝癌患者发病时及发病前30个月内的GP73水平动态变化不大。肝癌患者GP73水平的高低是由肝病背景所决定的；肝硬化可能是一个主要的影响因素或混杂因素。

红细胞血型抗原的最新研究进展

2019年10月国际输血协会(ISBT)公布了3个新的红细胞系统抗原,更新后红细胞血型系统已经达到39个,系统抗原数目达到330个。3个新发现的系统抗原是Kanno抗原(编号037)、SID抗原(编号038)、Ctl2抗原(编号039)。本文就红细胞血型抗原的最新研究进展,以及血型抗原的相关数据、基因位点、基因注册数据等,做归纳和简要综述。

WorkBeads系列介质与C4介质层析纯化汉逊酵母表达的HBsAg效果的比较

目的比较WorkBeads 40/10000 Bus low系列3146VL、3147L、3148H、3149VH 4型不同丁基密度的疏水层析柱与BIA CIM Monoliths C4纯化汉逊酵母表达的HBsAg的效果。方法将HBsAg溶于不同的上样缓冲液中,分别上样于4型WorkBeads预装层析柱和C4丁基层析柱,用不同的洗脱缓冲液洗脱,分别收集上样流穿峰和洗脱峰,测定HBsAg含量,并计算HBsAg的流穿率和洗脱率,筛选最佳上样缓冲液和洗脱缓冲液。结果 3147L型柱最适于HBsAg纯化工艺,含4%硫酸铵的20 mmol/L PB是理想的上样缓冲液,20 mmol/L PB和含30%异丙醇的20 mmol/L PB均不是理想的洗脱缓冲液。CIMMonoliths C4最佳上样缓冲液是含3%硫酸铵的50 mmol/L MOPS和含4%硫酸铵的20 mmol/L PB;含0.1%Triton-100的50 mmol/L MOPS是最佳的洗脱缓冲液。结论可多次重复使用的WorkBeads系列介质和可耐受高流速的快速纯化介质CIMMonoliths C4均可用于汉逊酵母表达的HBsAg的纯化。