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从HNRNPC基因角度探讨胰岛素抵抗发生机制
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作者 张义 郑思琦 +1 位作者 关子赫 葛鹏玲 《中南药学》 2023年第8期1979-1984,共6页
目的以HNRNPC基因为研究对象,在细胞水平上,探讨HNRNPC基因、CaSR、PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法建立人肝癌HepG2细胞IR模型,采用基因沉默/过表达技术干扰IR细胞及正常HepG2细胞中HNRNPC的表达。利用qRTPCR、Weste... 目的以HNRNPC基因为研究对象,在细胞水平上,探讨HNRNPC基因、CaSR、PI3K/Akt信号通路与胰岛素抵抗(IR)之间的关系。方法建立人肝癌HepG2细胞IR模型,采用基因沉默/过表达技术干扰IR细胞及正常HepG2细胞中HNRNPC的表达。利用qRTPCR、Western blot技术检测HNRNPC表达水平,以检测沉默及过表达效率;通过Western blot技术检测各组细胞内CaSR蛋白表达量,同时检测IR相关信号通路PI3K/Akt的磷酸化水平;通过GOD-POD实验检测各组细胞葡萄糖消耗量。结果IR-HepG2组HNRNPC基因及蛋白表达升高,CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低;成功沉默及过表达HNRNPC后,IR-HNRNPC-siRNA组CaSR蛋白表达升高,PI3K/Akt信号通路抑制状态有所改善,细胞葡萄糖消耗量提高;HepG2-HNRNPC-OE组CaSR蛋白表达降低,PI3K/Akt信号通路被抑制,细胞葡萄糖消耗量降低。结论HNRNPC基因的高表达可下调CaSR表达,从而降低PI3K/Akt信号通路活性,这可能是IR的发生机制之一。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 hnrnpc基因 CaSR蛋白 PI3K/AKT信号通路
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基于HnRNPC基因探究花旗泽仁改善HepG2细胞胰岛素抵抗机制研究 被引量:2
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作者 李佳欣 陈思琦 葛鹏玲 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2021年第11期29-37,共9页
目的从HnRNPC基因和Pkcζ/Akt/FOXO1通路的角度,深入探讨花旗泽仁治疗胰岛素抵抗(IR)的作用机制,为将花旗泽仁开发为治疗IR的中药新药制剂奠定基础。方法应用qRT-PCR、Western blot、液质联用及GOD-POD实验分别检测细胞内HnRNPC的表达量... 目的从HnRNPC基因和Pkcζ/Akt/FOXO1通路的角度,深入探讨花旗泽仁治疗胰岛素抵抗(IR)的作用机制,为将花旗泽仁开发为治疗IR的中药新药制剂奠定基础。方法应用qRT-PCR、Western blot、液质联用及GOD-POD实验分别检测细胞内HnRNPC的表达量、Cer含量、Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路磷酸化水平及葡萄糖含量。结果于IR细胞内给与花旗泽仁后与IR组进行比较,发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路活性下降且葡萄糖含量减少,结果均有显著性统计学意义(P<0.001);过表达HnRNPC的HepG2细胞给予花旗泽仁后与正常HepG2细胞相比,亦发现HnRNPC蛋白及基因表达量明显降低,Cer含量减少,逆转Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路过度激活状态且葡萄糖含量减少,差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论花旗泽仁可通过减少HnRNPC的表达降低Cer的含量,进而通过抑制Pkcζ/Akt/FOXO1信号通路改善IR。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 hnrnpc基因 神经酰胺 花旗泽仁 蛋白激酶cζ 蛋白激酶B 叉头蛋白
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miR-143-3p靶向调控HNRNPC抑制鼻咽癌的体外转移活性
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作者 张玉琼 符蓉 曹斌 《生物技术》 CAS 2024年第5期576-581,共6页
[目的]探讨miR-143-3p与HNRNPC在鼻咽癌细胞中的相互作用关系。[方法]将鼻咽癌细胞分为4组:miR NC组、miR-143-3p mimic组、pcDNA3.1 NC组和pcDNA3.1 HNRNPC组。用结晶紫染色检测单克隆形成数目、流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时RT-PC... [目的]探讨miR-143-3p与HNRNPC在鼻咽癌细胞中的相互作用关系。[方法]将鼻咽癌细胞分为4组:miR NC组、miR-143-3p mimic组、pcDNA3.1 NC组和pcDNA3.1 HNRNPC组。用结晶紫染色检测单克隆形成数目、流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时RT-PCR和免疫组化实验测定miR-143-3p、HNRNPC的表达水平,蛋白免疫印迹法测定HNRNPC蛋白的表达水平。用生信学方法预测miR-143-3p与HNRNPC的结合位点,荧光素酶报告基因检测miR-143-3p对CNE2细胞HNRNPC活性的调控作用。[结果]miR-143-3p在鼻咽癌组织中的表达水平显著降低(1.25±0.03 vs 3.67±0.06),然而HNRNPC在鼻咽癌组织的表达水平升高(1.32±0.05 vs 0.46±0.03)。此外,miR-143-3p能够靶向抑制HNRNPC表达。在鼻咽癌细胞系中,miR-143-3p mimic处理完细胞之后,鼻咽癌细胞增殖能力受到抑制(58.15±7.28 vs 13.27±3.56),凋亡增加(9.05±0.28 vs 30.07±1.59)%。pcDNA3.1 HNRNPC处理完细胞之后,鼻咽癌细胞增殖能力提高(61.22±5.38 vs 113.57±5.87),凋亡减少(9.33±0.08 vs 5.01±0.09)%。[结论]miR-143-3p在鼻咽癌组织中低表达,miR-143-3p通过靶向作用HNRNPC进而抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进鼻咽癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 miR-143-3p hnrnpc 鼻咽癌 转移 活性 凋亡 增殖 迁移
原文传递
A/U富集片段RNA结合蛋白的固相纯化与鉴定
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作者 孙达权 王莹 刘定干 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第4期386-391,共6页
RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础,因此,分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤.目前,RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多,但各有优缺点.本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应,将A/U富集片段RNA共价... RNA与细胞靶蛋白结合是RNA发挥其生物学功能的重要基础,因此,分离和鉴定RNA结合蛋白是研究RNA功能的必要步骤.目前,RNA结合蛋白的分离和鉴定方法较多,但各有优缺点.本实验利用可溶性碳二亚胺(EDC)介导的缩合反应,将A/U富集片段RNA共价偶联到固相介质amine M-270上,再用固定化RNA经亲和层析从细胞抽提物中分离纯化RNA结合蛋白,并以SDS-PAGE联合质谱分析和Western blotting等方法鉴定RNA特异性结合蛋白.最后通过荧光原位杂交和共聚焦显微镜证明这些RNA特异性结合蛋白确与RNA在细胞内结合.实践证明这一方法简单、高效、易于掌握. 展开更多
关键词 C EBPβ3′UTR A U富集RNA hnrnpc 核酸-蛋白质相互作用
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