抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

血清TRX-1、NLRP3表达水平与儿童功能性消化不良的相关性研究

目的探讨血清硫氧还蛋白1(TRX-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达水平与儿童功能性消化不良(FD)的相关性。方法选取2022年5月至2023年6月就诊于石家庄市妇幼保健院的FD患儿45例为FD组;另选取健康儿童40例为对照组。采用实时荧光定量PCR测定血清TRX-1、NLRP3 mRNA表达水平,Spearman相关分析血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平与FD相关评分的相关性,多因素Logistic回归分析FD发生的影响因素。结果FD组血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05)。轻度组、中度组FD患儿血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平均低于重度组,轻度组TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA水平均低于中度组(P<0.05)。血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平与上腹痛、腹胀或上腹不适、恶心呕吐均呈正相关(P<0.05),与早饱、食欲不振或食量减少、嗳气均无相关性(P>0.05)。血清NLRP3 mRNA表达水平与总分呈正相关(P<0.05),血清TRX-1 mRNA表达水平与总分无相关性(P>0.05)。血清TRX-1 mRNA、NLRP3 mRNA水平升高是FD发生的独立危险因素(P<0.05)。结论血清TRX-1、NLRP3表达水平可能在FD的发病过程中发挥着重要作用。

基于NF-κB/NLRP3/caspase-1通路研究白及多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症损伤的保护作用

目的:探究白及多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)通路蛋白表达及对肠道屏障损伤的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)+乙醇法建立UC模型,并将SD大鼠随机分为空白组、模型组、白及多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、柳氮磺胺吡啶阳性组(0.67 g/kg),除空白组外,其余各组均建立UC模型。白及多糖低、中、高剂量组和阳性组分别灌胃给予相应剂量白及多糖和柳氮磺胺吡啶,空白组和模型组灌胃给予10 ml/kg生理盐水,各组大鼠连续给药2周,1次/d。末次给药12 h后,观察大鼠一般行为并对大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;取大鼠结肠组织,苏木精-伊红染色观察组织病理形态;ELISA检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肠道屏障功能受损指标二胺氧化酶(DAO)和肠型脂肪酸结合蛋白(i-FABP)水平;Western blot检测结肠组织通路蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠形体消瘦、大便稀溏、结肠组织可见黏膜溃疡、充血、扩张及炎症细胞浸润等病理损伤,DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均升高(P<0.05),DAO和i-FABP含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,白及多糖各剂量组及柳氮磺胺吡啶组大鼠DAI评分、结肠组织病理损伤程度、MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05),DAO和i-FABP含量均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,高剂量白及多糖改善效果与柳氮磺胺吡啶相近(P>0.05)。结论:白及多糖可抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路激活,降低炎症反应和肠屏障损伤,改善UC症状和肠黏膜损伤。

Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) of URAT1 (rs7932775) and ABCG2 (rs3825016) on Chronic Kidney Disease Patients with Hyperuricemia

Background: More and more chronic kidney disease (CKD) patients are accompanied with hyperuricaemia. As is known, hyperuricaemia is an independent hazard of both cardiovascular diseases (CVD) and chronic kidney diseases. We aim at identifying Single Nucleotide Polymorphism (SNP) difference of hURAT1 (rs7932775) and ABCG2 (rs3825016) on CKD patient with hyperuricemia and/or gout. Methods: All forty-two CKD patients were divided into two groups: hyperuricemia, and control group. 24 hours urine sample and serum were prepared for testing biochemistry parameters. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method is used to analyze hURAT1 and ABCG2 single nucleotide polymorphisms in different groups. Results: 17 patients have CT SNP of hURAT1 (rs7932775) and 13 patients have CT SNP of ABCG2 (rs3825016) in hyperuricemia group, while only 5 persons and 6 persons have the same mutations in control group respectively. 7 patients have CT SNP of both hURAT1 (rs7932775) and ABCG2 (rs3825016) in hyperuricemia group, while only 2 persons have the same mutations in control group. CT mutation rates of hURAT1 (rs7932775) and ABCG2 (rs3825016) in hyperuricemia group were 60.7% (17/28) and 50% (13/28) respectively, higher than that of control group (35.7% (5/14) and 42.8% (6/14)). What is more, Double SNP mutations in both hURAT1 (rs7932775) and ABCG2 (rs3825016) in hyperuricemia group were 25% (7/28), higher than that of control group (14.2%, 2/14). Conclusion: There are higher mutation rates of CT SNP in hURAT1 (rs7932775) and/or ABCG2 (rs3825016) in hyperuricemia group. We can conclude that hyperuricemia is a high risk factor in progress of CKD, which is necessary to take measures of decreasing serum uric acid to delay CKD progress.

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10^(7) TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌情况;通过CCK-8技术检测A549细胞增殖情况;通过流式细胞术检测A549细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织和A549细胞中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平显著升高,miR-22-3p水平显著降低(P<0.05)。此外,与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织的组织病理损伤水平、炎症反应和细胞凋亡率升高(P<0.05)。与ALI组、sh-NC组相比,抑制MALAT1表达可改善LPS诱导的ALI大鼠肺组织和细胞中的炎症反应和细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p存在相互调控关系。与ALI组、sh-NC组相比,sh-MALAT1组肺组织中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05),miR-22-3p水平升高(P<0.05)。同时,BALF上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05)。此外,下调MALAT1的同时抑制miR-22-3p表达后,细胞中miR-22-3p和Bcl-2表达水平显著降低,细胞增殖水平亦显著降低(P<0.05)。结论降低MALAT1的表达可通过促进miR-22-3p的表达,从而抑制NLRP3的蛋白水平,并最终抑制LPS诱导的ALI模型中的炎症反应和细胞凋亡。

真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65表达的变化以及炎症细胞浸润情况

目的探讨真菌性角膜炎角膜组织NOD1、NF-κBp65的表达变化以及炎症细胞浸润情况。方法取清洁级树鼩25只分成3组,实验组10只,空白对照组10只,正常对照组5只,均取右眼为实验眼。将茄病镰刀菌接种到沙氏葡萄糖琼脂培养基中培养,收集真菌孢子混悬液。实验组用胰岛素针头(29G)在实验眼角膜上皮细胞层做“#”形划痕,结膜囊滴真菌孢子混悬液5μL;空白对照组实验眼结膜囊滴生理盐水5μL,其余步骤同实验组;正常对照组不做任何处理。采用Western blot检测蛋白表达,HE染色观察炎症细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测蛋白阳性表达情况。结果Western blot检测结果显示:实验组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量均明显升高,与正常对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);正常对照组角膜组织中NOD1及NF-κBp65的蛋白相对表达量与空白对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫组织化学染色结果显示:正常对照组及空白对照组角膜上皮细胞胞浆均未见NOD1蛋白表达,实验组NOD1蛋白表达于角膜上皮细胞胞浆,表达强度与时间呈正相关;正常对照组及空白对照组角膜基质层及角膜内皮细胞层均未见NF-κBp65蛋白表达,实验组NF-κBp65蛋白表达于角膜基质层的中性粒细胞及角膜内皮细胞,表达强度与时间呈正相关。HE染色结果显示:正常对照组角膜各层组织结构正常,未见炎症细胞浸润;实验组造模后第1天,角膜水肿,上皮细胞层缺失,基质层见大量炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主;造模后第3天,角膜高度水肿,组织形态消失,炎症细胞浸润数量明显多于第1天,同样以中性粒细胞为主。结论NOD1与NF-κBp65在树鼩镰刀菌性角膜炎角膜组织表达升高,NOD1/NF-κB信号通路在真菌性角膜炎促炎反应中发挥重要作用。

降钙素原对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞NLRP3和caspase-1表达的影响

目的 探讨降钙素原(procalcitonin,PCT)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 (caspase-1)表达的影响。方法 以LPS诱导HUVECs建立脓毒症内皮细胞炎症损伤模型。实验分为两部分:(1)将HUVECs随机分成正常对照组、LPS组(浓度1μg/mL)、PCT组(浓度10 ng/mL)及LPS+PCT组(各组n=3);(2)正常对照组、LPS组、LPS+PCT不同浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)组(各组n=3)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测各组细胞NLRP3、caspase-1 mRNA及其蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组比较,LPS组、PCT组及LPS+PCT组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);与LPS组比较,LPS+PCT组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。(2)与LPS组比较,LPS+PCT不同浓度组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达下调;随PCT浓度增加,NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达逐渐下调(P<0.05)。结论 LPS可促进HUVECs焦亡相关因子NLRP3、caspase-1表达,PCT干预可抑制LPS诱导的HUVECs中焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1的表达,并呈浓度依赖性。

乙型肝炎肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎患者外周血单个核细胞NLRP3和Caspase-1水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨乙型肝炎肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者外周血单个核细胞(PBMCs)核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)水平变化及其预测预后的价值。方法 2018年1月~2020年5月我院诊治的乙型肝炎肝硬化并发SBP患者65例,采用PCR法检测PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平,采用ELISA法检测血清血白介素-1β(IL-1β)和IL-18水平。应用受试者工作特征曲线并计算曲线下面积(AUC)分析各指标对患者预后的预测价值。结果 21例重症组PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平及血清IL-1β和IL-18水平分别为(1.5±0.3)和(2.0±0.4)、(11.7±2.1)pg/mL和(17.4±1.6)pg/mL,显著高于44例轻症组【分别为(1.1±0.2)和(1.6±0.3)、(8.6±1.3)pg/mL和(12.1±1.3)pg/mL,P<0.05】;应用PBMCs NLRP3联合Caspase-1水平评估SBP患者病情严重程度的AUC为0.899,SE(95%CI)=0.036(0.828~0.971);15例死亡组PBMCs NLRP3和Caspase-1 mRNA水平及血清IL-1β和IL-18水平分别为(1.7±0.3)和(2.3±0.5)、(12.5±2.2)pg/mL和(18.2±3.1)pg/mL,显著高于50例生存组【分别为(1.1±0.2)和(1.6±0.3)、(8.9±1.8)pg/mL和(12.7±2.5)pg/mL,P<0.05】;应用PBMCs NLRP3联合Caspase-1水平预测患者预后的AUC为0.916,SE(95%CI)=0.043(0.831~0.999)。结论 乙型肝炎肝硬化并发SBP患者PBMCs NLRP3和Caspase-1水平升高,可能与病情严重程度相关,其机制仍需要研究。

血清NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平与脓毒症患者病情及预后的关系探究

目的研究脓毒症患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、高迁移率族蛋白1(HMG-1)、白细胞介素-10(IL-10)的表达水平状况及与病情和预后结局的相关性。方法选取该院于2022年1-12月收治的180例脓毒症患者作为脓毒症组,180例健康志愿者作为对照组。检测血清NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平,分析对比三者在对照组、脓毒症组血清中的表达水平差异及与病情程度的关系。脓毒症患者入院后均行疾病针对性措施治疗,根据28 d预后进行预后分组,比较不同预后结局患者的NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平及预测脓毒症患者预后结局的效能,以及NLRP3、HMG-1、IL-10不同表达水平患者28 d的生存率,明确脓毒症患者预后结局的影响因素。结果脓毒症组血清NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随着病情的加重,脓毒症患者血清NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平逐渐升高,脓毒性休克患者表达水平高于重度脓毒症患者,重度脓毒症患者表达水平高于轻度脓毒症患者,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组血清NLRP3、HMG-1、IL-10表达水平高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic分析发现,脓毒性休克、快速脓毒症相关序贯器官衰竭评分、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ评分、降钙素原、NLRP3、HMG-1、IL-10是影响脓毒症患者预后结局的独立危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析NLRP3、HMG-1、IL-10预测脓毒症患者预后结局的效能发现,血清NLRP3、HMG-1、IL-10联合预测脓毒症患者预后结局曲线下面积为0.943,高于单一指标预测。血清NLRP3、HMG-1、IL-10在脓毒症中呈正相关(P<0.05)。NLRP3、HMG-1、IL-10高表达组患者生存率低于NLRP3、HMG-1、IL-10低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NLRP3、HMG-1、IL-10高表达于脓毒症患者中,三者可能经促进炎症和细胞凋亡促进病情进展,导致预后不良,与患者病情和预后死亡相关,可作为临床评估脓毒症患者预后的敏感指标。

NLRP1在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其对CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响

目的检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其对OSCC细胞系CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2021年4月至2022年8月贵州省人民医院口腔颌面外科收治的手术患者中原发性OSCC肿瘤组织样本及癌旁正常组织样本各40例,采用反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例OSCC组织及对应癌旁正常组织中NLRP1信使RNA(mRNA)的表达情况,结合患者临床病理参数进行相关性分析。利用RT-qPCR检测NLRP1在OSCC细胞系CAL-27和正常口腔黏膜上皮细胞(OMEC)中的表达。通过瞬时转染方式将pcDNA-NLRP1转染至OSCC细胞系CAL-27中构建体外NLRP1过表达细胞模型,转染pcDNA-NC作为阴性对照组,利用RT-qPCR和Western blot检测细胞转染效率,采用细胞计数试剂-8法检测过表达NLRP1对CAL-27细胞增殖的影响。利用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测CAL-27细胞迁移和侵袭能力。结果OSCC组织中NLRP1 mRNA表达显著低于癌旁组织[0.49(0.13,0.99)比1.02(1.00,1.03)](Z=4.224,P<0.001)。肿瘤浸润范围T 1~2期患者NLRP1 mRNA表达量高于T 3~4期[0.64(0.38,1.36)比0.40(0.06,0.65)](P<0.05);临床分期Ⅰ~Ⅱ期患者NLRP1 mRNA表达量高于Ⅲ~Ⅳ期患者[0.78(0.47,2.96)比0.40(0.97,0.82)](P<0.05)。RT-qPCR分析结果显示,CAL-27细胞中NLRP1的表达显著低于OMEC细胞(1.022±0.018比0.389±0.014)(t=47.702,P<0.001)。RT-qPCR结果显示,NLRP1过表达组NLRP1相对表达量高于阴性对照组(6.148±0.418比1.042±0.018)(t=21.137,P<0.001);Western blot结果显示,NLRP1过表达组NLRP1蛋白表达量高于阴性对照组(2.009±0.253比1.000±0.129)(t=6.155,P<0.001)。Transwell小室侵袭实验结果显示,pcDNA-NLRP1转染CAL-27细胞24 h后,NLRP1过表达组细胞侵袭数少于阴性对照组[(51.4±1.1)个比(77.0±5.0)个](t=8.693,P<0.001)。Transwell小室迁移实验结果显示,NLRP1过表达组细胞迁移数显著少于阴性对照组[(61.6±5.2)个比(73.1±3.3)个](t=3.225,P=0.032)。划痕愈合实验结果显示,NLRP1过表达组细胞迁移面积小于阴性对照组,细胞迁移率低于阴性对照组[(14.2±2.0)%比(34.8±6.8)%](t=5.049,P=0.007)。结论NLRP1在OSCC组织中表达水平下调,并与浸润范围及临床分期有关,上调NLRP1表达可抑制CAL-27细胞的增殖、迁移和侵袭。

细胞焦亡相关蛋白在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系

目的:探究细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系。方法:选择2020年1月至2023年1月于常熟市中医院妇产科就诊并分娩的胎膜早破孕妇135例作为观察组,另选择同期产检并分娩的健康孕妇135例作为对照组,比较两组孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达。依据妊娠结局将135例胎膜早破孕妇分为妊娠不良组(n=50)和妊娠良好组(n=85),通过单因素和多因素Logistic分析胎膜早破孕妇妊娠不良的独立危险因素;应用Logistic回归模型结合限制性立方样条(restricted cubic splines,RCS)分析胎膜早破孕妇胎膜组织中细胞焦亡相关蛋白表达量与妊娠不良的剂量反应关系;依据独立因素构建列线图预测模型,并对模型进行验证。结果:观察组胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达显著高于对照组(P<0.001)。就诊时间≥2 h、生殖道感染、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA高表达是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素(P<0.05);RCS结果显示,胎膜早破孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表达量与妊娠结局不良呈非线性剂量反应关系,在NLRP3 mRNA表达量为1.20(OR=1.818,95%CI:1.673~1.932)和Caspase-1 mRNA表达量为1.25(OR=2.735,95%CI:1.132~3.821)处发生妊娠结局不良的风险最大;构建的列线图预测模型具有良好的区分度、准确性和临床适用性。结论:NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA在胎膜早破孕妇胎膜组织中呈高表达,二者是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素,随着表达量升高,胎膜早破孕妇妊娠不良的危险性也随之升高。

黄芪多糖通过减轻免疫炎症抑制病毒性肝炎小鼠肝损伤

目的:观察黄芪多糖对病毒性肝炎小鼠肝损伤的影响,并探讨其是否能通过调控核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)/受体相互作用蛋白2(RIP2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路介导的免疫炎症发挥肝保护作用。方法:将60只雌性C3H/HeJ小鼠,采用随机数字表法分为建模组(50只)和正常组(10只)。建模组采用3型鼠肝炎病毒(MHV-3)腹腔注射建立病毒性肝炎小鼠模型,并于确定建模成功后将存活小鼠采用随机数字表法分为胸腺肽组(10μg)、黄芪多糖低、中、高剂量组(腹腔注射100、200、400 mg/kg黄芪多糖冻干溶于1 ml/100 g体质量的生理盐水)、模型组。模型组和正常组予以等量生理盐水腹腔注射,各组均每天给药1次,连续1个月。结果:经肝组织苏木素-伊红(HE)染色和病毒空斑数检测证实建模成功;与正常组比较,模型组小鼠肝脏指数,血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-8水平,肝组织病毒空斑数,肝组织NOD1、RIP2、NF-κB p65表达与p-NF-κB p65水平均升高(P<0.05),肝组织呈严重病理改变;与模型组小鼠比较,胸腺肽组和黄芪多糖各剂量组肝脏指数,血清ALT、AST、TBIL、TNF-α、IL-1β、IL-8水平,肝组织病毒空斑数,肝组织NOD1、RIP2、NF-κB p65表达与p-NF-κB p65水平均下降(P<0.05),肝组织病理改变均减轻,且黄芪多糖的作用呈剂量依赖性,胸腺肽组与黄芪多糖中剂量组比较上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:黄芪多糖可改善病毒性肝炎小鼠的肝功能,减轻炎症反应和肝组织病理改变,降低病毒水平,推测与抑制NOD1/RIP2/NF-κB通路,下调NOD1、RIP2、NF-κB p65 mRNA与蛋白表达,抑制NF-κB p65磷酸化有关,且高剂量的黄芪多糖效果最佳,并优于胸腺肽-α1。

组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2通过调控巨噬细胞焦亡抑制动脉粥样硬化

目的:探讨组氨酸三联体核苷酸结合蛋白2(HINT2)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其可能机制。方法:分离胸痛患者的外周血单个核细胞(PBMCs)并诱导分化为巨噬细胞,检测细胞中HINT2的表达水平。体外培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,检测细胞上清液炎症因子的水平及细胞死亡情况。建立载脂蛋白E基因敲除(apoE^(−/−))小鼠AS模型,检测小鼠主动脉根部斑块形成及巨噬细胞的脂质代谢和泡沫化程度。RT-qPCR和Western blot法检测RAW264.7细胞和apoE^(−/−)小鼠主动脉内焦亡相关因子的表达水平。结果:急性冠脉综合征患者PBMCs源性巨噬细胞中HINT2的表达水平显著降低,且与血清中促炎因子水平呈负相关,与抗炎因子水平呈正相关,提示HINT2可能抑制AS的炎症反应。体外实验结果表明,过表达HINT2基因能够抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下巨噬细胞的脂质积累和泡沫化,降低细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α等炎症因子的分泌,减少细胞死亡和焦亡相关因子的mRNA及蛋白表达。动物实验结果表明,过表达HINT2基因能够减轻apoE^(−/−)小鼠主动脉根部的斑块负荷,降低巨噬细胞的泡沫化程度,抑制焦亡相关因子核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、caspase-1、消皮素D(GSDMD)、IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白表达。结论:HINT2可以抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡,减轻AS过程中的炎症反应,减缓AS的发生与发展。

焦亡相关炎症因子与痛风性关节炎疾病活动度的相关性研究

目的分析焦亡相关炎症因子在痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者不同病程中的表达水平,探讨细胞焦亡是否参与GA的病理生理过程。方法收集2022年6月至2023年6月就诊于中日友好医院风湿免疫科50例急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者(AGA组)和50例健康体检者(健康对照组)的外周静脉血样本,分别检测两组患者血清生化指标、血常规指标及焦亡相关炎症因子如C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-18的表达水平;蛋白免疫印迹法检测尿酸钠结晶刺激的THP-1细胞中焦亡相关蛋白水平变化。采用SPSS统计学软件对受试者的尿酸水平、疾病活动度等指标进行统计分析。结果与健康对照组相比,AGA组患者外周血血清尿酸(uric acid,UA)、白细胞、CRP、IL-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Ca^(2+)水平显著升高,Mg^(2+)水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);AGA组急性发作期UA、白细胞、CRP、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、Ca^(2+)和数字分级评分法(numerical rating scale,NRS)评分显著高于缓解期,Mg^(2+)水平显著降低(P<0.05);NRS评分与血清IL-1β、IL-8、IL-18水平呈正相关(P<0.05)。尿酸钠结晶刺激的THP-1细胞中焦亡相关功能蛋白表达水平显著高于无特殊处理的THP-1细胞。结论GA患者焦亡相关炎症因子水平高于健康对照者,且GA急性期焦亡相关炎症因子水平高于GA缓解期,提示细胞焦亡可能参与了GA的免疫炎性反应。

三联组氨酸核苷酸结合蛋白1与人类疾病

三联组氨酸核苷酸结合蛋白1(HINT1)是三联组氨酸蛋白超家族成员之一,三联组氨酸因为具有保守的核苷酸结合基序组氨酸-x-组氨酸-x-组氨酸-xx(x代表1个疏水氨基酸)而得名,HINT1广泛参与肿瘤、神经精神疾病等人类疾病的病理生理过程。本文主要综述HINT1的结构、分布、酶活性基本功能,以及与人类疾病的关联。

NLRP3、PYCARD、CASP1在痛风性关节炎患者中的变化特点及其临床意义

目的:目的探讨外周血单个核细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(CASP1)、凋亡相关斑点样蛋白(PYCARD)在痛风性关节炎(GA)患者中的变化特点及其意义。方法:选取我院2016年2月至2017年4月确诊的90例GA患者(GA组)、选取健康体检志愿者90例(对照组),采用RT-PCR技术检测两组NLRP3、PYCARD、CASP1 mRNA表达水平,并按照患者病情、治疗前后进行分层分析,分析GA患者NLRP3、PYCARD、CASP1 mRNA与患者血清炎症因子的关系。结果:GA组患者的NLRP3 mRNA表达水平低于对照组(t=-9.263,P<0.001),GA组患者的PYCARD、CASP1 mRNA表达水平高于对照组(t=13.975,t=10.064;P均<0.001);急性GA患者(AGA组)患者的NLRP3、CASP1 mRNA表达水平高于非急性GA患者(NAGA组)(t=8.872,t=12.062;P均<0.001),AGA组和NAGA组的PYCARD mRNA差异无统计学意义(t=0.823,P=0.413);GA组患者的治疗后的NLRP3 mRNA水平显著升高(t=-6.542,P<0.001),CASP1 mRNA、PYCARD mRNA表达水平在治疗后显著降低(t=9.827,t=5.788;P均<0.001);AGA组患者的IL-6、TNF-α表达水平高于NAGA组(t=8.403、5.329,P<0.001);GA组患者的NLRP3 mRNA与IL-6、TNF-α呈负相关关系(r=-0.345、r=-0.524,P<0.001);PYCARD、CASP1 mRNA与GA患者的IL-6、TNF-α呈正相关关系(r=0.645,r=0.682,r=0.634,r=0.713,P<0.001)。结论:GA患者NLRP3、PYCARD、CASP1 mRNA表达水平变化与患者病情及炎症反应程度有关。

建鲤IGFBP1基因的克隆及与增重相关的SNP位点分析

旨为查找建鲤(Cyprinus carpio var.jian)胰岛素样生长因子结合蛋白1(Insulin-like growth factor binding pro-teins 1,IGFBP1)基因上与增重相关的SNP位点。利用基因克隆,Clustal W比较8个个体的DNA序列,筛选SNP位点。并采用PCR-RFLP方法检测了其中2个位点(1b-E1-A210G,1b-E3-C108T)在913尾建鲤(♂469,♀444)中的基因型分布。成功分离得到了建鲤IGFBP1的2条DNA序列,并在1a、1b上分别找到7个和24个SNPs位点,其中,1a外显子上有2个,1b外显子上有4个。检测的2个位点与增重的相关性分析表明:2位点均与雄鱼增重呈极显著相关(P<0.01),其中,增重快的基因型在鱼种阶段分别为GG型和CC型,在成鱼阶段分别为AG型和CC型。与雌鱼鱼种阶段增重相关的位点为A210G,其AG型增重极显著快于AA型(P<0.01),与雌鱼成鱼阶段增重相关的位点为C108T,其CC型、CT型增重极显著快于TT型(P<0.01)。对组合成的9种双倍型与增重的相关性分析表明:雌雄鱼中双倍型D4、D5、D7个体生长显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)快于双倍型D6、D9个体,D4、D5、D7双倍型个体在整个样品中占60%,还存在改良空间。试验检测的2个位点A210G、C108T可作为建鲤增重相关的分子标记应用于育种实践。

玉米组氨酸三聚体核苷结合蛋白基因Zm-HINT1的克隆及其原核表达载体构建

通过RT-PCR方法和基因克隆技术对玉米黄早4HINT1基因进行了分子克隆和序列分析.结果表明,黄早4HINT1 cDNA全长为729 bp,氨基酸序列与动物HINT1有较高的相似度,并且包含HITN1蛋白家族保守的活性位点区域.同时,为进一步研究玉米HINT1基因的理化性质及生物功能,利用PET-28 a构建了黄早4HINT1的原核表达载体.

动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用

目的观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用。方法 HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12液培养于37℃、5%CO2和95%O2的恒温培养箱。将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+si Nlrp3腺病毒(H/R+si Nlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+Scra)组。检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-1(caspase-1)、IL-1β表达,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况。结果与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡。

脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义

目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。