重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达

目的 构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。 方法 用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,与GenBank中的核酸和蛋白序列进行BLAST分析 ,重组的阳性克隆经IPTG诱导培养 ,SDS -PAGE电泳进行表达分析 ,薄层扫描分析融合蛋白的含量。结果 对重组质粒进行酶切和PCR检测 ,证明构建了携带hlyE及ureB基因的重组原核表达质粒 pTrc99A -ureB/hlyE ,核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pTrc99A -ureB/hlyE中所含的Hp -ureB及hlyE与GeneBank中的Hp -ureB和hlyE序列的同源性分别为 97 4 2 % (16 6 3/ 170 7)、99% (910 / 918)。重组细菌JM10 9可表达约 10 0kD的融合蛋白ureB/hlyE ,含量占全菌体蛋白含量的 15 5 %。 结论 构建并鉴定了原核表达质粒pTrc99A -hlyE并高效表达 。

大肠杆菌毒力基因Colv、Stxs和HlyE的PCR检测(英文)

[目的]了解鸡源、猪源、食品源大肠杆菌Colv、Stxs(stx2、stx2e)、HlyE三种致病基因的存在情况。[方法]以44份鸡源、24份猪源、26份食品源的大肠杆菌菌株为试验材料,用PCR扩增方法分别对其Colv、Stxs(stx2、stx2e)和HlyE三种致病基因进行检测。[结果]检测的大肠杆菌菌株中,鸡源大肠杆菌菌株大肠杆菌素基因Colv检出率为25%,猪源大肠杆菌菌株大肠杆菌素基因Colv检出率为4.2%,食品源中没有检出;所有鸡源、猪源、食品源大肠杆菌菌株均没有检出类志贺毒素基因Stx2(Stx2e);鸡源大肠杆菌菌株溶血素E基因HlyE检出率为2.27%,猪源大肠杆菌菌株中没有检出,食品源大肠杆菌菌株溶血素E基因HlyE检出率为7.7%。[结论]大肠杆菌素基因Colv在鸡源和猪源大肠杆菌中有较高的携带率,溶血素E基因HlyE在鸡源和食品源大肠杆菌中也有一定程度的存在。