水苏碱调节Hippo-YAP信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的探究水苏碱(stachydrine,STA)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠的神经保护作用,并分析其作用机制。方法将新生SD大鼠随机分为假手术组、HIBD组、STA低剂量(5 mg/kg)组、STA中剂量(10 mg/kg)组、STA高剂量(20 mg/kg)组、维替泊芬(10 mg/kg)+STA高剂量(20 mg/kg)组,除假手术组外,其余大鼠构建HIBD大鼠模型。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用Morris水迷宫实验进行认知功能评价,测定各组大鼠脑含水量和脑指数,HE染色、尼氏染色观察脑组织神经元损伤,TUNEL染色观察脑组织神经元细胞凋亡情况,Western blot法检测YES相关蛋白(YES associated protein,YAP)、p-YAP、哺乳动物STE20样蛋白激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)、p-MST1、具有PDZ基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达。结果与假手术组比较,HIBD组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05);与HIBD组相比,STA低、中、高剂量组海马组织损伤改善,尼氏小体增加(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著降低(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著增加(P<0.05);与STA高剂量组相比,维替泊芬+STA高剂量组海马组织损伤加重,尼氏小体减少(P<0.05),神经功能缺损评分、逃避潜伏期、脑组织含水量、脑指数、神经元细胞凋亡率、p-YAP/YAP比值、p-MST1/MST1比值显著增加(P<0.05),穿越平台次数、TAZ表达显著降低(P<0.05)。结论STA可能通过调控Hippo-YAP信号通路、减少神经损伤和神经元细胞凋亡、改善神经功能,发挥对HIBD新生大鼠的神经保护作用。

LncRNA p21调控Hippo-YAP信号通路对小鼠腹主动脉瘤形成的影响及机制

目的 探究长链非编码RNA p21(long non-coding RNA,LncRNA p21)调控Hippo-Yes相关蛋白(Hippo-Yes-associated protein, Hippo-YAP)信号通路对小鼠腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm, AAA)形成的影响。方法 C57BL/6 ApoE-/-通过皮下植入渗透性微泵构建血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠AAA模型。将C57BL/6 ApoE-/-随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、LncRNA p21阴性对照组(sh-NC)、LncRNA p21敲低组(sh-LncRNA p21)。HE和血管弹力纤维染色(VVG)观察血管形态变化;qRT-PCR检测LncRNA p21表达;Western blot检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达;原位末端标记法(TUNEL)染色检测平滑肌细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、cyclinD1及Hippo-YAP信号通路蛋白表达。结果 与sham组相比,model组小鼠血管弹力纤维断裂紊乱,出现明显损伤,且LncRNA p21、MMP-2、MMP-9、caspase-3表达和细胞凋亡率均增加(P<0.01),TIMP-1、cyclinD1和YAP、TAZ表达均降低(P<0.01)。与model组相比,sh-LncRNA p21组小鼠血管弹力纤维断裂及损伤程度减轻,LncRNA p21、MMP-2、MMP-9、caspase-3表达和细胞凋亡率均降低(P<0.01),TIMP-1、cyclinD1和YAP、TAZ表达均增加(P<0.01)。结论 LncRNA p21能够促进小鼠AAA形成,其机制与调控Hippo-YAP信号、促进细胞凋亡、抑制细胞增殖相关。

槐定碱调节Hippo-YAP信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠的改善作用

目的:探究槐定碱(SRI)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠的改善作用,并探究其作用机制。方法:随机取10只SD大鼠为空白组。50只SD大鼠采用脂多糖(LPS)气管滴注法构建ARDS大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、SRI低剂量组、SRI中剂量组、SRI高剂量组、维替泊芬(Verteporfin)+SRI高剂量组,每组10只。造模2 h后SRI低、中、高剂量组分别予低(2 mg/kg)、中(6 mg/kg)、高(12 mg/kg)剂量SRI腹腔注射,Verteporfin+SRI高剂量组在腹腔注射Verteporfin(100 mg/kg)的基础上予SRI腹腔注射(12 mg/kg)。空白组和模型组腹腔注射等体积生理盐水。给药10 h后检测大鼠血氧分压(PaO_(2))、氧指数[PaO_(2)/吸入氧浓度(FiO_(2))]和肺湿/干(W/D)比,HE染色观察肺组织病理变化并进行病理损伤评分,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-10的水平,BCA检测BALF中总蛋白水平,姬姆萨染色检测BALF中巨噬细胞和中性粒细胞数量,ELISA法检测肺组织丙二醛(MDA),比色法检测肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,荧光法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,Western blotting检测肺组织Hippo-YAP通路蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺组织结构破坏,大量炎症细胞浸润;与模型组比较,SRI低、中、高剂量组肺组织结构有所恢复;与SRI高剂量组比较,Verteporfin+SRI高剂量组肺组织损伤加重,肺泡肿胀、变性,炎症细胞浸润明显。模型组大鼠PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)值低于空白组,W/D比、病理损伤评分高于空白组(P<0.05);SRI低、中、高剂量组PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)值高于模型组,W/D比、病理损伤评分低于模型组(P<0.05);Verteporfin+SRI高剂量组PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)值低于SRI高剂量组,W/D比、病理损伤评分高于SRI高剂量组(P<0.05)。模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-10、总蛋白水平及巨噬细胞计数、中性粒细胞计数高于空白组(P<0.05);SRI低、中、高剂量组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β、总蛋白水平及巨噬细胞计数、中性粒细胞计数低于模型组,BALF中IL-10水平显高于模型组(P<0.05);Verteporfin+SRI高剂量组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β、总蛋白水平和巨噬细胞计数、中性粒细胞计数高于SRI高剂量组,BALF中IL-10水平低于SRI高剂量组(P<0.05)。模型组大鼠肺组织MDA、MPO、p-YAP蛋白相对表达量及p-LATS1/LATS1高于空白组,SOD活性及YAP、TEAD1蛋白相对表达量低于空白组(P<0.05);SRI低、中、高剂量组大鼠肺组织MDA、MPO、p-YAP蛋白相对表达量及p-LATS1/LATS1低于模型组,SOD活性及YAP、TEAD1蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05);Verteporfin+SRI高剂量组大鼠肺组织MDA、MPO、p-YAP蛋白相对表达量及p-LATS1/LATS1高于SRI高剂量组,SOD活性及YAP、TEAD1蛋白相对表达量低于SRI高剂量组(P<0.05)。结论:SRI能抑制ARDS大鼠炎症反应和氧化应激,其作用机制可能与激活Hippo-YAP信号通路有关。

阿托伐他汀对慢性心力衰竭大鼠Hippo-YAP信号通路的调控及其对心室重构的影响

目的分析阿托伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)大鼠Hippo-YAP信号通路的调控及其对心室重构的影响。方法将60只SD大鼠随机分成对照组(给予生理盐水)、模型组(腹腔注射阿霉素,制备CHF大鼠模型)、小剂量组(每天给予阿托伐他汀5.6 mg/kg)、大剂量组(每天给予阿托伐他汀11.2 mg/kg),每组15只。检测4组大鼠Hippo-YAP信号通路中的YAP、LATS1、LATS2的表达水平。检测4组大鼠左心室组织的纤维化程度。比较4组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVST)、左心室心肌质量指数(LVMI)等心脏结构指标,以及血浆N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、半乳糖凝集素3(Gal-3)水平差异。评估模型组及阿托伐他汀治疗大鼠的YAP、LATS1、LATS2表达水平与心室重塑指标的相关程度。分析上述指标与CHF大鼠心室重构调控的相关性。结果模型组LVEF水平低于对照组,IVST、LVMI和LVEDD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);大剂量组、小剂量组LVEF水平高于模型组,且大剂量组高于小剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。大剂量组、小剂量组IVST、LVMI和LVEDD水平低于模型组,且大剂量组低于小剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组NT-proBNP、MMP-9和Gal-3水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);大剂量组、小剂量组NT-proBNP、MMP-9和Gal-3水平低于模型组,且大剂量组低于小剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组YAP、LATS1、LATS2mRNA及其蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);大剂量组、小剂量组YAP、LATS1、LATS2mRNA及其蛋白表达水平低于模型组,且大剂量组低于小剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组及阿托伐他汀治疗大鼠的YAP、LATS1、LATS2蛋白表达水平与LVEDD、IVST、LVMI、NT-proBNP、MMP-9及Gal-3呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05)。YAP、LATS1、LATS2为CHF大鼠心室重构的负向调控因素,大剂量阿托伐他汀为保护性因素(P<0.05)。结论阿托伐他汀通过靶向负调控Hippo-YAP信号通路,进而改善CHF心室重构,且其效应呈剂量依赖性。

利多卡因调节Hippo-YAP信号通路对原位肝移植大鼠缺血再灌注损伤的影响

目的探究利多卡因(LID)对原位肝移植(OLT)大鼠缺血再灌注损伤的影响,并分析其作用机制。方法随机将60只大鼠平均分为维替泊芬(Verteporfin)组、LID高剂量组、LID中剂量组、LID低剂量组、模型组和对照组,除对照组大鼠外的其余大鼠构建OLT模型。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-1β和IL-10水平,荧光探针法检测活性氧(ROS),硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(MDA),氮蓝四唑显色法检测超氧化物歧化酶(SOD),分光光度计法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),原位末端标记法(TUNEL)检测肝组织细胞凋亡,蛋白印迹法(Western blot)检测Hippo-YAP信号通路相关蛋白哺乳动物STE20样蛋白激酶(MST1)、磷酸化(p)-MST1、大肿瘤抑制因子1(LATS1)、p-LATS1、Yes相关蛋白(YAP)、p-YAP以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肝组织出现损伤,肝细胞坏死且大量炎性细胞浸润,细胞凋亡率、血清AST、ALT、TBIL、LDH活性、肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、ROS、Bax水平显著升高,肝组织IL-10、SOD、GSH-Px及Bcl-2、p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,LID低、中、高剂量组的肝组织损伤减轻,细胞凋亡率、血清AST、ALT、TBIL、LDH活性、肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、ROS、Bax水平显著降低,肝组织IL-10、SOD、GSH-Px及Bcl-2、p-MST1/MST1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP蛋白表达的水平显著升高(P<0.05);Hippo-YAP信号通路抑制剂Verteporfin逆转了LID对OLT大鼠缺血再灌注损伤的改善作用(P<0.05)。结论LID可能通过激活Hippo-YAP通路,减少炎症反应、氧化应激和肝细胞凋亡,对OLT大鼠肝缺血再灌注损伤发挥改善作用。

南蛇藤素调节Hippo-YAP信号通路对子宫内膜异位症大鼠血管生成的影响

目的:探究南蛇藤素(CEL)对子宫内膜异位症(EM)大鼠血管生成的影响及其对Hippo-YAP信号通路的调节机制。方法:将SD雌性大鼠分为6组:假手术组、模型组、阳性药物组(孕三烯酮)、Verteporfin组(YAP抑制剂)、CEL低、高剂量组,每组12只。检测大鼠子宫内膜的重量和体积;HE染色观察大鼠子宫内膜组织形态变化;免疫组化检测大鼠子宫内膜组织中微血管密度(MVD);ELISA法检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;Western blot检测大鼠子宫内膜组织中VEGF、YAP蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组EM大鼠可见明显的异位子宫内膜组织病灶,间质细胞数量增加,血管增生明显,子宫内膜组织的重量、体积、MVD及VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量、YAP、TAZ、VEGF受体2(VEGFR2)蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组相比,阳性药物组、Verteporfin组和CEL低、高剂量组EM大鼠异位子宫内膜组织逐渐脱落,间质细胞数量减少,结构疏松,且血管明显减少,子宫内膜组织的重量、体积、MVD及VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量、YAP、TAZ、VEGFR2蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:CEL可以通过抑制Hippo-YAP信号通路来抑制EM大鼠的血管生成。

牛蒡子苷元通过调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究牛蒡子苷元调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将人子宫颈鳞癌细胞SiHa分为对照组、低浓度牛蒡子苷元组(5.0μmol/L)、中浓度牛蒡子苷元组(10.0μmol/L)、高浓度牛蒡子苷元组(20.0μmol/L)和高浓度牛蒡子苷元(20.0μmol/L)+TDI-011536组(3μmol/LHippo信号通路抑制剂)。分组处理后,集落形成实验检测细胞活性;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;免疫荧光技术检测细胞中Vimentin和E-Cadherin;蛋白质免疫印迹技术检测p-YAP、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达。结果与对照组比较,低浓度牛蒡子苷元组、中浓度牛蒡子苷元组、高浓度牛蒡子苷元组SiHa的细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达均降低,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达升高(P<0.05);与高浓度牛蒡子苷元组比较,高浓度牛蒡子苷元+TDI-011536组SiHa细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达升高,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。结论牛蒡子苷元可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于Hippo-YAP信号通路探讨黄芩苷干预膝骨关节炎大鼠的疗效和作用机制

目的:探讨黄芩苷干预膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效和作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组,每组10只。将假手术组以外的大鼠采用切断前交叉韧带和切除内侧半月板的方法建立右膝关节KOA模型,假手术组大鼠于右膝关节内侧做一切口后缝合。造模成功后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组大鼠分别按照50 mg·kg^(-1)、100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃;高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠按照100 mg·kg^(-1)的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃,并按照1 mg·kg^(-1)的剂量给予XMU-MP-1溶液腹腔注射;假手术组和模型组大鼠均给予等量生理盐水灌胃。每天给药1次,连续给药30 d。分别于给药前、给药15 d时、给药30 d时测量大鼠双侧膝关节肿胀程度。给药结束后处死大鼠,取大鼠右侧膝关节软骨组织,采用苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理变化,采用Mankin评分标准评价软骨退变情况,采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13表达水平,采用Western blotting检测滑膜组织中切割活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-cysteine aspartic acid specific protease,Cleaved-Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl2 associated X protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、Tafazzin(TAZ)蛋白的表达水平。结果:①大鼠右膝关节肿胀程度。给药15 d时和给药30 d时,高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节肿胀程度均低于模型组、低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节肿胀程度两两比较,差异均无统计学意义(P=0.063,P=0.215,P=0.399;P=0.052,P=0.261,P=0.240)。②大鼠右膝关节软骨组织病理变化。干预结束后,模型组大鼠右膝关节软骨萎缩、排列混乱;低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨萎缩、细胞排序情况均较模型组改善,且高剂量黄芩苷组大鼠的改善情况优于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组。③大鼠右膝关节软骨Mankin评分。干预结束后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨Mankin评分均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高剂量黄芩苷组右膝关节软骨Mankin评分低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000),低剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨Mankin评分低于高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000)。④大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、IL-10、MMP-13表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),IL-10表达水平高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000)。⑤大鼠右膝关节软骨组织细胞凋亡及Hippo-YAP信号通路相关蛋白表达水平。低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);高剂量黄芩苷组大鼠右膝关节软骨组织中Cleaved-Caspase-3、Bax表达水平均低于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),BCL-2、YAP、TAZ表达水平均高于低剂量黄芩苷组和高剂量黄芩苷联合抑制剂组(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000)。结论:黄芩苷干预KOA大鼠,能够缓解膝关节肿胀,抑制炎症反应和细胞凋亡,延缓关节软骨退变,其作用机制可能与激活Hippo-YAP信号通路有关。

连翘苷通过激活Hippo-YAP信号通路抑制结肠癌LS180细胞的恶性生物学行为

目的:探究连翘苷(Phi)通过调控Hippo/YAP信号通路对结肠癌LS180细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20、40、80µmol/L)的Phi处理人结肠癌LS180细胞,MTT法检测24、48和72 h时的细胞活力。将LS180细胞分为对照组、Phi-L(5µmol/L Phi)组、Phi-M(10µmol/L Phi)组、Phi-H(20µmol/L Phi)组、Phi-H+YAP抑制剂维替泊芬(VP)组(20µmol/L Phi+5µmol/LVP),各组均处理24 h。EdU法检测Phi对各组细胞增殖的影响,划痕愈合实验、Transwell小室法分别检测Phi对细胞迁移和侵袭的影响,免疫荧光法和WB法检测Phi对细胞Ki-67表达率和LATS1、YAP和p-YAP、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin表达的影响。构建LS180细胞移植瘤裸鼠模型,观察Phi对移植瘤体积和质量的影响,免疫荧光法和WB法检测移植瘤组织中Ki-67表达率和LATS1、YAP和p-YAP蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,Phi-L、Phi-M和Phi-H组LS180细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、Ki-67阳性率、MMP-2、MMP-9、N-cadherin表达均显著降低(均P<0.05),E-cadherin、LATS1和p-YAP/YAP表达均显著升高(均P<0.05);同时使用VP则部分逆转了Phi对LS180细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用(均P<0.05)。Phi显著抑制裸鼠移植瘤生长,与对照组比较,Phi组裸鼠移植瘤体积、质量和Ki-67阳性率均显著降低(均P<0.05),LATS1和p-YAP/YAP水平均显著升高(均P<0.05)。结论:Phi可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制结肠癌LS180细胞的恶性生物学行为。

白花蛇舌草提取物通过Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化

目的:探讨白花蛇舌草提取物对胰腺癌SW1990细胞上皮细胞间质转化(EMT)的影响,分析其与Hippo-Yap相关蛋白(YAP)信号通路活化的关系。方法:体外培养胰腺癌SW1990细胞,试验分为7组:对照组(不添加任何药物处理),低剂量组(白花蛇舌草提取物20 mg/ml),中剂量组(白花蛇舌草提取物50 mg/ml),高剂量组(白花蛇舌草提取物100 mg/ml),抑制剂组(XMU-MP-1抑制剂),高剂量+抑制剂组,阳性对照组(冬凌草甲素15μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测SW1990细胞凋亡情况;Western blot检测YAP及其磷酸化蛋白(p-YAP)、E钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)、转录因子(Snail)表达情况。结果:与对照组相比,白花蛇舌草提取物不同剂量组SW1990细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组均显著高于中剂量组、低剂量组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组SW1990细胞凋亡率、p-YAP及E-cadherin蛋白表达量均显著降低(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著升高(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著高于高剂量+抑制剂组(P<0.05);与对照组相比,抑制剂组YAP、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达量显著升高(P<0.05),而高剂量组、阳性对照组及高剂量+抑制剂组均显著降低(P<0.05),且高剂量组、阳性对照组显著低于高剂量+抑制剂组(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可能通过活化Hippo-YAP信号通路抑制胰腺癌SW1990细胞EMT的发生。

复方苦参注射液通过调控Hippo-YAP信号通路抑制乳腺癌模型大鼠肿瘤生长和转移的机制研究

目的探讨复方苦参注射液(CKI)对乳腺癌(BC)模型大鼠肿瘤生长和转移的作用,以及对Hippo-YAP信号通路的调节机制。方法将BC细胞MDA-MB-231分为对照组(未处理组),Verteporfin(Hippo-YAP通路抑制剂)组,CKI低、中、高浓度组,采用CCK-8法检测MDA-MB-231细胞存活率;流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-231细胞的迁移能力。构建BC大鼠模型分为对照组,模型组,阳性组(Hippo-YAP通路抑制剂-Verteporfin组),CKI低、中、高剂量组;测量大鼠肿瘤生长情况;HE染色观察肿瘤发生肺转移后肺组织的病理学形态;Western blot检测肿瘤组织中YAP、p-YAP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达。结果体外实验发现,与对照组相比,Verteporfin组和CKI不同浓度组细胞存活率和迁移能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);体内实验显示,与对照组相比,模型组大鼠体内出现肿瘤组织块,肺组织中细胞排列不整齐,肺泡明显皱缩,且间隔增宽,组织异质性明显,YAP、N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高,p-YAP、E-cadherin表达降低(P<0.05);与模型组相比,Verteporfin组和CKI各剂量组大鼠体内肿瘤组织减小,抑瘤率增加,肺组织中细胞排列有序,肺泡皱缩和异质性得到改善,YAP、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,p-YAP、E-cadherin表达升高(P<0.05)。结论CKI可以通过抑制Hippo-YAP信号通路,来抑制BC模型大鼠肿瘤的生长和转移。

葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白通路对宫颈癌中调节性T细胞介导免疫逃逸的有关机制研究

目的探讨葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白(YAP)通路对宫颈癌中调节性T细胞(Treg)介导的免疫逃逸的影响。方法选取BALB/c裸鼠32只作为研究对象,皮下注射人宫颈癌Hela细胞建立裸鼠移植瘤模型,将造模成功的裸鼠按照随机数字表法分为CON组、葫芦素B组、LPA组和葫芦素B-LPA组,每组8只。CON组采用腹腔注射生理盐水,葫芦素B组和LPA组采用腹腔注射剂量0.5 mg/kg的葫芦素B和剂量为3 mg/kg的JAP激活剂LPA,葫芦素B-LPA组采用腹腔同时注射0.5 mg/kg的葫芦素B和3 mg/kg的LPA,每2天给药一次,共处理21 d后取材;采用ELISA试剂盒法比较各组裸鼠血清白介素-2(IL-2)、IL-10和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;采用流式细胞术比较各组裸鼠淋巴细胞CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉状头状螺旋转录因子3(Foxp3^(+))Treg水平;采用Western blot法比较各组瘤组织Foxp3、TGF-β、YAP、大肿瘤抑制基因1(LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)蛋白表达。结果21 d后,葫芦素B组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达低于CON组,LATS1、MST1蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组和CON组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于葫芦素B组,低于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05);葫芦素B-LPA组和葫芦素B组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组的LATS1、MST1蛋白表达高于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葫芦素B可通过调节Hippo-YAP通路抑制宫颈癌中Treg介导的免疫逃逸。

宫颈癌中Hippo-Yes相关蛋白1、雷帕霉素靶蛋白的表达及临床意义

目的探讨Hippo-Yes相关蛋白1(YAP1)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在宫颈癌组织中的表达及意义。方法92例宫颈癌患者作为宫颈癌组,50例宫颈上皮内瘤变(CIN)作为CIN组,因子宫肌瘤行子宫切除的宫颈正常女性50例作为对照组,免疫组化法测定宫颈组织YAP1、mTOR蛋白表达,分析其与宫颈癌病理特点的关系。结果CIN组、宫颈癌组宫颈组织YAP1、mTOR蛋白表达阳性率高于对照组(P<0.05),宫颈癌组YAP1、mTOR蛋白表达阳性率高于CIN组(P<0.05);临床分期为Ⅲ期、分化程度为低分化、伴宫旁侵犯、脉管侵犯及淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈组织YAP1、mTOR蛋白表达阳性率高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、病理分化程度为中高分化、不伴宫旁侵犯、不伴脉管侵犯及无淋巴结转移的宫颈癌患者(P<0.05),宫颈浸润深度>1/3的宫颈癌患者mTOR阳性率高于宫颈浸润深度≤1/3的宫颈癌患者(P<0.05);宫颈癌癌组织YAP1、mTOR表达呈正相关(r=0.489,P<0.05)。结论宫颈癌患者癌组织YAP1、mTOR蛋白呈高表达,且与肿瘤分期、分化程度、肿瘤侵犯范围及淋巴结转移有关,两者可能协同影响宫颈癌细胞增殖及凋亡调节平衡,诱导宫颈癌发生及进展。

岭南火针通过调控Hippo-YAP信号通路抑制白癜风模型小鼠黑素细胞凋亡

[目的]基于Hippo-YAP信号通路探讨岭南火针对氢醌诱导的氧化应激后白癜风模型的影响。[方法]将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(Control)、模型对照组(HQ)、HQ+卤米松组(Halometasone)、HQ+岭南火针组(FA),每组8只。采用氢醌(HQ)建立白癜风模型。通过脱色评分、HE染色、Masson-Fontana法观察皮肤病理学改变;ELISA法检测各组血浆酪氨酸酶(TYR)、丙二醛(MDA)含量及血清单胺氧化酶(MAO)活性;Western-blot检测皮肤组织YAP1、TP73蛋白表达量;PCR法检测Yap1、Tp73表达水平。[结果]与Control组相比,造模后,小鼠表皮层和真皮层明显增厚,含黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数明显减少,脱色评分明显提高,TYR水平下降,MDA、MAO水平上升,Yap1、Tp73低表达(P<0.01)。经过4周治疗后,Halometasone组、FA组真皮层变薄,皮肤脱色评分下降,黑素细胞毛囊数、基底层黑素细胞数、含黑素颗粒表皮细胞数增加(P<0.05),两个治疗组TYR水平与HQ组相比显著升高(P<0.01),MDA含量与HQ组相比显著下降(P<0.01),FA组MAO活性值与HQ组相比下调(P<0.05)。FA组Yap1和Tp73表达与HQ组相比明显上调(P<0.01),且趋势强于Halometasone组(P<0.05)。[结论]岭南火针可能通过激活Hippo-YAP通路保护黑素细胞免受氢醌诱导的氧化应激损伤,降低氧化应激产物含量及其活性,提升黑素细胞的合成及功能,从而起到促进白斑复色的作用。

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组:空白血清组、桃红四物汤含药血清组(THSWT组)以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组(THSWT+V组),使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组(P<0.01);THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组(P<0.05);THSWT组ALP、OCN、RUNX2、Osterix等成骨关键因子蛋白表达明显高于THSWT+V组及空白血清组(P<0.05)。结论桃红四物汤可促进BMSCs的增殖和成骨分化能力,从而促进骨折愈合,其作用机制为调节Hippo-YAP信号通路,激活其下游关键节点YAP蛋白及TAZ蛋白,诱导BMSCs成骨分化基因转录。

Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用

背景:Hippo-YAP信号通路是一种在不同物种间高度保守的信号级联,在影响生理性心肌肥大的研究中引发广泛关注。研究发现,众多途径如机械力、自噬、能量代谢参与调控运动性心肌肥大,这些途径可能在运动后与Hippo-YAP信号通路发生相互作用,从而影响运动性心肌肥大的形成和发展。目的:总结运动对Hippo-YAP信号通路的影响,阐述Hippo-YAP信号通路在调控运动性心肌肥大中的潜在机制。方法:以“Hippo-YAP信号通路、YAP/TAZ、运动性心肌肥大、心脏、运动”为中文检索词,以“Hippo-YAP signaling pathway,YAP/TAZ,exercise-induced cardiac hypertrophy,physiological hypertrophy,heart,exercise”为英文检索词,检索1983-2022年分别收录在中国知网、PubMed和Web of Science数据库的相关文献,对符合筛选标准的70篇文献进行综述。结果与结论:Hippo-YAP信号通路受到运动的影响,并且在运动诱导的生理性心肌肥大中具有一定的调控作用。①Hippo-YAP信号通路感应运动触发的机械力刺激,导致YAP/TAZ活性和表达发生改变,介导心肌细胞对机械信号的应答。②Hippo-YAP信号通路调节心肌细胞自噬,维护运动中心肌细胞内环境稳态和正常的结构及生理功能。③Hippo-YAP信号通路可能参与运动性心肌肥大发生过程中能量物质的氧化和糖酵解反应,也可能受到运动期间能量变化的影响。④Hippo-YAP信号通路可能在运动的作用下加强与某些生理性心肌肥大相关ncRNA的联系,多种ncRNA可能共同调节Hippo-YAP信号传导。⑤Hippo-YAP信号通路与胰岛素生长因子1/胰岛素生长因子受体等运动性心肌肥大经典途径发生相互作用,运动促进它们之间的信号传导交互,参与调控运动性心肌肥大。⑥深入研究Hippo-YAP信号通路在运动性心肌肥大中的调控作用,有助于深化对运动促进心脏健康的理解,为临床防治心脏疾病和心肌组织构建提供新的思路和策略。

Hippo-YAP信号通路在IFN-γ促神经干细胞增殖中的作用及其机制

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对神经干细胞增殖及自我更新能力的影响;Hippo-YAP信号通路在IFN-γ促神经干细胞增殖以及自我更新能力的作用机制。方法从14~16 d胎鼠海马部提取分离神经干细胞进行体外培养,细胞免疫荧光Nestin染色确定神经干细胞分离成功。分为IFN-γ处理组和PBS对照组,计算神经球体数量及面积。CCK-8法测定神经干细胞增殖能力。实时荧光定量测定Hippo-YAP信号通路主要组分YAP的mRNA水平。蛋白免疫印迹法测定Hippo信号通路主要组分YAP蛋白、Cyclin D1蛋白水平。结果形态学研究显示IFN-γ处理组的神经干球数量及面积与PBS对照组相比增加,差异均有统计学意义(P<0.01);CCK-8试剂盒检测细胞活力显示IFN-γ处理好细胞活力比PBS组提高,差异有统计学意义(P<0.01)。实时荧光定量结果显示IFN-γ处理YAP的mRNA数量增加,差异有统计学意义(P<0.01);蛋白免疫印迹结果显示IFN-γ处理组的YAP蛋白、Cyclin D1蛋白增加,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Hippo-YAP通路在IFN-γ促进神经干细胞的增殖及自我更新能力中发挥重要作用,主要机制是YAP蛋白激活Cyclin D1蛋白,促进神经干细胞的增殖及提高自我更新能力。

Hippo-YAP信号通路调控细胞衰老的分子机制

作为Hippo信号通路的主要效应蛋白,Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)主要通过与转录增强相关结构域(transcriptional enhanced associate domain,TEAD)/非TEAD转录因子结合的方式调控靶基因转录[1]。YAP蛋白的结构主要包括WW结构域(介导非TEAD转录因子的结合)、TEAD结合域(介导TEAD转录因子的结合)、C端转录激活域(介导转录激活)、C末端PDZ结合域(核定位所需)、卷曲螺旋域(介导蛋白质-蛋白质的相互作用)、N末端富含脯氨酸基序(抑制转录活性)和SH3结合基序(介导含SH3结构域蛋白的相互作用)[2]。YAP广泛参与细胞增殖与细胞分化的调控,是不同器官生长与再生所必需的转录共激活因子,在器官再生与再生医学领域被广泛研究[3]。同时YAP通过调控细胞增殖以及凋亡,影响肿瘤的发生、发展与转移,是目前肿瘤相关研究的重点[4]。另外,近年来YAP调控细胞衰老的研究也逐渐增多[5-7]。

周期性张应力作用下Hippo-YAP信号通路调控人牙周膜细胞自噬

目的探究周期性张应力(CTS)作用下人牙周膜细胞(hPDLCs)自噬激活的分子机制。方法分离培养正常牙周组织的hPDLCs,利用Forcel四点弯曲细胞加力仪对hPDLCs加载张应力模拟正畸牙移动过程中正畸力诱导的张力侧hPDLCs自噬,利用XMU-MP-1抑制Hippo信号通路探究Hippo-YAP信号通路在张应力激活hPDLCs自噬中的作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLCs自噬相关基因(Beclin-1、LC3、p62)的表达;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测hPDLCs自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62)及Hippo-YAP通路相关蛋白(active-YAP、p-YAP)的表达;采用免疫荧光染色定位hPDLCs自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、p62)及Hippo-YAP通路相关蛋白(active-YAP)。结果CTS激活hPDLCs的自噬,自噬相关因子表达随加力时间的延长呈先升高后降低的趋势,30 min自噬开始,3 h达到高峰,随后出现下调(P<0.05);CTS促进active-YAP蛋白表达增加,p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。XMU-MP-1抑制Hippo-YAP信号通路后(P<0.05),促进active-YAP蛋白进入细胞核,自噬表达增强(P<0.05)。结论Hippo-YAP信号通路参与CTS作用下hPDLCs自噬激活的调控。

科罗索酸通过抑制Hippo-YAP信号转导通路促进非小细胞肺癌细胞的凋亡

目的:研究科罗索酸对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法:MTT、Caspase3/7活性检测、Western blot等方法检测不同浓度的科罗索酸是否影响肺癌细胞株A549的增殖和凋亡;Western blot、免疫荧光实验等方法检测科罗索酸对肺癌细胞A549 Hippo通路中YAP蛋白进行定量和定位的检测。结果:MTT结果显示科罗索酸能够抑制肺癌细胞株A549的增殖,半抑制浓度为40μmol/L;Caspase活性检测结果显示科罗索酸能够促进肺癌细胞株A549的凋亡,半致死浓度为40μmol/L;Western blot、免疫荧光试验结果显示科罗索酸能明显抑制肺癌细胞株A549中YAP蛋白的表达。结论:科罗索酸可能通过调控Hippo-YAP信号通路抑制肺癌细胞的增殖并促进其凋亡。