不同流域光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)子一代及其亲本的线粒体COI基因遗传变异分析

对2组光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)杂交子一代(长江♀×北江♂子一代,北江♀×长江♂子一代)及其亲本(北江♀、♂,长江♀、♂)的线粒体COI基因序列进行了分析。在18个样品中共检测到8个单倍型和35个核苷酸多态位点。通过序列差异分析和遗传距离比较发现,核苷酸序列同源性在98.1%—99.9%之间,遗传分化不明显。杂交子一代的5个单倍型与其母本的2个单倍型的核苷酸同源性在99.4%—99.8%之间。而与父本的同源性分别为98.5%、98.2%、98.2%、98.4%、98.1%。实验结果表明两种杂交子一代的线粒体COI基因严格遵循母性遗传规律。

鱼用催产激素在倒刺鲃属( Spinibarbus )鱼类人工繁殖中的应用进展

倒刺鲃属(Spinibarbus)鱼类是我国地方特色鱼类,其人工繁殖必须借助催产激素。近年来,倒刺鲃属鱼类鱼苗需求激增,供不应求。本文从神经系统和内分泌激素对鱼类性腺发育成熟的调节、倒刺鲃属鱼类的繁殖习性、鱼用催产激素种类、倒刺鲃属鱼类催产激素和使用剂量、催产激素的使用方式和配制等方面综述了鱼用催产激素在倒刺鲃属鱼类人工繁殖中的应用进展,以期为倒刺鲃属鱼类规模化生产提供理论基础和实践方案。

光倒刺鲃对水绵、轮叶黑藻、金鱼藻的摄食选择性及对水质影响

为探究生物操纵光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)控制大型丝状藻水绵藻华的有效性及安全性,研究了不同密度下(0、26、52、104 g/m3)光倒刺鲃对试验环境中水绵、轮叶黑藻、金鱼藻的摄食状况及对水质的影响,通过显微观察初步分析该鱼对水绵的摄食消化机制,进一步探究该鱼对摄食生物不同生长期的摄食偏好。结果表明:光倒刺鲃在低密度(26 g/m3)下,可高强度摄食水绵,且对3种水生植物的摄食选择性为:水绵>轮叶黑藻>金鱼藻;光倒刺鲃对两种生长时期的水绵均大量摄食,且喜食危害较大的成熟水绵,而对轮叶黑藻幼嫩叶片无显著摄食;其对水绵的消化机制与咽喉齿的机械破碎密切有关;在"鱼-草"共生条件下,各处理组营养盐出现先增后降的趋势,低密度组(26 g/m3)21d后,NH3-N、NO3-N、PO4-P均低于其初始水平;光倒刺鲃难以对浮游微藻产生滤食作用及前期营养盐上升,导致各处理组中叶绿素a较对照组(0 g/m3)均显著上升。预期在轮叶黑藻、金鱼藻等沉水植物为主的人工湖泊城市水景及水产养殖中,较低密度投放该鱼,可有效控制水绵泛滥,并兼顾水质,但在浮游微藻易暴发的水域中,不适于单一运用该鱼。

北盘江两种鱼感应流速

体长6～8 cm范围内(P>0.05)白甲鱼与光倒刺鲃的感应流速、相对感应流速均有极显著差异(P<0.001).白甲鱼幼鱼的感应流速、相对感应流速相对体长均有显著差异(P<0.05),光倒刺鲃的感应流速相对体长有显著差异(P<0.05),而相对感应流速相对体长无显著差异(P>0.05);白甲鱼幼鱼与光倒刺鲃幼鱼的感应流速推算公式分别为y=0.001 13x3-0.263x2+2.041 6x-5.144 5,y=-0.000 2x3+0.002 4x2+0.016 2x-0.060 4.试验所得体长(7.772±0.141)cm白甲鱼的感应流速为(0.131 7±0.003)cm/s,相对感应流速为(1.699±0.030)bl/s;体长(6.516±0.114)cm光倒刺鲃的感应流速为(0.077±0.002)cm/s,相对感应流速为(1.187±0.020)bl/s.

不同流速下气泡幕和闪光对光倒刺鲃趋避行为的影响

鱼类运动的定向诱导技术具备重要应用前景,如海洋捕捞和过鱼设施鱼类诱集。目前国内外学者建议通过鱼类对外界环境因子如气泡、光照、声音、水流等响应行为的研究,来探讨鱼类的诱趋技术。其中气泡幕和闪光诱驱鱼技术被认为是鱼类潜在无损伤定向驱导技术之一[1,2]。气泡幕通过管中释放压缩空气产生,闪光则是由光源在短时间内的间歇性变化（包含颜色或光强）形成。

不同蛋白水平饲料对光倒刺鲃幼鱼生长、消化酶及体成分的影响

以初始平均体重为(4.33±0.12) g的光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi Oshima)幼鱼为研究对象,配制6个不同蛋白质含量(D1:24%、D2:28%、D3:32%、D4:36%、D5:40%、D6:44%)的等能试验饲料,研究不同蛋白水平饲料对光倒刺鲃生长、消化酶及体成分的影响。试验在室内养殖系统中进行,每玻璃水箱(80 cm×50 cm×60 cm)饲养30尾,每组3个重复,日投喂量为鱼体重3%～5%,投喂2次,饲养8周。结果显示,光倒刺鲃幼鱼摄食蛋白质含量为40%的饲料后,其增重率(WG)、特定生长率(SGR)及饲料效率(FE)均优于其他组,且肥满度(CF)表现最好;低蛋白组(D1和D2)的饲料干物质表观消化率(ADC)显著高于高蛋白组(D5、D6)(P<0.05)。在肝脏转氨酶和肠道消化酶方面,谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量均在D6组显著高于其他组(P<0.05);低蛋白组(D1、D2)淀粉酶活力显著高于其他组(P<0.05);胰蛋白酶活力随着饲料蛋白质含量的增加显著升高,后趋于平稳;而脂肪酶活力则与饲料蛋白含量呈正相关性,D6组脂肪酶活力最高。在体成分方面,鱼体粗蛋白含量随饲料蛋白水平的上升而增加,在D5组达最高;而粗脂肪含量随饲料蛋白含量的增加呈先升后降的趋势,在D6组降到最低;水分和粗灰分在各组间无明显差异(P>0.05)。综上所述,光倒刺鲃幼鱼在该阶段最适饲料蛋白质量以42.06%为宜。

几种重金属离子对光倒刺鲃胚胎发育的毒性

在水温24~26℃条件下,采用半静止式生物毒性实验法,分析了不同浓度的Cu2＋、Zn2＋、Cd2＋对光倒刺鲃（Spinibarbus hollandi）胚胎发育的毒性效应,以及Cu2＋-Cd2＋、Pb2＋-Zn2＋对光倒刺鲃胚胎发育的联合毒性效应。结果表明,在各种不同浓度的重金属离子溶液实验组中胚胎的孵化率均较低,与对照组差异极显著（P〈0.01）;各种重金属在胚胎发育过程中引起各种畸形;除了Cu2＋≥0.10 mg/L、Cu2＋-Cd2＋≥0.50 mg/L、Pb2＋-Zn2＋≥2.00 mg/L实验组会促进胚胎发育速率外,其余各种离子溶液的各实验组均在不同程度上减慢胚胎的发育速率。3种重金属对光倒刺鲃胚胎发育的毒性效应表现为Cu2＋〉Cd2＋〉Zn2＋。Cu2＋、Cd2＋、Zn2＋、Cu2＋-Cd2＋混合、Pb2＋-Zn2＋混合离子对光倒刺鲃胚胎发育的安全浓度分别为0.009 mg/L、0.065 mg/L、0.023 mg/L、0.011 mg/L、0.523 mg/L。Cu2＋与Cd2＋对光倒刺鲃胚胎的联合毒性为拮抗作用。

三种倒刺鲃的RAPD种质鉴定

利用33个随机引物研究了光倒刺鲃(Spinibarbus hollandiOsh im a)、中华倒刺鲃(S.sinensisB leeker)和倒刺鲃(S.denticulatus donticulatusOsh im a)基因组DNA(RAPD)多态性和种质分子标记。33个随机引物总共扩增得到473条带,多态性片段为365条,占总带的77.2%。其中16个引物共扩增出95个特异性片段,长度主要在200-1 500 bp,光倒刺鲃特有的为23个、中华倒刺鲃特有的为20个、倒刺鲃特有的为28个,这些特异性片段可作为三种倒刺鲃的分子遗传标记。多态性研究表明,种内相似系数分别为:光倒刺鲃0.650 7,倒刺鲃0.697 5,中华倒刺鲃0.818 0。种间遗传距离分别为,中华倒刺鲃和倒刺鲃0.491 5:中华倒刺鲃与光倒刺鲃0.621 7;倒刺鲃与光倒刺鲃0.645 5。

光倒刺鲃与中华倒刺鲃染色体组型研究

采用植物血球凝集素(PHA)体内注射,肾组织细胞体内短期培养,空气干燥法制备了光倒刺鲃、中华倒刺鲃的染色体。并对其组型进行分析研究。结果表明:光倒刺鲃的染色体组型公式是2n=100=18m+30 sm+26 st+26 t,NF=148;中华倒刺鲃的染色体组型公式是2n=100=18m+28 sm+28 st+26 t,NF=146。

漓江光倒刺鲃金线鲃保护区鱼类资源现状调查

漓江光倒刺鲃金线鲃国家级水产种质资源保护区是广西第一个国家级水产种质资源保护区。为了评估保护区对于野生水生生物资源的保护和恢复效果,促进保护区功能的进一步完善,对该保护区开展了一次较为全面的野生鱼类资源现状调查。通过雇请专业渔民记录每日渔获物数据,以及对桂林市农贸市场所售野生鱼类的定期调查,共获得一个年周期的数据。统计表明,该保护区现有野生鱼类74种,较之前的66种增加了8种,分别隶属于6目17科62属。应用G-F指数法统计物种多样性表明,漓江野生鱼类物种多样性也由0.443提高至0.596,说明保护区的设立对于保护和恢复漓江的野生鱼类及其他水生生物资源起着重要的作用,今后应进一步完善保护区的配套设施,保证漓江野生鱼类资源能够尽快地恢复。

光倒刺鲃mc5r基因的克隆及对饥饿的响应

通过同源克隆和染色体步移对光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)黑素皮质素受体-5 (melanocortin receptor-5,mc5r)基因进行了克隆,应用生物信息学方法对mc5r 基因序列和推测的氨基酸序列进行分析,采用荧光定量PCR 技术研究其mRNA 的组织分布、日周期变化以及饥饿再投喂的表达情况。结果表明mc5r 基因长度为1 947 bp,含有1 个987 bp 的外显子,编码329 个氨基酸。通过序列同源比对及系统发育进化分析,光倒刺鲃mc5r 的氨基酸序列与鲤(Cyprinus carpio)、犀角金线鲅(Sinocyclocheilus rhinocerous)的mc5r 同源性达到98%。光倒刺鲃mc5r 在大脑中显著表达,在间脑、心脏的表达量次之,在中脑、小脑表达量较少,在肾脏、胃、肌肉、脾、肠、性腺、肝脏、延脑、眼中微量表达。光倒刺鲃mc5r mRNA 的日周期表达量随昼夜节律而变化,饥饿再投喂实验发现饥饿再投喂组鱼其脑中表达量会显著升高,随后会有下降趋势,表明mc5r 可能与光倒刺鲃的摄食调控有关。

光倒刺鲃、中华倒刺鲃和倒刺鲃氨基酸成分和微量元素的测定

本文对光倒刺鲃,中华倒刺鲃和倒刺鲃18种氨基酸和8种微量元素进行了分析,结果表明:这三种鱼是营养价值很高、滋味很鲜美的鱼类。并且,根据结果氨基酸组成比例,可为该鱼的人工饲养等方面的研究提供理论依据。

中华倒刺鲃和光倒刺鲃肌肉营养品质的比较

对中华倒刺鲃Spinibarbus sinensis和光倒刺鲃Spinibarbus hollandi的肌肉营养成分与营养品质进行了比较。结果表明:中华倒刺鲃和光倒刺鲃肌肉(鲜样)中蛋白质和脂肪含量相对较高;这两种鱼肌肉中均含有17种氨基酸,总量分别为73.61%、68.27%(质量分数,下同,干重),其中7种人体必需氨基酸(不包括色氨酸)分别为氨基酸总量的43.83%、44.09%,必需氨基酸指数(EAAI)分别为71.34%、66.34%,其构成比例基本符合FAO/WHO的标准,4种鲜味氨基酸总量分别为24.22%、22.59%(干重),两种鱼的限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸+酪氨酸;脂肪酸中EPA与DHA含量均较高,矿物元素比值合理。上述分析表明,中华倒刺鲃和光倒刺鲃肌肉均为优质的动物蛋白食品,但中华倒刺鲃的营养品质优于光倒刺鲃。

基于线粒体细胞色素b基因的光倒刺鲃遗传多样性与遗传结构研究

光倒刺鲃(Spinibarbus hollandi)是华南地区重要的经济鱼类,现已成为重要的养殖鱼类之一。为了解光倒刺鲃的遗传多样性及遗传结构特征,作者对8个水系共191尾样本的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因全序列进行了测定与分析。在所有序列中,共有51个变异位点,共检测出16个单倍型,单倍型多样性为0.761,核苷酸多样性为0.012。基于Cyt b基因全序列构建的NJ树显示,所有种群合聚为两大支,其中资江、钱塘江、郁江和柳江的全部样本以及北江、赣江和九龙江的部分样本组成了Ⅰ支,而东江水系的全部样本及北江、赣江和九龙江水系的部分样本则组成了Ⅱ支。单倍型网络图显示,东江的全部单倍型与北江及赣江的部分单倍型有着较近的亲缘关系,而与其他单倍型发生了较大的遗传分化;而九龙江种群内部不同的单倍型间亦有着较大的遗传差异;北江的部分单倍型、柳江及郁江种群的全部单倍型与资江、钱塘江的全部单倍型、赣江和九龙江的部分单倍型之间的亲缘关系亦较为密切。我们推测光倒刺鲃存在两个扩散中心:西江、北江水系扩散中心及东江水系扩散中心。其扩散路径为:西江及北江水系的种群往北向长江水系扩散,长江种群然后往钱塘江及九龙江等水系扩散;东江水系的种群扩散路径可分为3支,一支往北向长江水系扩散,一支往西向北江水系扩散,一支往东向九龙江等水系扩散。AMOVA分析表明,光倒刺鲃地理区之间变异占1.61%,地理区内种群间约占56.47%,种群内的变异占45.14%。错配分析及中性检验显示,全部种群、各个种群在历史上均没有发生过明显的扩张。本研究结果可为光倒刺鲃种质资源保护和利用提供科学依据。

光倒刺鲃不同种群的形态差异分析

[目的]为光倒刺鲃的良种选育提供理论基础。[方法]对3个不同种群(北江、东江、赣江)光倒刺鲃的27个可量性状和22个框架性状进行主成分分析、聚类分析和判别分析。[结果]构建了3个主成分,其贡献率分别为26.026%、15.502%和7.81%,累计贡献率为49.399%。可将3个光倒刺鲃种群分为2个大簇,一簇是赣江,另一簇是北江和东江,聚类分析结果和主成分分析结果相一致。建立的判别公式可区分3个不同地域的光倒刺鲃,其样品判别正确率为100%,交叉验证判别正确率为98.03%。[结论]该研究可为光倒刺鲃的种群鉴定、种质资源保护及其后续良种选育提供基础资料。

基于线粒体DNA控制区序列的珠江和长江水系光倒刺鲃群体遗传变异分析

【目的】明确珠江和长江水系不同光倒刺鲃地理群体的遗传变异及进化关系,为其种质资源保护和可持续开发利用提供科学依据。【方法】从珠江水系(增江、流溪河、北江、连江、漓江、柳江和郁江)和长江水系(阊江、赣江和湘江)的10个支流(群体)采集347尾光倒刺鲃样本,扩增并测定其线粒体DNA(mtDNA)控制区序列;通过MEGA 6.0、DnaSP 6.10和Arlequin 3.5等在线软件统计序列碱基组成、变异位点、遗传距离、核苷酸多样性(π)、单倍型多样性(Hd)及遗传分化系数(Fst),并进行分子变异分析(AMOVA)、核苷酸错配分布分析、中性检验,以及构建单倍型的系统发育进化树和网络结构图。【结果】光倒刺鲃mtDNA控制区序列长度为519 bp,其中T、C、A、G占比平均值分别为32.57%、19.16%、32.16%和16.11%。在所有mtDNA控制区序列中共检测到62个变异位点,34个单倍型;10个光倒刺鲃群体的Hd平均为0.917,π平均为0.0359,遗传距离为0.0018~0.0790,Fst为-0.0007~0.9978。光倒刺鲃mtDNA控制区序列63.46%的分子遗传变异来自各地理分组间;单倍型网络结构图和系统发育进化树均显示,10个光倒刺鲃群体聚类为三大支系,除了有个别交集外,东江水系、西江水系、赣江水系+湘江水系的光倒刺鲃群体分布在3个不同的独立分支上,而北江+流溪河水系群体分别与东江水系群体和西江水系群体有较多交集。10个光倒刺鲃群体的Fu’s Fs为-1.339~23.759,平均为9.857,但P均大于0.05;Tajima’s D为-2.613~2.824,仅有3个群体的Tajima’s D为显著性负值(P<0.05);其核苷酸错配分布图谱呈多峰形式,即珠江和长江水系光倒刺鲃群体尚未发生过种群扩张。【结论】珠江和长江水系光倒刺鲃群体遗传多样性总体上偏低,应加强其种质资源保护,尤其是北江水系群体野生资源相对较丰富宜作为重点保护单元。复杂的地形地貌导致珠江和长江水系光倒刺鲃群体形成明显的地理隔离,群体间已发生明显分化,且受各种人为活动干扰导致其种群收缩,因此亟待采取有效防护措施以保证光倒刺鲃种质资源的可持续利用。

光倒刺鲃人工繁殖技术研究

光倒刺鲃人工繁殖试验结果表明，采用LRH-A3催熟后用3mg／kgPG＋3μg／kg LRH-A2＋3mg／kg DOM催产，光倒刺鲃亲鱼的繁殖率达83．3％；以塑料篮盛受精卵微流水孵化，孵化率达79．8％；光倒刺鲃人工繁殖适宜水温为23-27℃；桂东地区最适宜的人工繁殖季节为5月中旬至6月末。应用小试成果进行生产性试验，共催产雌鱼312尾，其中产卵鱼275尾，亲鱼繁殖率88．1％；获得受精卵59．9万粒，平均受精率87．8％；孵出鱼苗45．7万尾，平均孵化率76．3％。

光倒刺鲃的食性研究

为人工养殖光倒刺鲃,对其食性进行了研究。结果表明,光倒刺鲃为杂食性鱼类,仔鱼的混合营养期为1-2d,除吸收卵黄囊外,还摄食轮虫、小型枝角类和桡足类;稚鱼则由内源性营养转为外源性营养,食物组成为大型枝角类、丰年虫无节幼体、寡毛类和摇蚊幼虫,出现少量有机碎屑;全长21-28mm的稚鱼食料以有机碎屑、植物碎片和人工投喂的配合饲料为主,也有寡毛类及水生昆虫,食性与成鱼基本相同;仔鱼不可逆点为孵出后的第14d;全年的饱满指数平均为130.5,饱满指数（Y）与水温（x）呈直线相关,相关式为：Y=-1.7976＋0.1441x;日粮摄食量与温度有关,冬季低温时日粮摄食量仅为体重的1.26%,适温范围内达4.30%,8月高温时仅有2.32%。

基于COI基因的光倒刺鲃群体遗传多样性与遗传分化研究

[目的]全面了解光倒刺鲃的遗传多样性和遗传结构,为其种质资源保护和利用提供科学依据。[方法]采用自行设计的引物对9条水系共209尾光倒刺鲃样本的线粒体COI基因序列进行测定与分析,并探讨其遗传结构和遗传多样性水平。[结果]在209条COI基因序列中,共检测到12个单倍型,单倍型多样性为0.801,核苷酸多样性为0.0082。单倍型系统树显示,所有群体聚成2支,东江群体的全部样本及北江、赣江和九龙江水系的部分样本组成Ⅰ支,其余样本组成Ⅱ支。单倍型网络分析显示,东江群体单倍型与北江、赣江和九龙江部分个体关系较近,但与其他个体关系相对较远;珠江水系大部分群体与长江、钱塘江、九龙江大部分群体分布于不同的分支。AMOVA分析表明,光倒刺鲃COI基因序列变异主要来自地理区内群体间,占82.33%。错配分析及中性检验显示,大多数群体相对稳定,未发生过群体扩张。[结论]光倒刺鲃群体的遗传多样性总体偏低,应加强对其种质资源的保护;东江水系与珠江水系其他群体既存在一定隔离,又存在着基因交流;珠江水系群体与长江水系群体间分化明显。

不同温度条件下光倒刺鲃胚的发育

为了解温度对光倒刺鲃胚胎发育的影响,观察了在3种温度条件下光倒刺鲃胚胎发育的过程.结果表明:在17℃条件下,胚胎不能完成发育过程;在23℃～25℃及24℃～27℃条件下,胚胎能正常发育,且孵化率均超过95%;在一定的温度范围内,较高的水温条件使胚胎发育阶段时程缩短.24℃～27℃条件下胚胎畸形率稍高,但与23℃～25℃条件相比差异不显著.