三尖杉悬浮培养细胞中hinokiol的定量分析

建立了高效液相色谱分析三尖杉悬浮培养细胞中次生代谢产物的方法,实现了次生代谢产物的分离以及hinokiol的定量分析。样品经甲醇提取后,再用氨水-氯仿萃取。采用Apollo C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温为30℃,检测波长为290 nm,流速为1 mL/min。在0.0125～0.2 g/L范围内,hinokiol的色谱峰面积与质量浓度之间具有良好的线性关系。采用该方法测定了实际样品中hi-nokiol的含量,并进行了3个水平的加标回收试验,其回收率为87.2%～94.7%,相对标准偏差(n=3)为0.9%～4.2%。该方法可靠、重现性好,适合对植物培养细胞中的hinokiol进行分析。

晶体结构中罕见的O-H…π堆积作用

Hinokiol是一种在植物中含量较少的二萜类化合物,对一些细菌有非常好的杀灭作用。Hinokiol从糙苏(Phlomis umbrosa Turcz)中首次分离出来,利用红外图谱和核磁图谱确定了其结构,并利用单晶X-衍射技术对其晶体结构和构象进行了分析,发现Hinokiol晶体结构中除存在氢键外还存在一种罕见的O-H…π堆积作用,这里对O-H…π堆积作用的特征进行了简单地描述。

和厚朴酚通过Hippo-YAP信号通路影响鼻咽癌CNE1细胞周期与凋亡

目的:探究和厚朴酚对CNE1鼻咽癌细胞周期和凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度的和厚朴酚处理CNE1细胞,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法测定细胞的活性;将CNE1细胞分为空白对照组,10、20、40 μmol/L和厚朴酚处理组和10 μg/ml顺铂组。流式细胞术检测细胞周期分布,线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位,原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测细胞凋亡,免疫印迹检测细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期蛋白D1(G 1/S specific cyclin D1,cyclin D1)蛋白表达;体外培养CNE1细胞,和厚朴酚处理后进行转录组测序,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Yes激酶相关蛋白(yes-associated protein delta,YAP)mRNA表达,免疫印迹检测磷酸化YAP蛋白(phospho-YAP,p-YAP)以及细胞核中YAP蛋白表达水平,免疫荧光检测YAP蛋白核分布;将细胞分为对照组、哺乳动物STE20样激酶1/2(mammalian STE20-like kinase 1/2 inhibitor,MST1/2)抑制剂(XMU-MP-1)组、和厚朴酚组、XMU-MP-1+和厚朴酚组,利用免疫印迹、流式细胞术和TUNEL法观察Hippo通路在和厚朴酚影响CNE1细胞周期与凋亡中的作用。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析。 结果:与对照组比较,和厚朴酚处理组CNE1细胞活力、线粒体膜电位、PCNA与cyclin D1蛋白表达水平显著降低( P值均<0.05),G 0/G 1期细胞比例和TUNEL阳性细胞率显著增加( P值均<0.05)。转录组分析结果发现,差异基因主要富集在Wnt信号通路、肿瘤坏死因子通路和Hippo信号通路等。和厚朴酚处理后,细胞中YAP mRNA表达和细胞核中YAP蛋白表达水平降低,p-YAP蛋白水平升高,较对照组差异有统计学意义( P值均<0.05)。与和厚朴酚组比较,XMU-MP-1+和厚朴酚组细胞中的p-YAP蛋白表达水平降低(1.157±0.076比0.479±0.038, t=37.120, P<0.05),细胞核中YAP的蛋白表达水平升高(0.143±0.012比0.425±0.031, t=29.181, P<0.05),G 0/G 1期细胞比例降低[(72.494±3.309)%比(58.747±2.865)%, t=17.265, P<0.05]、细胞凋亡水平减少[(53.158±3.376)%比(29.621±2.713)%, t=28.584, P<0.05]。 结论:和厚朴酚能够引起CNE1鼻咽癌细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,这可能是通过调控Hippo/YAP信号通路来实现的。

尖尾枫化学成分研究

目的:研究马鞭草科植物尖尾枫的化学成分。方法:应用溶剂萃取及柱色谱方法分离尖尾枫的化学成分,通过波谱技术鉴定化合物的结构。结果:从尖尾枫中分离得到10个化合物,分别鉴定为乌苏酸(1)、齐墩果酸(2)、seco-hinokiol(3)、乌发醇(4)、高根二醇(5)、野鸦椿酸(6)、山楂酸(7)、金合欢素(8)、β-谷甾醇(9)、胡萝卜苷(10)。结论:化合物2～10均首次从该植物中分离得到。

日本粗榧果肉中三种二萜类化合物体外抗癌活性研究

目的:观察从日本粗榧果肉中分离得到的三种二萜类化合物18-hydroxyferruginol(A)、kayadiol(B)及hinokiol(C)对人白血病细胞K562和鼠肉瘤细胞S180生长的影响。方法:以人白血病细胞K562为研究对象,采用MTT法检测上述三种二萜类化合物对K562细胞生长的抑制率,用相差倒置显微镜观察细胞形态变化。根据检测结果,对三种化合物进行抗癌活性筛选,将筛选出的有效化合物kayadiol再作用于鼠肉瘤细胞S180,观察其对S180细胞的作用。结果:18-hydroxyferruginol及kayadiol对K562细胞有抑制其增殖的作用;其有效浓度分别是1×10-4mol/L和1×10-8mol/L～1×10-4mol/L,kayadiol对S180细胞也有一定的抑制作用。hinokiol对于K562细胞的增殖没有明显的抑制作用。结论:日本粗榧果肉中分离得到的二萜类化合物18-hydroxyferruginol(A)、kayadiol(B)对人白血病细胞K562的生长具有一定的抑制作用。

香榧叶的化学成分及生物活性研究

目的对香榧Torreya grandis叶进行化学成分和生物活性研究。方法采用MCI-Gel CHP-20、Diaion HP-20、Toyopearl HW-40、Sephadex LH-20、RP18及硅胶等柱色谱法对香榧叶中的化学成分进行分离纯化,根据理化性质和波谱技术(1H-NMR、13C-NMR、HR-ESI-MS)鉴定化合物的结构,采用海虾致死生物活性法和MTT法测定部分化合物的细胞毒活性和抗肿瘤活性。结果从香榧叶醋酸乙酯部位和正丁醇部位共分离鉴定了10个化合物,分别为香榧酯(1)、花柏酚(2)、4-epiagathadial(3)、3,4-二羟基苯甲酸3-O-β-D-葡萄糖苷(4)、脱氢松香酸(5)、反式璎珞柏酸(6)、顺式璎珞柏酸(7)、2-甲氧基-1,4-苯二甲醇(8)、松脂素(9)、β-谷甾醇(10)。其中化合物1～4具有一定的细胞毒活性,对海虾的半数致死浓度(LC50)值分别为7.7、8.0、8.8、4.2μg/m L;化合物4在10μg/m L时对人肝癌细胞Huh7和Hep G2的抑制率最显著,分别为67%和69%。结论以上化合物除化合物10外均为首次从该植物中分离得到。生物活性测定结果表明,化合物1～4具有一定的细胞毒活性;化合物4具有较强的Huh7和Hep G2细胞抑制活性。

牡荆子化学成分研究

目的研究牡荆属植物牡荆Vitex negundo L.var.cannabifolia果实的化学成分。方法采用反复硅胶柱层析、MCI、凝胶柱层析、制备液相色谱法及重结晶等方法,对牡荆子提取物进行分离纯化,根据波谱数据结合理化性质解析得到化合物的结构。结果从牡荆子果实80%乙醇提取物中共分离鉴定22个化合物,从牡荆子石油醚部位分离、鉴定5个化合物,从二氯甲烷部位分离、鉴定17个化合物。其中,9个木脂素类化合物,3个二萜类化合物,1个三萜类化合物,6个黄酮类化合物,3个酚酸类化合物。结论 4β-羟基泡桐素、和厚朴酚与无羁萜为首次从该植物中分离得到。5,7,2',5'-四羟基黄酮为首次从该属植物中分离得到。