空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究

目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时（Real-time）PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌，可以导致人类的急性肠炎与食物中毒，并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测，本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA，建立了针对空肠弯曲菌特异的hipo（hippuricase，马尿酸酶）基因的Real-timePCR方法，用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明，该方法检测细菌的灵敏度为110CFU．人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。

基于hipO基因的环介导等温核酸扩增技术检测食源性空肠弯曲菌

空肠弯曲杆菌是人细菌性胃肠炎的常见食源性致病菌之一,严重危害人类的健康,建立快速精准检测食源性空肠弯曲杆菌的方法,对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究建立了一种可视化、低成本基于hipO基因的环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测空肠弯曲菌的方法。该LAMP方法检测空肠弯曲菌CJFX01基因组DNA为阳性,而对肠出血性大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等食源性致病菌和胸膜肺炎放线杆菌Aha01、副猪嗜血杆菌Ahh01、多杀性巴氏杆菌Ahm03、猪链球菌Ahs02、猪丹毒丝菌Ahe01、支气管败血波氏杆菌Ahb01等猪源致病菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP检测空肠弯曲杆菌的检测限为5.4×10^(1)CFU/mL,而基于F3/B3引物对常规PCR的检测限为5.4×10^(6)CFU/mL,即LAMP检测空肠弯曲杆菌的灵敏度比常规PCR高100 000倍。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、可视化、低成本、特异性好和灵敏度高等优点,适用于实验室和基层食品安全监管部门进行现场快速检测。

妇科肿瘤近距离三维后装放疗不同优化方法的剂量学分析比较

目的比较妇科肿瘤近距离三维后装放疗计划4种不同优化方法的剂量学差异,为妇科肿瘤三维后装治疗优化方法的选用提供依据。方法回顾性选取CT引导下三维后装腔内联合组织间插植/组织间插植的妇瘤患者110例,依据原始图像重新制定4组计划,分别为基于图形优化的正向计划Gro,基于模拟退火逆向优化算法IPSA1、IPSA2(IPSA2是在IPSA1基础上增加体积剂量限值),以及基于混合逆向优化算法HIPO。比较4组计划中CTV的体积剂量参数V_(200)、V_(150)、V_(100)、D_(90)、D_(98)、适形度指数CI,以及膀胱、直肠、乙状结肠D_(2cc)、D_(1cc)、D_(0.1cc)剂量参数。结果正向计划优化时间相较于逆向优化时间较长,其次是HIPO优化。剂量学方面对比,逆向优化HIPO计划的HRCTVD_(90)、D_(98)、V_(100)参数优于正向优化和IPSA,逆向优化IPSA1、IPSA2、HIPO三组的HRCTVD_(90)、V_(100)高于正向优化Gro,差异有统计学意义(P<0.05);4组计划靶区适形指数CI接近,差异无统计学意义(P>0.05);危及器官方面,HIPO计划的膀胱、直肠D_(2cc)所受剂量低于其他3组,对于膀胱吸收剂量,正向优化Gro与IPSA1、HIPO相比差异有统计学意义(P<0.05);对于直肠,IPSA1、IPSA2、HIPO组的D_(2cc)、D_(1cc)参数优于Gro,差异有统计学意义(P<0.05);4组计划的乙状结肠剂量参数接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于妇科肿瘤近距离三维后装放疗计划,正向与逆向优化均能满足临床要求,使用逆向HIPO优化可实现更好的靶区覆盖以及减少膀胱、直肠受量,设计时间也可接受,在计划首次优化时推荐使用,实际临床可结合图形优化人工微调以获得更为个体化的计划剂量分布。

TaqMan PCR快速检测食品中空肠弯曲菌

目的:利用荧光定量PCR技术,建立食品中空肠弯曲菌污染的快速检测方法。方法:以空肠弯曲菌的hipO基因为靶序列,设计引物和探针,优化引物、探针浓度比和Mg2+浓度,对反应体系进行评价。并初步应用于样品的检测。结果:所建反应体系特异性、敏感性和稳定性良好。定量检测低限15cfu/ml。结论:建立了适用于食品中空肠弯曲菌污染快速检测的荧光定量PCR方法。

空肠弯曲菌TaqMan-MGB双重探针实时荧光定量PCR快速检测

目的开发一种特异、灵敏的TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速定量检测。方法针对空肠弯曲菌鞭毛蛋白A和马尿酸酶基因设计特异性引物和探针,建立一种新型TaqMan-MGB双重探针实时荧光定量PCR检测空肠弯曲菌方法,对该方法的定量检测线性范围、特异度、灵敏度、重复性、稳定性进行评价,应用该方法对临床标本中的空肠弯曲菌进行检测,同时用细菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定。结果建立的空肠弯曲菌TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR检测方法专属性强,能准确检出空肠弯曲菌,而与其他细菌无交叉反应,特异度为100%。该技术灵敏度高,能精确定量检测空肠弯曲菌DNA线性范围达10个数量级,最低检测限为4个菌落形成单位。重复性和稳定性良好,组内和组间相对标准偏差均小于1%。应用该方法成功从78例临床标本中定量检出28例空肠弯曲菌阳性标本,用普通PCR和基因克隆测序分析确认,细菌培养方法仅获得6株存活的空肠弯曲菌。结论 TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR具有快速简便、可靠稳定、特异灵敏的优点,可用于临床标本中空肠弯曲菌定量检测,值得推广应用。

多媒体课件脚本规范运用

多媒体课件的脚本是根据课件总体设计方案 ,对各个目标进行的细化描述 .以A类脚本卡和B类脚本卡的形式正确、清晰地反映课件脚本如何围绕课件主题 ,对课件内容进行合理的分析 ,确定每个知识点的表现形式和表现手段 ,将知识单元按拟定的线索展开 .

数字信号处理CAI课件开发

本文主要介绍以Delphi6为开发工具 ,配合其第三方控件SDL6 ,在短期内完成数字信号处理CAI课件的开发过程。

食品中空肠弯曲菌荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

本研究为了实现空肠弯曲菌的快速和便捷检测,建立了一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术(exo-RPA)快速检测空肠弯曲菌的方法。通过对空肠弯曲菌和对照菌株的exo-RPA检测来判断该方法的特异性。用梯度稀释的空肠弯曲菌作为模板进行检测来分析exo-RPA方法的灵敏度。通过对模拟污染样品检测来分析exo-RPA的应用效果。分别以exo-RPA和荧光PCR检测实际食品样品来分析二者的检测效果。空肠弯曲菌exo-RPA方法可特异检出空肠弯曲菌,检测灵敏度达到6.0×10^2CFU/m L。在模拟污染试验中,含2.5×10^1 CFU/m L空肠弯曲菌的增菌液在培养24 h后可以被exo-RPA检测出阳性信号。exo-RPA和荧光PCR对于40份样品的检测结果相同。本研究建立的空肠弯曲菌exo-RPA具有特异、灵敏和抗干扰性强的特点,方法操作简便快速,具有较好的应用前景。

事件驱动的应用系统开发方法学

本文提出一种通用的规范技术用于详细描述进程、进程类、事件和消息。所述方法学基于已经扩展到高层次概念的Ｐｅｔｒｉ网，并注意到许多可供Ｐｅｔｒｉ网使用的形式化分析原理的适应性。这里将其用来扩充ＨＩＰＯ方法和ＮＳ方法，使他们具有规范进程和事件消息的能力。

管理信息系统的初步设计

本文介绍管理信息系统(MIS)初步设计的过程、基本原理、启发式规则和初步设计过程中使用的HIPO图,以及面向数据流的初步设计方法。根据初步设计的原理,分析并改进软件的初步结构,才能得到质量更高的模块和更合理的软件结构。

4G网络课程教学管理系统设计

4G网络课程教学管理系统给广大爱好学习的人提供了一个良好的远程教育平台,使得人们获得知识的成本大大降低。它突破了时空的界线,有别于传统需要往校舍安坐于课室的教学模式。文章采用结构化的方法详细地分析了该系统。在分析过程中,通过使用HIPO图和表间关系图,对系统的数据库进行了详细地设计。

教材管理信息系统开发

近几年来,随着国际互联网、公用数据网、行业网络、地方网络等在国内迅速建立并且互联,计算机网络的覆盖率迅速提高,国内许多大专院校也纷纷组建了自己的校园网。而随着改革开放的不断深入,山东电力系统致力于提高生产效益和服务质量,也在不断地向前发展。在这种情况下,本校作为一所为山东电力培养中等技术人员的学校,为了使学校的教学管理工作进一步科学化、规范化,为师生员工创造良好的工作、学习条件。

宫颈癌淋巴结转移患者增强MRI成像技术参数与Hippo-YAP通路表达相关性分析

目的分析宫颈癌淋巴结转移(LNM)患者动态对比增强磁共振成像(DCE-MRI)技术参数与宫颈癌组织中Hippo-YAP通路yes相关蛋白1(YAP1)表达的相关性。方法选取86例行DCE-MRI检查的宫颈癌患者为研究对象,根据病理检查结果分为LNM阳性27例,LNM阴性59例。利用血流动力学双室Tofts模型,获取宫颈癌原发灶的DCE-MRI定量参数[转移常数(K^(trans))、回流速率常数(K_(ep))、血管外细胞外间隙容积分数(V_(e))]。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测YAP1 mRNA表达。比较LNM阳性和阴性患者DCE-MRI定量参数以及YAP1 mRNA表达,Pearson相关性分析分析宫颈癌LNM阳性患者DCE-MRI定量参数与YAP1 mRNA表达的关系,受试者工作特征曲线(ROC)曲线评估K^(trans)、K_(ep)、V_(e)值与YAP1 mRNA表达对宫颈癌LNM的预测价值。结果LNM阳性组K^(trans)、K_(ep)值以及YAP1 mRNA表达显著高于LNM阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,宫颈癌LNM阳性患者K^(trans)、K_(ep)值与YAP1 mRNA表达呈正相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,K^(trans)、K_(ep)值和YAP1 mRNA表达单独及联合检测预测宫颈癌LNM的ROC曲线曲线下面积(AUC)分别为0.746、0.730、0.734、0.880,且联合检测的AUC较高(P<0.05)。结论宫颈癌原发病灶DCE-MRI定量参数(K^(trans)、K_(ep)值)以及Hippo-YAP通路YAP1表达与患者LNM相关,且K^(trans)、K_(ep)值与YAP1 mRNA表达呈正相关,三项指标联合检测可有效预测宫颈癌LNM的发生。

应用多重PCR快速检测空肠弯曲菌

目的:建立能快速、特异检测空肠弯曲菌的多重PCR技术。方法:选用针对空肠弯曲菌外膜蛋白A(mapA)基因和马尿酸酶(hipO)基因的2对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了鸡肉模拟样品检测。结果:该方法扩增目的基因片段分别为589 bp和323 bp,特异性和灵敏度均高。细菌纯培养物的检测灵敏度为105 cfu/ml,鸡肉模拟样品42℃预增菌36 h后检测灵敏度能达到101 cfu/ml。结论:初步建立能快速、灵敏、特异地测定空肠弯曲菌的多重PCR检测技术。

空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立

为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。

通过环介导恒温扩增技术检测空肠弯曲杆菌

目的建立基于DNA环介导恒温核酸扩增法(LAMP)快速检测空肠弯曲杆菌。方法以空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因(hip O基因)为靶序列,设计6套特异性引物进行LAMP反应,通过比较扩增效率筛选出最佳引物用以快速检测空肠弯曲杆菌。对检测方法的特异性进行验证,敏感性与PCR法比较。结果实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在62℃恒温条件60 min内完成;如果在反应前添加钙黄绿素与氯化锰混合液(FD),黄绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果。LAMP法最低检出限为6.97×10~2拷贝/μl,敏感性为PCR法(6.97×10~3拷贝/μl)的10倍。结论 LAMP法用于快速检测空肠弯曲杆菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果判读方便、敏感性高、特异性强等特点,特别适于现场和基层检疫及医疗机构快速诊断。