补阳还五汤及其精简方抗脑缺血损伤功效比较

目的评价补阳还五汤及其精简方对脑缺血损伤的保护作用。方法体内实验:SD大鼠按体质量随机分为假手术组、局灶性脑缺血(MCAO)模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方组,每组10只,观察各组大鼠体质量、脑梗死面积和脑含水量等指标的变化。体外实验:采用过氧化氢(H2O2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)致损,建立体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分为正常组、空白对照组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方不同浓度组(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/mL)及模型组,MTT法考察补阳还五汤及其精简方对模型细胞的保护作用。结果体内实验表明,补阳还五汤及其精简方给药7 d后,均能恢复MCAO模型大鼠的体质量、降低脑梗死面积、减轻脑组织水肿,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),两方组间比较差异无统计学意义(P>0.05);体外实验表明,补阳还五汤及其精简方与细胞作用2 h即能发挥保护作用,对H2O2所致的氧化应激损伤有明显的保护作用,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),细胞存活率升高,同一浓度两方组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论体内外实验均表明,补阳还五汤精简方在抗脑缺血损伤方面功效显著,且药效不亚于补阳还五汤,在保证药效的前提下大大节约了中药资源。

补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞模型大鼠海马组织Cdk5的调控

目的评价补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠海马组织周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,Cdk5)的调控。方法将♂SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg^(-1))及补阳还五汤精简方干预组(灌胃2.41 g·kg^(-1)),每组按给药后1、3、7、14、28 d再各分5小组。采用免疫组化法、Western blot法和RT-PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中Cdk5的表达。结果 MCAO模型大鼠海马组织中,脑缺血后1 d即出现Cdk5上调趋势,并随着脑缺血的加剧,Cdk5的表达继续上调,其中mRNA及蛋白水平在7~14 d达最大,28 d则出现下降趋势,与各时间点假手术组比较P<0.01,提示脑缺血损伤将激活Cdk5信号转导途径;补阳还五汤精简方干预后的3、7、14、28 d均能明显降低Cdk5的表达,与各时间点模型组比较P<0.05,且随着干预时间的延长,下调趋势越明显,干预28 d后,Cdk5的表达接近假手术组,提示补阳还五汤精简方可下调Cdk5的异常表达,与补阳还五汤原方比,两方对Cdk5的调控差异无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤精简方可能通过调控Cdk5的表达水平对脑缺血海马组织发挥保护作用。

补阳还五汤及不同配伍组方对缺血性脑中风后大鼠神经增殖作用的对比研究

目的观察补阳还五汤及不同配伍组方对缺血性脑中风后大鼠神经增殖作用的影响。方法采用机械开颅电凝法阻断大鼠大脑中动脉24h后,用随机电脉冲刺激仪每天刺激2h,连续15天,造成大鼠缺血性中风模型,分为模型组(给予等体积生理盐水灌胃)、补阳还五汤组、补阳还五汤去地龙组、当归补血汤组(同时给予相应药物灌胃进行干预治疗)。以免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中5-溴脱氧核苷尿嘧啶(Br-dU)的表达。结果补阳还五汤组和补阳还五汤去地龙组大鼠海马区域中有大量BrdU阳性细胞存在,排列密集,部分呈簇状聚集,与模型组相比较,差异有显著性(P<0.01),并且脑缺血侧海马区域BrdU阳性细胞数与对侧比较显著增多(P<0.05);当归补血汤组与模型组和大鼠海马区域BrdU阳性细胞数比较,差异无显著性(P>0.05)。结论补阳还五汤促神经增殖作用优于当归补血汤。

补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响

目的观察补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响,探讨其作用机制。方法将120只SD大鼠采用随机数字表法分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,造模2 h后,各给药组给予相应药物灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。各组分别于脑缺血后1、3、7 d检测脑组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。同时,采用实时荧光定量PCR、Western blot检测大鼠脑缺血后γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)m RNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织GSH含量及GSH-Px活性明显降低(P<0.05,P<0.01),γ-GCS m RNA及蛋白表达升高,其中第1日最明显(P<0.05);与模型组比较,各给药组多能不同程度升高GSH含量及GSH-Px活性,同时上调γ-GCS m RNA及蛋白表达,其中第3日差异有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤精简方通过调控脑缺血后谷胱甘肽抗氧化系统中GSH、GSH-Px及γ-GCS的表达,发挥抗氧化作用。

补阳还五精简方的体外筛选及体内验证研究

目的筛选补阳还五精简方的最佳配伍,并进行验证。方法采用H2O2诱导建立PC12细胞氧化应激模型。考察不同浓度0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/m L补阳还五汤对体外氧化应激模型细胞的保护作用,确定最佳作用浓度。采用正交试验设计,将补阳还五汤各单味药随机配伍分成补阳还五汤不同拆方组及对照组(仅加细胞培养基)、正常组(无H2O2和药物处理)、模型组,考察对PC12细胞的保护作用,筛选精简方,确定精简方各单味药的配伍比例,MTT法测定各组细胞存活率。采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和精简方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,验证筛选结果。结果与其他拆方组比较,黄芪+川芎+地龙对PC12细胞的保护作用最佳(P<0.05),且与补阳还五汤原方相当;与模型组比较,补阳还五汤组及精简方各剂量组均能改善模型大鼠大脑皮层梗死面积、降低脑组织水肿程度(P<0.05),且以精简方中剂量组最佳。结论补阳还五精简方最佳配伍为黄芪、川芎、地龙,其比例为10∶3∶1。

补阳还五汤精简方对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的观察补阳还五汤精简方对氧化应激损伤后血管内皮细胞的保护作用,并从核转录因子E2相关因子/抗氧化反应元件(NF-E2-related factor 2/antioxidant response element,Nrf2/ARE)途径探讨其作用机制。方法采用H_2O_2作用大鼠血管内皮细胞4 h建立体外血管内皮细胞氧化应激模型,根据不同处理分成正常组,模型组,补阳还五汤含药血清组(补阳组),补阳还五汤精简方含药血清组(5%精简组、10%精简组、20%精简组)6组。采用倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测血管内皮细胞调亡;测定细胞SOD活力、MDA含量;采用Western blot法检测细胞Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达。结果与模型组比较,含药血清组均能不同程度改善细胞形态,升高细胞存活率,其中10%精简组较5%精简组、20%精简组细胞损伤程度低;与模型组比较,补阳组和10%精简组可有效抑制细胞凋亡(P<0.05);与模型组比较,补阳组及10%精简组可显著提升SOD活力(P<0.01);补阳组、10%精简组及20%精简组可降低MDA含量(P<0.05);补阳组及10%精简组可明显上调Nrf2、HO-1蛋白表达(P<0.05)。结论 10%补阳还五汤精简方可以显著减轻氧化应激造成血管内皮细胞的损伤,抑制细胞调亡,这一作用可能与上调Nrf2/ARE抗氧化信号通路途径表达有关。

补阳还五汤类方对氧化应激PC12模型细胞CDK5及凋亡因子的影响

目的观察补阳还五汤类方对氧化应激模型细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及凋亡因子的影响。方法以0.3 mmol·L^-1的H 2O 2与PC12细胞共同作用2 h,成功复制脑缺血体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分成正常组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。酶联免疫法检测胞外培养液中L-LDH的含量和胞内GSH的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量,细胞免疫荧光法检测胞内CDK5、Tau、Bax、Bcl-2蛋白的表达,qPCR法检测胞内凋亡因子caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA的表达。结果补阳还五汤类方能有效降低氧化应激模型细胞培养液中L-LDH的含量,增加胞内GSH、降低胞内ROS、抑制模型细胞内CDK5和Tau蛋白的过表达,下调凋亡因子caspase-3和Bax/Bcl-2。结论补阳还五汤类方可能通过CDK5信号转导途径有效抑制神经细胞凋亡,对脑缺血后神经细胞的损伤发挥保护作用。

补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及Nrf2/HO-1信号途径的影响

目的观察补阳还五汤精简方对大鼠脑缺血后血管新生及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号途径的影响。方法 120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,各组给予相应处理。在d 1、3、7三个时间点取脑组织进行检测,免疫组织化学法检测血浆Ⅷ因子相关抗原(v WF),测定微血管密度(MVD)。采用Real-time PCR和Western blot法检测大鼠脑组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达。结果 1与假手术组比,模型组v WF阳性表达微血管在d 3时表达明显升高(P<0.05),给药组d 7与模型组比较差异有显著性(P<0.05);2假手术组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白呈少量表达,模型组Nrf2蛋白表达水平d 3与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01),各给药组能上调Nrf2mRNA及蛋白表达,其中Nrf2mRNA在d 7,Nrf2蛋白表达在d 1及d 7上调最明显,与同时间点模型组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组HO-1mRNA及蛋白在d 7与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),各给药组HO-1mRNA在d 3,HO-1蛋白在d 3及d 7上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤精简方促进脑缺血后血管新生,这一作用可能与调控Nrf2/HO-1信号途径的表达有关。

辨证分型治疗老年心脑血管疾病随机平行对照研究

[目的]观察辨证分型治疗老年心脑血管疾病疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将112例住院患者按病志号抽签方法简单随机分两组随机分为两组。对照组56例非洛地平,5mg/次,1次/d;强心剂、利尿剂、降压药、抗血栓药物、血管紧张素转换酶抑制剂以及血管紧张素Ⅱ受体阻断剂等对症治疗。治疗组56例高血压-天麻钩藤饮(桃仁、杜仲各12g,赤芍、天麻各15g,川芎10g,玄参8g,红花3g,水蛭5g,大黄6g,丹参20g;头痛加菊花10g,钩藤12g;便秘加熟地生8g,何首乌12g;心烦口渴加黄柏10g,知母12g;畏寒肢冷加仙茅6g,附子10g);冠心病-补气活血方(桃仁、红花、党参、川芎各10g,当归15g,丹参20g,枳实12g,黄芪30g;阳虚加桂枝10g,杜仲12g;阴虚加玉竹、麦冬各10g;痰浊加胆南星10g,半夏12g);心力衰竭(①气虚血瘀——补阳还五汤,赤芍、川芎、甘草、当归、丹参10g,黄芪12g,红花6g,红参8g,茯苓15g;②脾肾阳虚——真武汤加减,白术6g,芍药、茯苓各8g,附子^(炮,去皮,破八片)9g,生姜(切)12g;③气阴两虚——益气养阴汤,郁金、甘草~炙6g,白芍、麦冬各8g,党参、生姜、茯苓各10g,黄芪、生地、桂枝、大枣各12g),1剂/d,水煎300mL,早、晚各1次口服。连续治疗15d为1疗程。观测临床表现、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]治疗组显效38例,有效14例,无效4例,总有效率92.86%;对照组显效19例,有效26例,无效11例,总有效率80.36%;治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。不良反应对照组18例,治疗组2例,未影响继续观察。[结论]辨证分型治疗老年心脑血管疾病,疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

益气活血方及其拆方治疗冠心病心力衰竭气虚血瘀证的双盲随机对照试验

目的:观察益气活血方及其拆方治疗冠心病心力衰竭气虚血瘀证的临床疗效,以期为从气血理论防治冠心病心力衰竭提供一定的临床依据。方法:将160例冠心病心力衰竭气虚血瘀证患者随机分成对照组、益气组、活血组、益气活血组,每组40例。4组均采用标准化西药治疗。在此基础上,对照组运用益气活血方模拟剂,益气组运用益气方,活血组运用活血方,益气活血组运用益气活血方。1包/次,日2次,疗程3个月。对治疗前后4组中医证候积分(总积分、气虚积分、血瘀积分)、NYHA心功能分级、能量代谢相关指标(ADP/ATP比值)、凝血四项进行比较,并评估益气活血方与其拆方的安全性。结果:治疗后除活血组外,其余各组中医证候总积分、气虚及血瘀积分均较治疗前显著下降(P<0.01,P<0.05),益气活血组中医证候总积分较对照组显著降低(P<0.05)。4组NYHA心功能分级较治疗前皆显著好转(P<0.01);与对照组比较,益气活血组改善心功能效果更佳(P<0.05)。活血组、益气活血组ADP/ATP比值均较治疗前显著下降(P<0.01,P<0.05)。与治疗前比较,益气活血组APTT、TT显著延长,FIB含量显著降低(P<0.01,P<0.05);与活血组比较,益气活血组更能降低FIB含量,延长TT(P<0.05)。治疗期间,所有患者都未发生与服用试验药物有关的明显不良事件。结论:在西药规范化治疗基础上运用益气活血方及其拆方,可提高气虚血瘀型冠心病心力衰竭患者的临床疗效,改善心功能,调节能量代谢及凝血功能,并具有良好的安全性,其中以益气活血方效果最佳。