猪肺血管紧张素转化酶的提取纯化及其性质研究

新鲜猪肺均浆离心后,经35%～55%饱和度的硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析、DEAESephadex A-50阴离子交换后,得到经SDS-PAGE显示为一条带的ACE纯品。200g猪肺可制备出ACE347.09U,比活力29.029U/mg,活力回收12.53%。用双倒数作图法得出ACE的酶反应动力学常数Km为3.168mmol/L,Vmax为6.165nmol/min。两个月的保藏后,试验证明所提酶活力保持稳定。

猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化

【目的】研究猪肺血管紧张素转化酶(ACE)的提纯方法,为其生产利用提供技术支撑。【方法】以新鲜猪肺组织为试验材料,匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀透析,然后采用离子交换—超滤离心联合法对猪肺ACE粗提物进行纯化,测定ACE的分子量、酶活力、纯化倍数及酶活力回收率。【结果】通过离子交换—超滤离心联合法分离纯化猪肺ACE,可得到相对分子量182 kDa、酶比活力1.2476 U/mg的电泳级纯品ACE,其纯化倍数达357.31倍,酶活力回收率达12.28%。ACE催化反应动力学米氏常数(Km)为0.849mmol/L,最大反应速率(Vmax)为9.775nmol/min。【结论】采用离子交换—超滤离心联合法纯化猪肺ACE能够极大缩短分离与纯化时间,且获得较高的纯化倍数和酶活力回收率,是猪肺ACE的高效纯化方法。

猪肺血管紧张素转换酶的提纯

目的：探讨纯化猪肺血管紧张素转换酶(ACE)的一个简便方法. 方法：将新鲜猪肺匀浆,上清液通过(NH4)2SO4分级沉淀,Sephadex G-200凝胶过滤,DEAE-Sephacel以及羟基磷灰石柱层析. 结果：由251 g猪肺制备出8.18 mg酶蛋白,活力回收为33%,比活力936.43 U/mg蛋白,较上清液提纯233倍.聚丙烯酰胺凝胶电泳(pH 8.5)显示一条带.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测知,相对分子质量为190 000. 结论：该法简便,活力回收高,比活力显著高于同类研究报道的15.6 U/mg蛋白.

猪肺脏中鹦鹉热衣原体的分离

从猪肺脏中分离出鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)。经SPF鸡胚卵黄囊培养分离,并经属特异性抗原和特异性单克隆抗体免疫荧光技术鉴定,从54例猪肺脏中分离出5株鹦鹉衣原体。其中40例病变肺中分离出3株,14例无明显病变肺中分离出2株。5株衣原体均从小猪肺中分离获得。

猪肺源肝素的分离纯化及其成分鉴定

本文报告了从猪肺中用改进后的碱性氯化钠盐解法萃取的粗肝素为原料，以新型分离材料ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ分离纯化，并与ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０进行比较，前者使粗肝素比活由１３．９ＵＳＰ／ｍｇ提高到２０３．６４ＵＳＰ／ｍｇ（美国药典单位），纯化系数达到１４．６５，回收率达８６．９３％，而通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０分离纯化后的肺肝素其比活性提高到１０２．１０ＵＳＰ／ｍｇ，纯化系数为７．３５，回收率为７２．２２％，其比活性、总活性回收率及纯化系数等，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ均优于ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０。纯化相当量粗肝素所需时间、次数亦大大减少，并用醋酸纤维薄膜电泳，高效液相色谱进行性质和纯化鉴定，用红外光谱进行基团分析鉴定。

肝素的定量法

根据核糖核酸酶水解核糖核酸时，在３００ｎｍ波长处光吸收值下降的速率被肝素抑制之特点，用已知量肝素对抑制程度进行定量，制得标准检量线，从而测得未知量的肝素含量．此法简捷方便，一次能测定多个样品．

猪肺的价值与生化制备

本文通过实验研究了目前价廉滞销的大量猪肺(屠宰副产物),通过生化制备手段,得到多种有较高经济价值生化制品的方法。