高产酯酶细菌的筛选、鉴定及复合诱变选育

该研究从大曲中筛选出高产酯酶的细菌,对其进行形态学鉴定和分子生物学鉴定,利用常压室温等离子体-紫外(ARTP-UV)复合诱变选育出优良突变株,并进行遗传稳定性试验,提高其产酶能力。结果表明,从某浓香型酒厂大曲中筛选出一株产酯酶酶活力为(13.73±0.04)U/m L的细菌,编号为S3-51,其被鉴定为少见鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)。对菌株S3-51进行ARTP-UV复合诱变,选育出酶活最高的突变株ARUV3-2,经遗传稳定性测试后,菌株ARUV3-2的酯酶酶活力稳定在(17.42±0.32)U/m L,相比于初筛时的产量提高了26.88%。菌株ARUV3-2为脂肪酸乙酯类化合物的工业合成和白酒质量的提升提供潜力。

产酯酶微生物菌种的筛选研究

研究了产酯酶微生物的筛选,包括筛选模型、酶活力检测方法及菌株的分布。对30多份土样以及实验室保存的菌种进行了大量的筛选,以添加三醋酸甘油酯、乳酸乙酯酯类物质对土样等样品富集,采用添加显色剂溴甲酚紫的快速简便平板显色法,观察水解变色圈直径和菌落直径的大小进行初筛。获得两者直径之比相对大的菌株174株,采用平板打孔检测法和摇瓶发酵比色法测酶活力相结合进行复筛,最终得到酯酶活力较高的24株菌株。就初筛和复筛方法及结果加以比较分析,复筛菌株做不同底物的酶活力检测,建立了一个有效、简便及快速的微生物酯酶的筛选模型。并对酯酶产生菌的立体选择专一性进行了初步考察。

黑木耳亲本、单核、杂交菌株鉴定的研究

应用荧光核染色技术、酯酶同工酶鉴定技术,对黑木耳亲本双核菌株、原生质体单核菌株和单-单杂交菌株进行筛选鉴定。结果表明:荧光核染色技术可快速有效地鉴定获得菌株的核相,酯酶同工酶技术可准确地区分单核菌株及杂交新菌株的不同核型,研究得到1个酶带差异显著的新菌株。

酯酶同工酶在食用菌菌种选育中的应用研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,分析了不同培养时间和不同培养基种类对平菇、杏鲍菇、白灵菇酯酶同工酶的影响 ,结果表明在不同培养时间和不同培养基条件下 ,酯酶同工酶酶谱的酶带呈现不同的多态性 ,由此提示同工酶在食用菌菌种选育的应用上应固定最佳培养时间及最适培养基种类 ,并在所有操作条件一致的情况下 。

毛木耳种质资源的酯酶同工酶分析

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对毛木耳56个菌株酯酶同工酶的酶谱多样性进行了研究。结果表明，56份材料有一定的遗传变异，共检测到迁移率不同的10条谱带，各菌株分别具有1—6条酶带，共有26种酶谱类型。菌株被分成了8大群：第一群包括黄耳zh等34个菌株；第二群包括白背木耳等8个菌株；第三、第四群分别为黑木耳和915两个单独的菌株；第五群包括99等4个菌株；第六群包括43等4个菌株；第七群包括50385和AP067两个菌株；第八群包括小上3和杂交34两个菌株。酯酶同工酶分析技术是鉴别种厦品种以下菌株的有效手段。

白僵菌胞外蛋白酶的测定及其与酯酶型的关系

用明胶琼脂培养法和营养液振荡培养法测定了白僵菌不同酯酶型菌株的胞外蛋白酶，并用前一种方法测定了同一酯酶型菌株的胞外蛋白酶。发现不同类型菌株间和同一类型菌株内个体间胞外蛋白酶产生水平都有差异，少数几株差异显著。测定蛋白酶方法不能单独用来鉴别菌株。明胶琼脂培养法比营养液振荡培养法较为准确可靠。

中国黑木耳主要栽培菌株酯酶同工酶的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对国内34个黑木耳主要栽培菌株进行酯酶同工酶分析,结果表明其酶带数一般为2-6条不等,其中在Rf为0.484处,34个菌株都有谱带出现,34个菌株之间的相似系数在0.143-1.000之间,应用NTSYS软件进行聚类分析结果表明,供试菌株在遗传相似水平为80%时可分六大类,并且根据酯酶同工酶图谱能对部分菌株进行初步鉴别。

家蝇二氯苯醚菊酯抗性品系酯酶分析

本文利用离体酯酶测定和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分析了家蝇二氯苯醚菊酯抗性品系（下称Ｐｍ－Ｒ）和敏感品系（下称ＳＳ）的非专一性酯酶变化情况。实验结果显示：Ｐｍ－Ｒ非专一性酯酶活性比ＳＳ略有升高，仅１．５２倍，聚丙烯酰胺凝胶电泳发现二者酯酶带型不一样，各组份所占比例也不同。由此可以推断：在用二氯苯醚菊酯选育的家蝇抗性品系中，抗性的增长与非专一性酯酶活性变化关系不大，而可能与其组成结构的改变有关。

1株阿魏酸酯酶产生菌的筛选鉴定及发酵条件优化

从浙江绍兴鉴湖附近土样中分离筛选到1株产阿魏酸酯酶(ferulic acid esterase,FAE)的菌株FD-8,通过菌落形态、分生孢子梗形态对比和ITS/18S rDNA分子生物学同源性分析,鉴定该菌株为溜曲霉,命名为Aspergillus tamarii FD-8。FD-8生长最适碳源和氮源分别为蔗糖和酵母浸提物,最适生长温度和pH分别为32℃和5.0,最适产酶条件为32℃、pH 6.0,发酵周期为120 h。在最适培养基中、分阶段控制pH培养条件下,FAE比酶活达到231.34 mU/mg。去淀粉麸皮可诱导FAE的合成,在发酵48 h添加20.0 g/L去淀粉麸皮,FAE最高比酶活可达到573.61 mU/mg,比对照提高1.48倍。

海洋低温甾醇酯酶菌株的筛选鉴定及其酶学特性研究

从大连渤海湾海泥海水样品中分离出一株高产海洋甾醇酯酶的菌株Q-06,对其进行形态观察、生理生化试验和分子生物学(16S r DNA)鉴定,并对其产海洋甾醇酯酶进行酶学特性研究。结果表明,菌株Q-06被鉴定为莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi),其最适作用温度和pH值分别为30℃和7.0,该酶在低温下酶活性较高,有一定的耐弱碱性。Ag^+对酶的抑制性较强,Mg^(2+) 、Ni^(2+) 、Ca^(2+) 等对甾醇酯酶的活性有微弱的激活作用,乙二胺四乙酸(EDTA)和十二烷基硫酸钠(SDS)均可以有效地抑制甾醇酯酶活性。

阿魏酸酯酶基因工程菌研究进展

阿魏酸酯酶能水解阿魏酸、多聚阿魏酸与木聚糖以及木质素之间形成的酯键,有利于植物细胞壁的降解。介绍阿魏酸酯酶的微生物来源、阿魏酸酯酶基因工程菌构建和阿魏酸酯酶与其他酶相互协同作用等的研究进展。

广西百色云耳野生菌株的遗传多样性分析

【目的】分析广西百色云耳野生菌株的遗传多样性,为其种质资源的保护及开发利用提供参考。【方法】从广西百色地区采集23个云耳野生菌株,进行人工栽培,期间观察测定其农艺性状;采用酯酶同工酶技术分析不同云耳菌株的酯酶同工酶酶谱多态性,并进行聚类分析。【结果】在23个云耳野生菌株中,子实体朵形为单生的菌株有16个、簇生的7个;耳片边缘平滑的菌株13个,波浪状的菌株10个;耳片背面筋道脉纹明显或较明显的有15个,不明显或无脉纹的有8个;耳片颜色为浅黄褐色的菌株4个,黄褐色的8个,黑褐色的11个;耳片大小(长×宽)为30.1~51.6 mm×20.5~41.7 mm,厚度0.95~1.44 mm,表明百色云耳的形态特征具有丰富的多样性;原基形成时间26~59 d,杂菌感染率0~51.1%,耳片干湿比10.1~14.1,第一潮产量8.2%~50.5%,表明不同菌株的原基形成时间、抗杂性、干湿比和产量等方面也具有丰富的多样性。23个云耳野生菌株共检测到19条谱带,有18种谱带类型,谱带的迁移率(Rf)为16.6~88.6,分布频率为4.3%~100.0%,其中有3条带是百色云耳酯酶同工酶的特征谱带。23个云耳野生菌株的遗传相似系数为0.68~1.00,在遗传相似系数为0.68时,可分为两大类群,其中大部分菌株的聚类结果与其地理位置吻合。【结论】广西百色云耳野生菌株具有丰富的遗传多样性,蕴含着较多的优异遗传性状,具有较大的开发利用潜力。

白平菇不同菌株的酯酶同工酶分析及优良菌株筛选

4个白平菇菌株yt 1、yt 2、yt 3、yt 4的酯酶同工酶分析表明,yt 4是由yt 1经一定剂量的60Co γ射线辐照后产生的新菌株。出菇试验结果表明,yt 4是一个性状好、产量高的优良菌株。

张弓老酒大曲中高产酯化酶细菌的分离筛选及产酶条件优化

【目的】为丰富浓香型白酒大曲中高产酯化酶菌株,提高白酒大曲的品质和白酒优级品率.【方法】首先通过产酯化酶透明圈法初筛和酸碱滴定法复筛确定产酯化酶酶活力最高的细菌菌株,进而结合形态学鉴定、分子生物学分析和生理生化试验鉴定菌株种属,最后研究在液体发酵培养基中的氮源和碳源的选择及其最适量与发酵液初始pH值因素对其产酶能力的影响,找到最适产酶条件.【结果】从张弓老酒大曲中筛选出产细菌200株,其中1株菌株为表皮葡萄球菌的酯化酶活力最高为41.67 U/mL.在单因素实验中发现玉米粉、酵母粉和pH对该菌的产酶能力影响较大,在响应面分析中表明模型拟合度适宜并且合理,最优产酶条件为pH为4,玉米粉最适量为2 g,酵母粉最适量为0.5 g,在此条件下酶活力高达83.33 U/mL,比之前高50.24%.【结论】在张弓老酒大曲中存在丰富的产酯化酶菌种资源且找到一株产酯化酶能力最强的菌株,对其产酶条件进行单因素实验结合响应面分析有利于提高产酶能力.

白灵菇不同栽培菌株的酯酶同工酶多态性分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对12个白灵菇栽培菌株酯酶同工酶的酶谱多样性进行了研究,根据酶谱相似系数计算了菌株间的平均遗传距离。结果显示:12个菌株共检出50条酶带,9种酶带类型,表明白灵菇的酯酶同工酶酶谱分布呈多态性。采用不加权平均法对菌株间的遗传距离进行聚类分析,从树状图反映出12个菌株被分成2大类,类间和类内菌株遗传变异程度不同,但总体上12个供试菌株的遗传变异并不丰富。

6个杏鲍菇菌株生理生化研究

目的:对收集的6个杏鲍菇菌种菌丝进行生理、生化研究,酯酶同工酶法分析菌株间的差异与关系。方法:利用杏鲍菇菌丝阶段的生长速度测定、诱变剂抗性试验和酯酶同工酶比较,对杏鲍菇菌株营养生长阶段的理化指标进行研究,对酯酶同工酶谱进行相似系数和遗传距离分析,确立各菌株的异同。结果:菌株间菌丝生长速度差异不显著;抗诱变剂实验结果显示,2、5、6号菌株对诱变剂抗性较强;酯酶同工酶分析表明,杏鲍菇6个菌株同工酶酶带存在的差异很大。结论:通过试验表明,所选6株杏鲍菇菌种为各自独立菌株。

刺芹侧耳杂交菌株农艺性状与酯酶同工酶分析

对10个刺芹侧耳杂交菌株进行农艺性状和酯酶同工酶分析。结果表明,10个刺芹侧耳杂交菌株中,有6个杂交菌株的产量高于亲株,其中产量最高的为Pe2515菌株;有5个杂交菌株子实体形态特征与亲株Pe1相似,呈保龄球形;有2个杂交菌株为粗棒状,介于双亲株之间;另有2个杂交菌株子实体为细棒状,与Pe2菌体相近。酯酶同工酶聚类分析表明,在隶属度0.325时刺芹侧耳杂交菌株与亲株可分为5大类群,其中杂交菌株可分为2大类群,杂交菌株与亲株之间的隶属度在0.672以下,表明杂交菌株与亲株之间遗传差异较大。

刺芹侧耳杂交菌株Pe2515选育

利用单核体杂交选育出的杂交菌株Pe2515，经对峙培养，酯酶同工酶分析，子实体生长温度条件，产量和形态特征试验表明均与亲株差异显著。Pe2515菌株比亲株Pel菌株增产11．61％-64．25％，比亲株Pe2菌株增产60．34％，比其他对照菌株增产19．48％-50．60％。子实体形态特征偏向亲株Pel菌株，但较Pel菌株的子实体小。酯酶同工酶聚类分析表明，杂交菌株Pe2515与双亲菌株Pel和Pe2遗传相异性在0．75以下。Pe2515菌株子实体生长温度范围为10—25℃，生长温度范围较亲株广。粗蛋白和氨基酸含量介于双亲之间，粗脂肪含量低于双亲株。

21个杏鲍菇菌株比较研究

为了筛选出适宜本地工厂化栽培的杏鲍菇优良菌株,对21个不同来源的杏鲍菇菌株(Pleurotus eryngii)进行了比较试验。结果表明,通过拮抗反应可以把21个菌株分为4组,通过酯酶同工酶分析可以把21个菌株分为7组。经过对菌丝生长速度、子实体生物转化率、子实体形态特征的分析比较, 21个供试菌株中3号、 9号菌株综合性状较好,可作为工厂化栽培的备选菌株。

香菇菌株酯酶同工酶酶谱及其模糊聚类分析

应用聚丙烯酰胺垂直平板凝胶电泳技术 ,对福建省香菇生产上 2 4个常用菌株的酯酶同工酶进行测定 ,发现各菌株在酶谱上有丰富的表达 ,并呈现很强的特异性 ,且在 Rf值 0 .4 81处都出现一条稳定一致的基本酶带。进一步采用 Fuzzy聚类法进行数量分析表明 ,品种间隶属度在[0 .667,1]之间 ,当隶属度为 0 .90 0时将 2 4个菌株分类 ,可得一类为中低温小朵型类 ,而其它菌株自成一类 ,各具特色 ,但温型偏高 。