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Screening of Strains Producing Alkaline Protease from Soil and Study on the Conditions for Enzyme Production
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作者 ZHOU Yi-jun HE Wen-jie +2 位作者 FU Sha-ou TIAN Jun-duan MA Ting-ting 《Meteorological and Environmental Research》 CAS 2011年第8期82-85,共4页
[Objective] The aim was to screen strains producing alkaline protease from soil and study the conditions for enzyme production.[Method] Eight strains producing alkaline protease were isolated from soil through plate i... [Objective] The aim was to screen strains producing alkaline protease from soil and study the conditions for enzyme production.[Method] Eight strains producing alkaline protease were isolated from soil through plate isolation,and the ability of enzyme production was measured by filter paper and Folin-phenol method.The strain with the strongest ability of enzyme production was screened as a candidate strain,then the factors influencing the ability of enzyme production was studied,finally the conditions for enzyme production was optimized through orthogonal test.[Result] No.5 strain was screened as a candidate strain due to its strong ability of enzyme production(6.00 U/ml),which accounted for 134.1% of that of Bacillus licheniformis,and it was gram-positive bacterium belonging to Clostridium.Orthogonal test showed that the optimal condition for producing protease was an environment with pH=11,0.3% of sucrose and 0.8% of peptone in the fermentation medium,and inoculation amount was 105 cfu/ml.In addition,peptone had significant impact on the level of enzyme production.[Conclusion] The study could provide theoretical references for the screening of strains producing alkaline protease. 展开更多
关键词 SOIL SCREENING strain Alkaline protease China
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Mutagenesis of Alkaline Protease-Producing Marine Strains and Enzymatic Properties
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作者 Wei XIA Hua LI +5 位作者 Xiaoli WANG Guoyu ZHANG Chao LI Shaohui ZHU Hao ZHANG Quanhan XU 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2012年第2期32-34,37,共4页
[ Objective] The aim of the research was to select alkaline pmtease-producing strains and provide basis for the application in production. [ Method ] An alkaline protease-preducing strain was isolated from the sea wat... [ Objective] The aim of the research was to select alkaline pmtease-producing strains and provide basis for the application in production. [ Method ] An alkaline protease-preducing strain was isolated from the sea water and sea mud collected from Qingdao coastal area. After ultraviolet mutagenesis and microwave mutagenesis, a target strain ZR-58-3-1-3 was obtained. The protease activity and enzymatic properties of the strain were determined preliminarily. [ Result ] Prote- ase activity of the selected strain reached 145 U/ml. After the compound mutagenesis, protease activity of the fermentation liquid of strain ZR-58-3-1-3 reached 775 U/m|, which was about 4.3 times higher than that of the original strain. The optimal temperature for alkaline protease produced by strain ZR-58-3-1-3 was 45℃, and the optimal pH was 8.5, suggesting it belongs to moderate temperature protease with relatively high thermal stabihty. [ Conclusion] Strain ZR-58-3-1-3 has stable alkaline protease production performance and can be used as an alkaline protease-producing mutant strain. 展开更多
关键词 Alkaline protease Marine strain MUTAGENESIS Enzymatic properties
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芽孢杆菌蛋白酶在食品工业中的应用研究进展 被引量:1
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作者 张明一 孙庆杰 杨洁 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第13期352-359,共8页
芽孢杆菌蛋白酶是一种重要的微生物源蛋白酶,其种类多样、活性显著、研究较为深入,已被广泛应用于食品行业。本文综述了产蛋白酶芽孢杆菌的筛选、高产蛋白酶菌株的选育与工程菌株的构建、蛋白酶发酵条件的优化,分别以植物蛋白和动物蛋... 芽孢杆菌蛋白酶是一种重要的微生物源蛋白酶,其种类多样、活性显著、研究较为深入,已被广泛应用于食品行业。本文综述了产蛋白酶芽孢杆菌的筛选、高产蛋白酶菌株的选育与工程菌株的构建、蛋白酶发酵条件的优化,分别以植物蛋白和动物蛋白为作用对象介绍了芽孢杆菌蛋白酶在食品行业中的应用情况,并对将来的研究方向和发展趋势进行了展望,旨在为芽孢杆菌蛋白酶的深入研究和应用提供参考。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 蛋白酶 菌种筛选 菌株选育 工程菌株构建 发酵条件优化 植物蛋白 动物蛋白
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耐盐碱性蛋白酶菌株LK-3的筛选及酶学性质 被引量:1
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作者 刘可玉 宁喜斌 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期46-53,共8页
为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌(Ba... 为了寻找产碱性蛋白酶活性高且稳定性良好的野生菌株,作者从上海临港区域的东海海水中筛选出一株高产稳定且耐盐的产碱性蛋白酶菌株。对该菌株的形态学特性、生理特性以及16S rDNA基因序列进行测序和分析,确定该菌株为同温层芽孢杆菌(Bacillus stratosphericus),并命名为B. stratosphericus LK-3。酶学性质研究结果显示,该酶的最适作用条件为温度35℃、p H 8.5、最适接种体积分数7%,该酶在上述条件下发酵72 h的酶活力为(581.74±0.81) U/mL。此外该酶具有较好的耐盐性,即使在40 g/dL的高饱和盐质量浓度下仍然保持22.03%的相对原始酶活力。蛋白酶的耐盐性是一个有价值的特性,可将其纯化后作为洗涤剂的生物添加剂应用于工业生产。 展开更多
关键词 碱性蛋白酶 菌株LK-3筛选 同温层芽孢杆菌 酶学性质 耐盐菌
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Isolating and Screening of Effective Decomposing Strain of Silkworm Chrysalis Protein and Study on Parts of Its Enzymatic Properties 被引量:4
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作者 孔军 涂国全 +3 位作者 邝哲师 赵祥杰 叶明强 罗国庆 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第2期8-11,共4页
[Objective] The research aimed to obtain an effectively-decomposing strain of silkworm chrysalis protein and discuss its enzymatic properties.[Method] The effectively-decomposing bacteria of protein was isolated from ... [Objective] The research aimed to obtain an effectively-decomposing strain of silkworm chrysalis protein and discuss its enzymatic properties.[Method] The effectively-decomposing bacteria of protein was isolated from the decayed silkworm chrysalis by using dilution plate and its enzymatic properties were tested after primary screening and second screening.The enzyme activity was determined and the intermediate and small molecule protein content in silkworm chrysalis was measured after solid-state fermentati... 展开更多
关键词 Decomposing strain of silkworm chrysalis Isolating and screening Neutral protease Enzymatic properties
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基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因及其表达验证
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作者 杨凯尧 刘功炜 +3 位作者 李林芳 王智伟 崔雯元 杨雨鑫 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第4期28-38,共11页
【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根... 【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根据基因丰度结果确定后续研究的功能基因。利用大肠杆菌BL21(DE3)对功能基因进行诱导表达,对表达产物进行酶活性测定。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,将密码子优化后的功能基因分别敲入枯草芽孢杆菌C6基因组ctc位点并进行表达验证。【结果】从Fosmid文库1700个克隆子中筛选到1个具有蛋白酶活性的阳性克隆Pro4-C5。通过二代测序技术,鉴定出3个潜在的蛋白酶基因gene0833(内肽酶,EC编号:EC3.4.21.53)、gene0196(金属内肽酶,EC编号:EC3.4.24)和gene0585(羧肽酶,EC编号:EC3.4.17.14)以及1个L-天冬酰胺酶基因(gene0683,EC编号:EC3.5.1.1)。以pET-28a(+)为表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)原核诱导表达发现,gene0585和gene0196未表达;gene0833表达的蛋白分子质量为87 ku,蛋白酶活性为10.45 U/mL;gene0683表达的蛋白分子质量为37 ku,L-天冬酰胺酶活性为88.52 U/mL,同时发现该蛋白也具有蛋白酶活性,酶活性为5.25 U/mL。将密码子优化后的gene0683和gene0833定点敲入枯草芽孢杆菌C6基因组中表达发现,gene0833未表达,gene0683表达的蛋白酶活性为109.72 U/mL,相比原始菌株(100.97 U/mL)显著提高了8.67%(P<0.01);L-天冬酰胺酶活性为31.63 U/mL,相比原始菌株(22.79 U/mL)显著提高了30.06%(P<0.01)。【结论】从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选和鉴定出了2个具有蛋白酶活性的功能基因(gene0833和gene0683),均来源于微小杆菌属(Exiguobacterium),其中gene0683在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达产物具有较高的蛋白酶和L-天冬酰胺酶酶活性。 展开更多
关键词 FOSMID文库 蛋白酶 L-天冬酰胺酶 原核表达 基因筛选 菌株生产
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响应面法优化混菌发酵膏状腐乳前发酵工艺
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作者 刘秦明 白彬阳 +2 位作者 陈中爱 薛桥丽 胡永金 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第8期218-223,共6页
为满足市场对腐乳的多样化需求,采用多菌株混菌发酵制备膏状腐乳。以蛋白酶活力为评价指标,响应面法优化前发酵条件,并测定膏状腐乳理化指标、游离氨基酸组分及感官评分。结果表明,混菌发酵膏状腐乳前发酵的最优工艺条件为:少孢根霉(Rhi... 为满足市场对腐乳的多样化需求,采用多菌株混菌发酵制备膏状腐乳。以蛋白酶活力为评价指标,响应面法优化前发酵条件,并测定膏状腐乳理化指标、游离氨基酸组分及感官评分。结果表明,混菌发酵膏状腐乳前发酵的最优工艺条件为:少孢根霉(Rhizopus oligosporus):毛霉(Mucor)∶酵母∶植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)接菌比例为4∶2∶2∶2,接菌浓度1.0×10^(6)CFU/mL,发酵温度32℃,发酵时间60 h,在此条件下,混菌发酵膏状腐乳的蛋白酶活力为123.84μg/g,显著高于少孢根霉(90.07μg/g)和毛霉(102.14μg/g)单菌发酵腐乳(P<0.05)。混菌发酵膏状腐乳前发酵结束时游离氨基酸总量为5.77 mg/g,其中34.35%是必需氨基酸,含量为1.98 mg/g,高于单菌株少孢根霉(4.25 mg/g)和毛霉(3.66 mg/g)发酵腐乳的游离氨基酸总量。对比单菌和混菌发酵剂发酵膏状腐乳前发酵终点时的感官品评结果,混菌发酵膏状腐乳的综合评分最高,香气浓郁,且滋味丰富。综合来看,混菌发酵膏状腐乳在各方面均优于单菌发酵膏状腐乳。 展开更多
关键词 膏状腐乳 混菌发酵 响应面法优化 蛋白酶 游离氨基酸
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具有益生功能芽孢杆菌的筛选鉴定及特性研究
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作者 董惠心 赵龙妹 +4 位作者 冯铭 李旺 李元晓 曹平华 何万领 《中国农学通报》 2024年第21期146-155,共10页
本研究旨在筛选出产酶能力及抑菌性能优良的发酵菌株,为新型饲料资源的开发和抗生素替代品的研究提供参考。以蜡样芽胞杆菌菌株H14为出发菌株,分析其酶学特性和抑菌性能,通过单因素试验对发酵菜籽粕的饲料添加量与发酵时间进行优化。筛... 本研究旨在筛选出产酶能力及抑菌性能优良的发酵菌株,为新型饲料资源的开发和抗生素替代品的研究提供参考。以蜡样芽胞杆菌菌株H14为出发菌株,分析其酶学特性和抑菌性能,通过单因素试验对发酵菜籽粕的饲料添加量与发酵时间进行优化。筛选鉴定出一株产纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶的蜡样芽胞杆菌H14。产纤维素酶最适反应条件为60℃,pH 9,酶活11.51 U/mL,蛋白酶酶活73.68 U/mL,淀粉酶酶活5.96 U/mL,木聚糖酶酶活14.02 U/mL。对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最大抑菌直径分别为18.200±0.200 mm和17.567±0.493 mm。发酵菜籽粕产纤维素酶的最佳条件为菜籽粕添加量25%,发酵48 h,酶活为12.608 U/mL,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌效果分别为菜籽粕添加量25%,发酵48 h,抑菌直径为24.933±0.204 mm;菜籽粕添加量25%,发酵72 h,抑菌直径为27.400±0.529 mm,发酵产物含蔗糖、木糖、葡萄糖。综上所述,本研究成功筛选出一株具有良好产酶和抑菌特性的发酵菌株H14,其在发酵菜籽粕生产中表现出良好的应用潜力,为未来发酵饲料的研发提供了有价值的参考。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 筛选鉴定 酶学特性分析 发酵菜籽粕 抑菌性能 发酵菌株 纤维素酶 蛋白酶 淀粉酶 木聚糖酶 饲料资源转化 抗生素替代品
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酱香型高温大曲中蛋白酶高产菌株的选育
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作者 李芳香 郭中欢 +1 位作者 张稳 谢艺 《酿酒科技》 2024年第8期43-48,共6页
蛋白酶在酿造、食品等行业中应用广泛。酱香型高温大曲中含有大量产蛋白酶菌株,从中筛选得到1株高产蛋白酶的芽孢菌株J-230-3,采用Folin-酚法、形态学鉴定法、物理诱变等进行研究。结果显示,从高温大曲中采用梯度稀释法初步获得10株透... 蛋白酶在酿造、食品等行业中应用广泛。酱香型高温大曲中含有大量产蛋白酶菌株,从中筛选得到1株高产蛋白酶的芽孢菌株J-230-3,采用Folin-酚法、形态学鉴定法、物理诱变等进行研究。结果显示,从高温大曲中采用梯度稀释法初步获得10株透明圈较大的株菌,对10株菌株摇瓶复筛后测其酶活,获得2株酶活较高的菌株J-1和J-2,其酶活分别为974 U/mL、1064 U/mL;通过革兰氏染色和芽孢染色初步鉴定两株菌为G+芽孢杆菌;选择酶活最高的菌株J-2进行紫外诱变,菌株致死率高达74%,该菌株在利福平浓度为30μg/mL的平板上,酶活高达1402 U/mL,命名为J-230-3,与出发菌株相比,该菌株的产酶能力约提高了31.8%,连续经过5次传代培养后,其酶活仍保持在1400 U/mL以上,具有良好且稳定的遗传特性。高产蛋白酶菌株的筛选及培育对白酒风味具有重要意义。 展开更多
关键词 高温大曲 高产蛋白酶 菌株筛选 紫外诱变 选育
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蛋白酶枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵工艺优化
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作者 曹倩荣 刘春卯 +2 位作者 郑翔 贾振华 吴芳彤 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第14期100-106,共7页
试验旨在优化枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵蛋白酶活性,为国内饲用蛋白酶企业提供技术支持。试验对发酵过程进行葡萄糖含量和比消耗速率监测,确定碳源、氮源对该菌株葡萄糖消耗的动态影响。通过单因素和响应面试验... 试验旨在优化枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵蛋白酶活性,为国内饲用蛋白酶企业提供技术支持。试验对发酵过程进行葡萄糖含量和比消耗速率监测,确定碳源、氮源对该菌株葡萄糖消耗的动态影响。通过单因素和响应面试验对发酵培养基成分进行优化。结果显示:以0~10 h菌体OD_(600nm) 值为参数优化发酵培养基,以促进菌体生长,获得更高菌体量。10 h以后以酵母粉5 g/L、蛋白胨70 g/L进行补料,延长稳定期,以达到最大单位酶活性。优化发酵培养基的培养条件为:酵母粉60 g/L、蛋白胨30 g/L、消旋葡萄糖10 g/L、MgSO_(4) 3 g/L,发酵8 h时,添加0.5‰异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和2‰蛋白酶抑制剂,最终发酵蛋白酶活性为1156 U/mL。研究表明,延迟稳定期能够提高培养基中蛋白胨含量,有利于提高菌体对葡萄糖比消耗速率,蛋白胨对菌体适应周围环境有促进作用,发酵过程中维持葡萄糖浓度处于较低的水平,可以有效避免乙酸生成,促进菌体生长和提高产酶效能,使菌体对底物的消耗保持最旺盛状态。 展开更多
关键词 蛋白酶 工程菌株 酶活性 发酵工艺
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功能蛋白酶催化及应用进展 被引量:2
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作者 周北雅 郭艳东 +4 位作者 薛雅鞠 袁江月 纪秀玲 李壮 黄玉红 《生物加工过程》 CAS 2023年第4期419-438,共20页
蛋白酶广泛存在于动物、植物及微生物体内,在生物体内的代谢和合成过程中发挥着重要作用,也是一种重要的工业酶制剂,其中,微生物蛋白酶几乎占据着全球商业蛋白酶的三分之二。随着生物技术的兴起,蛋白酶在各个领域的应用日益广泛,通过酶... 蛋白酶广泛存在于动物、植物及微生物体内,在生物体内的代谢和合成过程中发挥着重要作用,也是一种重要的工业酶制剂,其中,微生物蛋白酶几乎占据着全球商业蛋白酶的三分之二。随着生物技术的兴起,蛋白酶在各个领域的应用日益广泛,通过酶工程改造和基因工程菌株构建获得高稳定性的蛋白酶是其工业应用的关键。本文首先对功能蛋白酶的来源进行了分析,进一步对功能蛋白酶的类型、功能及其作用机制进行了阐述;然后综述了部分重要功能蛋白酶的酶工程改造和基因工程菌株构建方法;最后总结了功能蛋白酶的应用领域并提出了未来重要功能蛋白酶的应用方向。 展开更多
关键词 功能蛋白酶 蛋白酶来源 基因工程菌 作用机制 应用领域
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传统发酵霉豆渣菌种分离鉴定及其产酶能力分析 被引量:1
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作者 庞春霞 徐伟程 +5 位作者 甘甜 张强 郭斯统 陈育如 孔晓雪 罗海波 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第5期107-113,共7页
为实现豆渣的高值化利用,解决豆渣资源浪费以及霉豆渣规模化生产受限的问题。本研究以湖北咸宁传统发酵霉豆渣为材料进行微生物分离鉴定,共得到5种细菌和3种霉菌,分别命名为J1~J8。根据形态学观察、生理生化特征分析、16S rRNA及ITS测... 为实现豆渣的高值化利用,解决豆渣资源浪费以及霉豆渣规模化生产受限的问题。本研究以湖北咸宁传统发酵霉豆渣为材料进行微生物分离鉴定,共得到5种细菌和3种霉菌,分别命名为J1~J8。根据形态学观察、生理生化特征分析、16S rRNA及ITS测序结果,最终确定J1~J5分别为水生拉恩氏菌属B13菌株(Rahnella aquatilis strain B13)、戊糖片球菌属S1菌株(Pediococcus pentosaceus strain S1)、成团泛菌属NSD菌株(Pantoea agglomerans strain NSD)、肠膜明串珠菌属2020GS202菌株(Leuconostoc mesenteroides strain 2020GS202)和枯草芽孢杆菌属A10菌株(Bacillus subtilis strain A10),J6~J8分别为层出镰刀菌CanR-8菌株(Fusarium proliferatum strain CanR-8)、黑曲霉DZ-4-3-1菌株(Aspergillus niger strain DZ-4-3-1)和总状毛霉M-22菌株(Mucor racemosus f.racemosus strain M-22)。8株菌产酶能力测定结果表明,枯草芽孢杆菌(J5)产蛋白酶和纤维素酶的能力最强,分别达到153.247和66.552 U/mL,其他菌株的产酶能力相对较低。枯草芽孢杆菌、总状毛霉和黑曲霉可能是传统霉豆渣营养与特殊风味形成的主要发酵菌种。 展开更多
关键词 发酵豆制品 菌种鉴定 16S rRNA 蛋白酶活力 纤维素酶活力
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传统农家酱产蛋白酶菌株的分离及其在豆浆的应用 被引量:2
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作者 鲍捷 任晓蕾 +3 位作者 郭宝松 梁会朋 林心萍 张素芳 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第11期266-273,共8页
豆浆富含植物蛋白,但由于植物蛋白相较动物蛋白不易被人体吸收。利用产蛋白酶菌株发酵豆浆,可将植物蛋白降解成多肽和氨基酸,提高其消化吸收率。传统农家酱是以大豆为主要原料的传统发酵食品,含有大量能够水解大豆蛋白的优良菌株。该研... 豆浆富含植物蛋白,但由于植物蛋白相较动物蛋白不易被人体吸收。利用产蛋白酶菌株发酵豆浆,可将植物蛋白降解成多肽和氨基酸,提高其消化吸收率。传统农家酱是以大豆为主要原料的传统发酵食品,含有大量能够水解大豆蛋白的优良菌株。该研究从传统农家酱中分离到8株产蛋白酶的芽孢杆菌并用于豆浆处理,处理后豆浆的可溶性肽含量显著提高,其中菌株BJ-20处理效果最显著;氨基态氮含量和水解度也有显著变化,其中BJ-6处理后的豆浆最佳,氨基态氮含量提高了10.87%,水解度为23.49%。同时,处理后豆浆的组织状态得到了明显改善。该研究丰富了豆类发酵菌种库,提高了大豆蛋白利用率,丰富了大豆产品种类,为大豆保健产品开发提供参考及理论支持。 展开更多
关键词 农产品 传统农家酱 产蛋白酶菌株 可溶性肽
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甜面酱微生物多样性、高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化
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作者 魏雨萌 何劲 +2 位作者 上官宗渺 徐超 旷华明 《中国酿造》 CAS 北大核心 2023年第4期103-111,共9页
为解析传统甜面酱中微生物群落结构及筛选高产蛋白酶菌株,利用宏基因组学技术探究其中微生物的演替规律,通过滤纸片法与福林法从中筛选高产蛋白酶菌株,并采用单因素试验及响应面试验优化其产酶条件。结果表明,甜面酱发酵过程中的优势真... 为解析传统甜面酱中微生物群落结构及筛选高产蛋白酶菌株,利用宏基因组学技术探究其中微生物的演替规律,通过滤纸片法与福林法从中筛选高产蛋白酶菌株,并采用单因素试验及响应面试验优化其产酶条件。结果表明,甜面酱发酵过程中的优势真菌为曲霉属(Aspergillus)、接合酵母属(Zygosaccharomyces)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces);优势细菌为芽孢杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)、假单胞菌属(Pseudomonas)。筛选到一株高产蛋白酶细菌PC9,其被鉴定为莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。菌株PC9最优产酶条件为:1%果糖,1%酵母浸膏,0.5%硫酸铵,1%NaCl,发酵温度28.5℃,发酵时间2.0 d、初始pH 9.0、接种量6%。在此优化条件下,碱性蛋白酶活力达到404.153 U/mL,是优化前的8.42倍。 展开更多
关键词 甜面酱 微生物多样性 蛋白酶高产菌株 筛选鉴定 产酶条件优化
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丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建 被引量:12
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作者 刘丽 刘谨 +2 位作者 仇润祥 朱兴国 唐国敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期667-670,共4页
黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达... 黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒pGT10 vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T2 1,检测在蛋白酶缺陷株AspergillusnigerT2 1 2 0 1和原株T2 1中VHb的分泌表达 ,结果表明在A .nigerT2 1 2 0 1中VHb表达水平显著高于原株 ,但Northernblot却显示在两菌株中vnb基因的转录水平近似 。 展开更多
关键词 丝状真菌 表达分泌系统 受体菌 构建 黑曲霉T21 蛋白酶缺陷株 VHB
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酸性蛋白酶高产菌株6042(Aspergillus niger 6042)的选育和形态鉴定 被引量:11
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作者 钱玉英 冯观泉 +3 位作者 费笛波 叶玲玲 章锦秋 何福恒 《浙江农业学报》 CSCD 1994年第4期253-256,共4页
由黑曲霉CPu菌株用60Coγ射线诱变处理,经初筛、复筛,获得5株酸性蛋白酶变异菌株。其中6042菌株的形态变异株酸性蛋白活力比出发菌株提高近4倍,经多次传代酶活力稳定。用福林法测定,酸性蛋白酶活力高达2.3万u/g... 由黑曲霉CPu菌株用60Coγ射线诱变处理,经初筛、复筛,获得5株酸性蛋白酶变异菌株。其中6042菌株的形态变异株酸性蛋白活力比出发菌株提高近4倍,经多次传代酶活力稳定。用福林法测定,酸性蛋白酶活力高达2.3万u/g曲。经形态鉴定菌落大小和孢子颜色与原始菌株有明显差异。 展开更多
关键词 蛋白酶 菌株诱变 酸性蛋白酶 变异菌株
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白僵菌菌株毒力与Pr1蛋白酶活性相关性研究 被引量:6
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作者 田志来 朱晓敏 +3 位作者 李启云 高月波 温嘉伟 赵宇 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期607-611,共5页
利用专一性短肽底物Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA对不同突变体菌株进行Pr1蛋白酶活性测定,同时应用玉米螟3龄幼虫对不同突变体菌株进行毒力测定,求算LT50值。以不同突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活为自变量,菌株毒力LT50值为因变量,进行相关性... 利用专一性短肽底物Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA对不同突变体菌株进行Pr1蛋白酶活性测定,同时应用玉米螟3龄幼虫对不同突变体菌株进行毒力测定,求算LT50值。以不同突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活为自变量,菌株毒力LT50值为因变量,进行相关性分析,得到突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活与毒力LT50值的线性回归方程:y=-2.411 6x+31.405,r2=0.521 6。由线性回归方程可以得出:不同突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活与菌株毒力LT50值呈负相关趋势,说明菌株的Pr1蛋白酶活性越高,菌株的LT50值就越低,菌株的毒力也就越大。两者相关系数r=-0.722 2,在0.05水平上相关显著,因此建议将Pr1蛋白酶的酶活性作为菌株初筛时的一个补充指标,但由于Pr1蛋白酶比酶活与菌株毒力LT50值相关性未达极显著水平,所以不建议将Pr1蛋白酶的酶活性作为菌株初筛时的替代指标。 展开更多
关键词 白僵菌 菌株毒力 Pr1蛋白酶 比酶活 相关性
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一株高产蛋白酶芽孢杆菌的鉴定 被引量:16
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作者 刘海军 乐超银 +3 位作者 邵伟 王健 李金鞠 梁薇 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第9期18-20,共3页
通过经典生理生化实验和16S rRNA序列分析,对新分离出的1株高产蛋白酶的芽孢杆菌进行系统鉴定。研究发现该菌卵磷脂酶试验和马尿酸盐反应均为阳性,并在60℃仍有蛋白酶活性。将该菌16S rRNA序列在Genbank中进行blast,发现其与枯草芽孢杆... 通过经典生理生化实验和16S rRNA序列分析,对新分离出的1株高产蛋白酶的芽孢杆菌进行系统鉴定。研究发现该菌卵磷脂酶试验和马尿酸盐反应均为阳性,并在60℃仍有蛋白酶活性。将该菌16S rRNA序列在Genbank中进行blast,发现其与枯草芽孢杆菌EHFS1-S02Hc的16S rRNA序列同源性高达99.63%,分离出的高产蛋白酶芽孢杆菌可能为一新亚种或生物型。 展开更多
关键词 菌种鉴定 芽孢杆菌 16SrRNA 蛋白酶 水解特性
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章鱼肠道产蛋白酶菌的筛选、产酶条件及酶学性质 被引量:12
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作者 任佩 金玉兰 朴美子 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期189-193,共5页
采用检测水解透明圈和测定蛋白酶活力的方法,从章鱼肠道中分离筛选出一株高产蛋白酶的菌株QDV-3,并对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明:QDV-3菌株在以果糖为碳源,蛋白胨为氮源,培养基初始pH8.0,培养温度30℃的条件下振荡培养3.5d... 采用检测水解透明圈和测定蛋白酶活力的方法,从章鱼肠道中分离筛选出一株高产蛋白酶的菌株QDV-3,并对其产酶条件及酶学性质进行研究。结果表明:QDV-3菌株在以果糖为碳源,蛋白胨为氮源,培养基初始pH8.0,培养温度30℃的条件下振荡培养3.5d时,所产蛋白酶活力最高,Mn2+和Ba2+对菌株产蛋白酶有促进作用。所产蛋白酶在SDS-PAGE电泳上显示至少有5种蛋白酶,分子质量范围为32.4~124.2kD,蛋白酶的最适作用温度为50~60℃,最适作用pH值为9~11,在50℃条件下保温1h,剩余酶活力为95%,热稳定性较好。 展开更多
关键词 产蛋白酶菌 蛋白酶 酶学性质
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碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究 被引量:17
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作者 唐雪明 王正祥 +3 位作者 邵蔚蓝 刘吉泉 方慧英 诸葛健 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期729-734,共6页
在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯... 在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。 展开更多
关键词 碱性蛋白酶 工程菌 发酵条件 重组酶 纯化 性质
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